劉 敏 陳其忠 鄧安彥 周守蓉 吳春磊 穆萬(wàn)洋

1 四川省南充市中心醫(yī)院輸血科 607600； 2 四川省涼山彝族自治州第一人民醫(yī)院

近年來(lái)，我國(guó)的梅毒患者呈逐年增多之勢(shì)，這一現(xiàn)象已引起人們的高度重視。梅毒是由蒼白螺旋體引起的一種慢性性傳播疾病，它的臨床可見(jiàn)癥狀僅見(jiàn)于一期顯發(fā)階段、二期顯發(fā)階段和晚期，非顯發(fā)階段不僅無(wú)可見(jiàn)癥狀，患者也無(wú)自覺(jué)癥狀，梅毒螺旋體（TP）不能在體外培養(yǎng)，只能在活體內(nèi)繁殖，主要對(duì)兔睪丸和眼前房敏感。因此，檢測(cè)病原體只能直接在病灶中采集標(biāo)本后立即做暗視野顯微鏡觀察（RF），因?yàn)槌杀?、操作?fù)雜和檢測(cè)時(shí)效等原因，除研究外，一般不做R－F和兔睪丸感染試驗(yàn)（RIT）。梅毒是由梅毒螺旋體（TP）所引起的一種性傳播疾病，臨床診斷梅毒常需要血清學(xué)檢驗(yàn)的結(jié)果來(lái)支持，根據(jù)TP感染機(jī)體后的特殊的免疫反應(yīng)規(guī)律，其實(shí)驗(yàn)室篩查檢查方法分2類(lèi)：（1）檢測(cè)非特異性梅毒螺旋體抗體，其標(biāo)準(zhǔn)化抗原均為心磷脂、卵磷脂和膽固醇，它們敏感性相同；（2）檢測(cè)特異性梅毒螺旋體抗體?，F(xiàn)在有少數(shù)實(shí)驗(yàn)室在用PCR技術(shù)檢測(cè)TP－DNA和采用梅毒抗體蛋白印跡法（Western－blot）檢測(cè)TP特征蛋白條帶，但是一般都是做研究［1］。正確的認(rèn)識(shí)與評(píng)估梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法，對(duì)于指導(dǎo)臨床診斷具有非常重要的意義，本報(bào)告通過(guò)分析酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA）、甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）3種方法在梅毒診斷中的應(yīng)用，分析其各自應(yīng)用特點(diǎn)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 本院2011年4－12月期間住院及門(mén)診患者12 960例，其中年齡在70歲以上的老年患者2 120例。

1.2 檢測(cè)方法 采靜脈血，分離血清。用TPELISA進(jìn)行 TP－Ab篩查，所有ELISA法 TP－Ab陽(yáng)性標(biāo)本再用TPPA進(jìn)行確證試驗(yàn)且同時(shí)進(jìn)行甲苯胺紅不加熱血清學(xué)試驗(yàn)（TRUST），出現(xiàn)凝集反應(yīng)者判定為T(mén)RUST陽(yáng)性；以ELISA法和TPPA法均陽(yáng)性者判斷為T(mén)P－Ab陽(yáng)性標(biāo)本。上述檢測(cè)均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.3 試劑來(lái)源 ELISA法檢測(cè)試劑盒由珠海麗珠試劑有限公司提供；賽樂(lè)迪（SeIDdia）TPPA診斷試劑盒由日本富士瑞必歐株式會(huì)社提供；TRUST試劑盒由上海榮盛生物技術(shù)有限公司提供。1.4 儀器 洗板機(jī)，酶標(biāo)儀。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

12 960 例患者用ELISA法篩查共檢出TP－Ab陽(yáng)性334例，陽(yáng)性率2.6%；經(jīng)TPPA確診277例陽(yáng)性，陽(yáng)性率2.1%；其余均為假陽(yáng)性。再用TRUST試劑進(jìn)行定性和定量試驗(yàn)，有98例陽(yáng)性，陽(yáng)性率0.8%；滴度1∶1～1∶4。表明TP－ELISA試劑檢測(cè)靈敏度高于TPPA法，其假陽(yáng)性率為0.45%（57／12 683），TRUST 方法檢測(cè)漏檢率為64.62%（179／277）。數(shù)據(jù)分析見(jiàn)表1、2。

表1 12 960例患者用ELISA法檢測(cè)TP－Ab結(jié)果的年齡分布

表2 12 960例患者標(biāo)本TPPA和ELISA檢測(cè)結(jié)果

3 討論

人體感染梅毒后，會(huì)產(chǎn)生兩類(lèi)抗體，一類(lèi)是直接針對(duì)梅毒螺旋體的抗體，另一類(lèi)則是針對(duì)類(lèi)脂質(zhì)的抗體。TP－ELISA是一種基于基因工程的特異性檢測(cè)技術(shù)，特異性抗體在梅毒的潛伏期（約感染后2周）產(chǎn)生，對(duì)二期、潛伏期和治療后的梅毒的敏感性和特異性均較高［2］。TP－ELISA的主要缺點(diǎn)：該法檢測(cè)的是梅毒Ig M及Ig G的混合抗體，梅毒Ig G抗體治愈后相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)仍然存在較高的陽(yáng)性率，甚至終身陽(yáng)性，因此，TP－ELISA陽(yáng)性只說(shuō)明正在感染或曾經(jīng)感染過(guò)，不能判斷梅毒疾病活力與否，所以不能作為療效監(jiān)測(cè)手段。且國(guó)內(nèi)外TP－ELISA試劑盒包被的TP分子抗原一般沒(méi)有經(jīng)過(guò)純化，而且用人血清清蛋白增加吸附性。這樣有可能出現(xiàn)假陽(yáng)性抗原位點(diǎn)。老年人，特別是70歲以上，常伴有心腦血管疾病，或者其他老年性疾病，容易出現(xiàn)機(jī)體免疫功能異常，易產(chǎn)生一些針對(duì)連接用的清蛋白抗體或異常的蛋白質(zhì)。從而干擾TP－ELISA反應(yīng)，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。本組資料結(jié)果顯示：70歲以上老年患者假陽(yáng)性率為0.97%，而70歲以下老年患者假陽(yáng)性率只有0.35%，兩組經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與有關(guān)報(bào)道相符［3］。故對(duì)梅毒的診斷必須結(jié)合臨床表現(xiàn)，否則，可能導(dǎo)致臨床誤診，同時(shí)增加患者的不必要治療、用藥和心理負(fù)擔(dān)。TPPA法檢測(cè)的是梅毒特異性抗體，以明膠顆粒為載體，吸附梅毒螺旋體－Niohols株菌體抗原，克服了TPH A血細(xì)胞自溶而造成漏檢的弊端，臨床實(shí)驗(yàn)室常以TPPA法陽(yáng)性作為確診梅毒的依據(jù)，而梅毒螺旋體試驗(yàn)檢出的抗體可持續(xù)終生，但是在患者伴硬下疳或生殖器官潰瘍疑為T(mén)P感染時(shí)，首次檢查可以為陰性，需隔1～2周重新復(fù)查。人體被梅毒螺旋體感染后，可產(chǎn)生Ig G和Ig M類(lèi)抗體，僅僅憑借TPPA陽(yáng)性就診斷為梅毒，尤其是無(wú)癥狀的老年人，顯然是不正確的［4］。由于TRUST操作方便、價(jià)格低廉，許多醫(yī)院及血站將其作為梅毒抗體的初篩試驗(yàn)，陽(yáng)性標(biāo)本再用TPPA作確證試驗(yàn)。但TRUST檢測(cè)梅毒的陽(yáng)性率較低，假陽(yáng)性較高，不適于作為梅毒的初篩方法。TRUST方便測(cè)定反應(yīng)素滴度，反應(yīng)素在初期梅毒病灶出現(xiàn)后1～2周就可測(cè)出，在二期梅毒滴最高，三期梅毒較低。由于反應(yīng)素對(duì)機(jī)體無(wú)保護(hù)作用，未經(jīng)治療的患者，其血清內(nèi)的反應(yīng)素可長(zhǎng)期存在。經(jīng)適當(dāng)治療后，抗體可以逐漸減少至轉(zhuǎn)為陰性，其滴度變化與梅毒的治療情況呈正相關(guān)，因此適合用于療效觀察、隨訪(fǎng)和復(fù)發(fā)的輔助診斷以及基層醫(yī)院應(yīng)用［5］。某些疾病可引起假陽(yáng)性，如紅斑狼瘡、麻風(fēng)、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、混合結(jié)締組織病等［6］。所以TRUST用于梅毒螺旋體的診斷有很大的局限性。筆者認(rèn)為對(duì)輸血前患者梅毒抗體的檢測(cè)應(yīng)采用敏感性和特異性較高的TP－ELISA法進(jìn)行初篩，可提高梅毒抗體的檢出率；因TP－ELISA在對(duì)老年患者的梅毒篩查中，可出現(xiàn)一定數(shù)量的假陽(yáng)性，需用TPPA作確證試驗(yàn)，可排除假陽(yáng)性患者；最后用TRUST法進(jìn)行檢測(cè)，可判斷其是否為現(xiàn)癥患者，對(duì)疾病嚴(yán)重程度的判斷、療效觀察、是否復(fù)發(fā)或再感染的判斷有非常重要的意義。三種方法相互補(bǔ)充，為臨床提供更為科學(xué)和準(zhǔn)確的結(jié)果。

綜上所述，三種方法每一種方法在臨床上的意義不同。ELISA法是門(mén)診、住院患者梅毒篩查的理想方法。對(duì)于ELISA陽(yáng)性的標(biāo)本最好同時(shí)做TRUST和TPPA檢測(cè)，另外對(duì)梅毒的診斷必須結(jié)合臨床表現(xiàn)，否則可能導(dǎo)致臨床誤診，同時(shí)增加患者的心理及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

［1］ 馬開(kāi)富，劉勝武.梅毒血清學(xué)診斷實(shí)驗(yàn)方法研究進(jìn)展〔J〕.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，11（33）：63－65.

［2］ 程艷杰，王廣杰，王旭梅，等.梅毒螺旋體血清學(xué)檢測(cè)方法的實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)〔J〕.中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2005，19（8）：503－504.

［3］ 何杜.輸血前患者血清梅毒螺旋體抗體檢測(cè)結(jié)果分析〔J〕.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2012，47（8）：736－737.

［4］ 王柳溪.TP－ELISA法檢測(cè)老年人梅毒抗體易產(chǎn)生假陽(yáng)性原因分析〔J〕.醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2008，21（9）：1085－1086.

［5］ 黨倩麗，馮捷，張小艷，等.梅毒螺旋體特異性抗體對(duì)梅毒早期診斷和治療的評(píng)價(jià)〔J〕.臨床皮膚科雜志，2005，34（2）：90－92.

［6］ 陳雪.三種梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法應(yīng)用評(píng)價(jià)〔J〕.實(shí)用醫(yī)技雜志2011，99（18）：948－949.