邵 華，黃玉婷，金茂俊，金 芬，王 靜，李 穎

（農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全重點實驗室，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所，北京100081）

QuEChERS-HPLC法測定植物性食品中氟嗎啉的殘留量

邵 華，黃玉婷，金茂俊，金 芬，王 靜，李 穎

（農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全重點實驗室，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所，北京100081）

以蘋果、梨、葡萄、橘子、白菜、西蘭花、菠菜、胡蘿卜、番茄和黃瓜共10種植物性食品為研究對象，建立了植物性食品中氟嗎啉殘留量的QuEChERS-HPLC檢測方法。樣品經(jīng)0.1%冰醋酸乙腈提取，醋酸鈉和無水硫酸鎂鹽析后，取上清液，加入伯仲胺粉分散固相萃取凈化，用配有二極管陣列檢測器的高效液相色譜測定，外標(biāo)法定量。氟嗎啉在0.1～2mg/L的范圍內(nèi)具有較好的線性關(guān)系，氟嗎啉在0.1、0.2、0.5mg/kg三個添加水平平均回收率81%～116%，RSD 2.3%～12.1%，定量限為0.05mg/kg。本方法前處理簡單、快速，適用于多種植物性食品中氟嗎啉殘留量測定。

QuEChERS，分散固相萃取，植物性食品，氟嗎啉

Abstract：A method for determination of flumorph residues in 10 kinds of vegetable foods was established by QuEChERS and HPLC.The proposed method was successfully applied on apple，pear，grape，orange，cabbage，broccoli，spinach，carrot，tomato and cucumber.Flumorph residues were extracted from samples with acetonitrile containing 0.1%acetic acid and simultaneous liquid-liquid partitioning formed by adding anhydrous magnesium sulfate plus sodium acetate following by a simple cleanup step known by dispersive solid-phase extraction.Mixed powders of primary secondary amine （PSA）were simply mixed with acetonitrile extract.The aliquot was determined by HPLC using external standard method.The average recovery of this method was in the range from 81%to 116%at the spiked level of 0.1，0.2，0.5mg/kg into samples，and the RSDs were in the range from 2.3%to 12.1%.The linearity of method was good from 0.1 to 2mg/L，and LOQ≤0.05mg/kg.This method was simple，rapid，and it was applicable for rapid analysis of flumorph residues in lots of vegetable foods.

Key words：QuEChERS；dispersive solid phase extraction（dispersive SPE）；vegetable foods；Flumorph

氟嗎啉是擁有我國自主產(chǎn)權(quán)的新型高效殺菌劑，其檢測方法主要有液相色譜法[1-6]和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[7]，前處理方法主要為固相萃取法[1，2，7]。Hu等[1]建立了固相萃取法-液相色譜測定蔬菜、土壤和水中氟嗎啉的殘留量的方法，閆小軍等[2]建立50%氟嗎啉可濕性粉劑在煙草及土壤中的殘留分析方法，Wang[3]等建立了固相萃取-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定蔬菜和水果中氟嗎啉殘留量的方法。但目前尚無任何氟嗎啉檢測方法標(biāo)準(zhǔn)，因而難以實施對其有效監(jiān)管，急需一種簡單、通用型檢測方法，以加速氟嗎啉殘留檢測方法標(biāo)準(zhǔn)化。QuEChERS法是以分散固相萃取法為基礎(chǔ)研發(fā)的前處理方法[8]，近年在食品安全領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用[9-10]。QuEChERS法不像固相萃取法需要流速控制、活化、淋洗等繁瑣步驟，QuEChERS法操作簡單、省時、省力、廉價、減少溶劑、減少對環(huán)境的污染。工作擬采用QuEChERS法開發(fā)一種簡單、快速、環(huán)境友好、適用于多種植物性食品中氟嗎啉殘留的檢測方法，為植物性食品中氟嗎啉殘留監(jiān)管提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

甲醇 美國Fisher公司，色譜純；伯仲胺（PSA）美國Varian公司；Envi-Carb石墨化碳黑粉（GCB） 美國Supelco公司；佛羅里硅土、無水硫酸鎂、醋酸鈉、冰醋酸、乙腈 北京化學(xué)試劑公司，分析純；無水硫酸鎂 用前在馬弗爐650℃灼燒4h，冷卻后貯于干燥器中備用；氟嗎啉標(biāo)準(zhǔn)品（CAS：211867-47-9） 德國Dr公司，100ng/μL（1mL），純度97.0%。

Alliance 2695高效液相色譜儀：配有二極管陣列檢測器 美國Waters公司；Milli-Q超純水器 美國Millipore公司；Biofuge Stratos高速離心機 美國Thermo公司；K600食品加工機 匈牙利博朗公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品前處理 將植物性樣品取可食部分，用干凈紗布輕輕擦去樣本表面的附著物，采用四分法取樣或直接放入食品加工機中搗碎成勻漿。勻漿放入聚乙烯瓶中于-20℃條件下保存。稱取試樣前，常溫試樣應(yīng)攪拌均勻；冷凍試樣應(yīng)先解凍再混勻。稱取10g試樣（精確至0.01g），于50mL離心管中，加入10.0mL 0.1%冰醋酸乙腈，振蕩，加入4g無水硫酸鎂和1g醋酸鈉，充分振蕩1min，打開塞子放氣后，5000r/min離心2min，取2mL上清液于裝有0.3g無水硫酸鎂和0.1g伯仲胺的10mL離心管中，充分振蕩30s，5000r/min離心2min。取上層清液過0.22μm微孔濾膜，置于樣品瓶中待測。

1.2.2 高效液相色譜條件色譜柱 C18不銹鋼柱（150mm×4.6mm×5μm）；流動相：甲醇∶水（6∶4，v/v）；流速1mL/min；進(jìn)樣量10μL；柱溫25℃；檢測波長240nm。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制與標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 用乙腈將氟嗎啉農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（100ng/μL）稀釋成質(zhì)量濃度分別為0.1、0.2、0.5、1、2.0mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于棕色樣品瓶中，-20℃條件下保存。按照上述液相色譜條件測定，以峰面積為縱坐標(biāo)Y，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)X進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程。

1.2.4 樣品分析 在相同的液相色譜條件下，分別將標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測液注入高效液相色譜儀中，以保留時間定性，以待測液峰面積與標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積比較定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 前處理方法的優(yōu)化

以蘋果、菠菜為研究對象，以GCB、PSA、佛羅里硅土為凈化材料，采用分散固相萃取法進(jìn)行0.5mg/kg氟嗎啉添加回收實驗。在蘋果添加回收實驗過程中，使用GCB凈化時回收率偏低，使用PSA和佛羅里硅土?xí)r回收率分別為96.5%、89.1%。在菠菜添加回收實驗過程中，使用GCB時回收率稍好，PSA和佛羅里硅土?xí)r回收率好。結(jié)果表明，GCB對氟嗎啉農(nóng)藥吸附較強，但是在色素含量高的環(huán)境下，GCB優(yōu)先吸附色素，使得氟嗎啉回收率有所提高?？紤]到方法的通用、統(tǒng)一性，最終確定以回收率高的PSA為凈化材料。

2.2 色譜條件的優(yōu)化

按照上述前處理條件，進(jìn)行蘋果、菠菜0.5mg/kg氟嗎啉的添加回收率實驗，HPLC分析，比較甲醇∶水比例分別為5∶5、6∶4和3∶7的色譜圖，以盡可能保證氟嗎啉與雜質(zhì)分離而又縮短氟嗎啉出峰時間為原則，最終確定流動相比例為6∶4，氟嗎啉標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖如圖1所示。

圖1 0.5mg/kg氟嗎啉標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of 0.05mg/kg flumorph standard solution

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性范圍 按照上述液相色譜條件測定氟嗎啉標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，結(jié)果表明，氟嗎啉在0.1～2mg/L的范圍內(nèi)峰面積與質(zhì)量濃度具有較好的線性關(guān)系，線性回歸方程Y=343000x-106100，R2為0.999738。為了降低基質(zhì)干擾，首先按照上述樣品前處理過程制備蘋果、梨、葡萄、橘子、白菜、西蘭花、菠菜、胡蘿卜、番茄和黃瓜共10種樣品基質(zhì)空白溶液，然后將氟嗎啉農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品分別用樣品基質(zhì)空白溶液定容，分別配制質(zhì)量濃度為0.1、0.2、0.5、1、2mg/L的10種基質(zhì)系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述色譜條件測定，以峰面積為縱坐標(biāo)Y，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)X進(jìn)行線性回歸，結(jié)果氟嗎啉在0.1～2mg/L的范圍內(nèi)具有較好的線性關(guān)系。基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液回歸方程及R2如表1所示。

表1 線性范圍、線性回歸方程及R2表Table 1 The linear range，the linear regression equation and the correlation coefficient

2.3.2 回收率實驗 在上述條件下，以蘋果、梨、葡萄、橘子、白菜、西蘭花、菠菜、胡蘿卜、番茄和黃瓜10種植物性食品為基質(zhì)，分別添加氟嗎啉標(biāo)準(zhǔn)品，使其含量為0.1、0.2、0.5mg/kg，每個濃度水平進(jìn)行5次重復(fù)添加回收率實驗，色譜圖見圖2，氟嗎啉回收率81%～116%，如表2所示。

2.3.3 精密度實驗

2.3.3.1 重復(fù)性 按照國家標(biāo)準(zhǔn)[11]對重復(fù)性的要求，進(jìn)行方法的重復(fù)性實驗，分別進(jìn)行上述10種基質(zhì)0.1、0.2、0.5mg/kg三個水平5次平行添加回收率實驗，RSD 2.3%～12.1%，符合實驗室內(nèi)的重復(fù)性要求。

圖2 樣品加標(biāo)色譜圖Fig.2 HPLC chromatograms of the spiked sample with flumorph standard

表2 添加回收率實驗測定結(jié)果表Table 2 Reverage recoveries for experiment

表3 三家實驗室驗證結(jié)果統(tǒng)計表Table 3 Three laboratory test results

2.3.3.2 再現(xiàn)性 按照國家標(biāo)準(zhǔn)[11]對再現(xiàn)性的要求，在另外三家科研單位進(jìn)行驗證實驗，驗證內(nèi)容包括：線性范圍、回收率實驗、精密度實驗及定量限。驗證結(jié)果經(jīng)過科克倫檢驗、格拉布斯檢驗、狄克遜檢驗后，得到重復(fù)性限r(nóng)和再現(xiàn)性限R如表3所示，符合實驗室間再現(xiàn)性要求。

2.3.4 定量限 四家科研單位（含本單位）進(jìn)行氟嗎啉在蘋果基質(zhì)中0.05mg/kg添加回收率實驗，回收率84%～109%，且信噪比大于10，重復(fù)性限r(nóng)和再現(xiàn)性限R分別為0.002和0.017。故確定該方法中氟嗎啉的定量限為0.05mg/kg。

3 結(jié)論

本研究首次采用QuEChERS-HPLC法測定植物性食品中氟嗎啉的殘留量。以10種植物性食品為研究對象，確定了方法的線性范圍、準(zhǔn)確度、精密度、檢出限。氟嗎啉平均回收率為81%～116%，RSD為2.3%～12.1%，定量限為0.05mg/kg。氟嗎啉沒有最大殘留限量，因氟嗎啉活性優(yōu)于同類殺菌劑烯酰嗎啉，而本方法定量限又滿足烯酰嗎啉最大殘留限量，所以本方法定量限完全符合植物性食品中氟嗎啉殘留檢測要求，是目前氟嗎啉殘留量測定中分析植物性樣品種類最多、而又簡單、快速的方法。

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Detection of Flumorph residue in vegetable foods by using the QuEChERS coupled with HPLC

SHAO Hua，HUANG Yu-ting，JIN Mao-jun，JIN Fen，WANG Jing，LI Ying
（Key Laboratory of Agrifood Safety and Quality，Ministry of Agriculture，Institute of Quality Standards&Testing Technology for Agro-product，Chinese Academy of Agriculture Sciences，Beijing 100081，China）

TS207.5+3

A

1002-0306（2012）16-0070-03

2012-01-05

邵華（1977-），女，碩士，助理研究員，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全。

2011年農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)制定項目（394）。