郭廷東，唐志立，謝雨洮，張 惠，向 薇

(四川省南充市中心醫(yī)院中藥劑科，四川 南充 637000)

芍黃通便合劑由白芍、大黃、大腹皮、檳榔等組方，具有寬腸通便、行氣導(dǎo)滯、潔腸凈腑的功效，適用于氣機(jī)不暢、腑實(shí)不通引起的便秘，阿片類藥物引起的便秘，術(shù)后便秘等癥[1]。該方是我院臨床應(yīng)用多年的協(xié)議處方，療效確切，目前尚無不良反應(yīng)發(fā)生，因此選為院內(nèi)制劑研發(fā)，便于服用，為臨床便秘提供了新的用藥選擇。筆者以方中君藥白芍有效成分芍藥苷及總的水浸出物為指標(biāo)對其水提取工藝進(jìn)行了考察，以期為擴(kuò)大生產(chǎn)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀，包括2695泵、自動進(jìn)樣器、柱溫箱，2487二極陣列檢測器;電子天平;芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為0736－9912);芍黃通便合劑(南充市中心醫(yī)院制劑室提供，規(guī)格為100mL/瓶，批號為111121);陰性樣品(南充市中心醫(yī)院制劑室);乙腈、磷酸為色譜純，水為超純水，其余試劑試藥均為分析純;試驗所用中藥飲片購于南充市藥業(yè)集團(tuán)中藥飲片廠。

2 方法與結(jié)果

2.1 芍藥苷含量測定[2]

2.1.1 色譜條件

色譜柱:Phenomene C18柱(250 mm ×4.60 mm，5μm);流動相:乙腈 －0.1% 磷酸(20∶80)，流速:1.0 mL/min;檢測波長:230 nm;柱溫:37℃，進(jìn)樣量:10μL。保留時間12min左右。

2.1.2 溶液制備

取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解制成每1mL含68.2μg的溶液，即得對照品溶液。精密量取芍黃通便合劑2mL，加95%乙醇稀釋，搖勻，過濾，取濾液，定容至25mL，即得供試品溶液。按處方組成同法同比例制成不含白芍的陰性樣品，并按供試品溶液的制備方法制備，作為陰性對照品溶液。

2.1.3 方法學(xué)考察

干擾試驗:分別精密量取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各10μL，按上述色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果表明，陰性對照品在芍藥苷保留時間處無色譜峰，樣品溶液中芍藥苷與其他成分分離較好，表明陰性對照品對測定無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密吸取芍藥苷對照品溶液 2，4，8，10，12，15μL進(jìn)樣，測定其峰面積，以峰面積值(Y)對進(jìn)樣量(X)進(jìn)行線性回歸，得方程 Y=1.59 ×106X+5.05(r=0.999 7)。結(jié)果表明，芍藥苷進(jìn)樣量在0.136～1.023μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，結(jié)果的 RSD=0.58%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:取同一批號供試品溶液，分別在 0，2，4，6，8，12 h進(jìn)樣10μL，測定峰面積。結(jié)果的 RSD=0.9%(n=6)，表明供試品在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:取樣品成品液6份，依法制備供試品溶液，進(jìn)樣10 μL 測定。結(jié)果芍藥苷平均含量為 1.613 g/L，RSD=1.3%(n=6)，表明方法的重復(fù)性好。

加樣回收試驗:精密量取已知含量的樣品6份(成品液)，每份 1mL，分別加入對照品溶液 1.5，1.5，1.6，1.6，1.7，1.7mL，按上述樣品制備方法和色譜條件，制備加樣回收供試品溶液并注入高效液相色譜儀，計算平均回收率。結(jié)果見表1。

表1 芍藥苷加樣回收率試驗結(jié)果(n=6)

2.2 水提取最佳工藝研究

2.2.1 因素水平選擇

根據(jù)處方中藥物的性質(zhì)，經(jīng)過初步考察，以提取后濾液中水浸出物與芍藥苷含量為考察指標(biāo)，選取對提取效率影響較大的提取時間(因素A)、提取次數(shù)(因素 B)、加水量(因素 C)作為考察因素，按表2水平，采用 L9(34)正交試驗。

2.2.2 正交試驗

取9份一瓶量處方藥材(大黃除外)，適當(dāng)碎段，按正交設(shè)計方案，煎煮，過濾，濃縮至約100mL。量取濃縮液25mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30min，迅速精密稱定質(zhì)量，以干燥品計算供試品中水溶性浸出物的含量(%)。依據(jù)2.1.2項下供試品溶液的配制方法進(jìn)行樣品處理，在擬訂色譜條件下測定芍藥苷的含量。結(jié)果見表3。

2.2.3 試驗結(jié)果分析

從表3中級差 R值可知，影響水浸出物和芍藥苷含量的因素大小依次為A＞B＞C，即提取時間＞提取次數(shù)＞加水量，最佳提取工藝為A2B2C3，即每次提取1.5 h，提取2次，加水12倍。由方差分析可知，A因素有顯著意義，應(yīng)取A2，B因素稍有影響，但B2、B3差別不大，從節(jié)約能源和縮短工序考慮選擇B2，C因素為不顯著因素，即加水量對提取結(jié)果影響不大。故最佳提取工藝條件選擇為A2B2C1，即提取2次，每次1.5 h，加水8倍。方差分析見表4。

2.2.4 驗證試驗

根據(jù)最佳工藝條件，即8倍水，提取2次，每次1.5 h，提取3批，測得其結(jié)果見表5?？芍?，驗證試驗結(jié)果與正交試驗結(jié)果一致，說明提取工藝條件基本穩(wěn)定可行，確定白芍、大腹皮、決明子、火麻仁、檳榔、白術(shù)等水提取工藝為:8倍水，提取2次，每次1.5 h。

表2 正交試驗因素水平表

3 討論

白芍為方中君藥，試驗表明，白芍能使大腸黏液分泌增加，促進(jìn)小腸、大腸的推動運(yùn)動，并使小腸、大腸含水量增多，對便秘有較好療效[3]，白芍的活性成分是芍藥苷，故本試驗以芍藥苷為評價指標(biāo)之一。大黃致瀉的主要成分為結(jié)合型蒽醌，久煎瀉下作用減弱[4]，大黃在提取過程中，溫度和時間對大黃蒽醌類成分影響較大，研究證明，夾層鍋蒸汽煎煮2次，每次10min，可結(jié)合型蒽醌蒽苷溶出率最高[5]。因此，方中大黃采用單煎，取湯液，配液時加入的方法。

表3 L9(34)正交試驗結(jié)果

表4 方差分析結(jié)果

表5 驗證試驗結(jié)果

[1]任大成.中醫(yī)辨證治療阿片性便秘62例療效觀察[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2007，14(1):72.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010:附錄 36－38.

[3]覃俊佳，覃 平，羅宇東，等.白芍瀉下作用機(jī)理的實(shí)驗研究[J].中國中醫(yī)藥科技，1998:5(3):155－157.

[4]凌一揆.中藥學(xué)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1984:71.

[5]鄭虎占，董澤宏，佘 靖.中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用[M].北京:學(xué)苑出版社，1997:385.