李娜，陸嘉惠，b，，①，田潤煒，秦忠立，李學(xué)禹

(石河子大學(xué):a.生命科學(xué)學(xué)院，b.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)綠洲生態(tài)農(nóng)業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，c.甘草研究所，新疆石河子832003)

不同栽培齡期光果甘草不同部位總黃酮含量的分析

李娜a，陸嘉惠a，b，c，①，田潤煒a，秦忠立a，李學(xué)禹c

(石河子大學(xué):a.生命科學(xué)學(xué)院，b.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)綠洲生態(tài)農(nóng)業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，c.甘草研究所，新疆石河子832003)

光果甘草(Glycyrrhiza glabraL.)為甘草屬(GlycyrrhizaL.)多年生草本植物，是藥用甘草的原植物之一［1］。甘草屬植物所含的黃酮類成分具有抗血栓、抗氧化、抗腫瘤、抗衰老、增加白細(xì)胞、抗動脈硬化、抗心律失常和抑制HIV等作用［2－5］;光果甘草中的黃酮類成分光甘草定具有良好的抗氧化、抗炎及抗菌作用，應(yīng)用前景廣闊［6］。目前關(guān)于光果甘草總黃酮含量已有一些報道［7－8］，但有關(guān)生長年限對栽培光果甘草總黃酮含量的影響卻很少報道［9－10］，尤其是對不同栽培齡期光果甘草在不同采集時間各部位總黃酮含量的變化規(guī)律缺乏較全面的研究，致使光果甘草藥材生產(chǎn)缺乏有力的理論指導(dǎo)依據(jù)。

作者采用超聲提取及紫外－可見分光光度法對不同采集時間2年生和8年生光果甘草各部位的總黃酮含量進(jìn)行了測定，以期為確定合理的光果甘草采收齡、采收期和采收部位提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

供試2年生和8年生光果甘草均栽植于石河子大學(xué)甘草資源圃，由石河子大學(xué)甘草研究所李學(xué)禹教授鑒定。分別于2010年4月、6月、8月和10月(即萌芽期、生長期、花果期和枯萎期)各采集10株生長狀況一致的植株為樣株(地上部分從6月份開始采收)，將樣株分為葉、莖、水平根莖、垂直根莖、主根、側(cè)根和毛根7個部位，并按莖的節(jié)數(shù)將莖平均分為上部莖、中部莖和下部莖3個部位，著生于上部莖和中部莖上的葉片為上部葉和中部葉(下部莖上的葉片因栽培過密幾乎全部脫落，未進(jìn)行實(shí)驗(yàn))，總計10個部位的樣品。將同一部位樣品混合均勻后置于40℃烘箱中烘干，粉碎并過60目篩，粉末置于干燥閉光處保存、備用。

所用的儀器及試劑和甘草苷標(biāo)準(zhǔn)品批號及來源與文獻(xiàn)［11］相同。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制參照文獻(xiàn)［11－12］采用紫外－可見分光光度法測定標(biāo)準(zhǔn)品溶液的吸光值并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。精密稱取干燥至恒質(zhì)量的甘草苷標(biāo)準(zhǔn)品5.0 mg，用甲醇溶解并定容至5 mL，配制成質(zhì)量濃度1.0 mg·mL－1的甘草苷標(biāo)準(zhǔn)品儲備液。精密吸取0、20、40、60、80、100和120 μL甘草苷標(biāo)準(zhǔn)品儲備液，依次加入500 μL甲醇和250 μL質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)10%KOH，搖勻后于室溫下靜置5 min，用甲醇定容至5 mL，于波長334 nm處測定溶液的吸光值，空白液為250 μL質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)10%KOH和3.75 mL甲醇的混合溶液。

以吸光值為縱坐標(biāo)y、甘草苷質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)x繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:y=0.062 9x－0.004 0，r2=0.999 2，甘草苷質(zhì)量濃度在4.000 0～24.000 0 μg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.2.2 樣品溶液制備及測定分別精密稱取各樣品粉末25.0 mg，參照文獻(xiàn)［11］的方法提取并制備各樣品的總黃酮提取液。精密吸取各部位的總黃酮提取液250 μL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線測定程序于334 nm處測定溶液的吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算總黃酮含量。每個樣品設(shè)3次重復(fù)。

1.2.3 方法學(xué)考察取2010年4月9日采集的2年生栽培光果甘草主根的總黃酮提取液250 μL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線測定程序進(jìn)行處理并測定吸光值，連續(xù)測定6次，RSD為1.52%，表明儀器精密度良好。

精密稱取2010年4月9日采集的2年生栽培光果甘草主根粉末6份，每份25.0 mg，按上述方法制備總黃酮提取液并測定溶液的吸光值，RSD為1.98%，表明本方法的重現(xiàn)性較好。

精密稱取2010年4月9日采集的2年生栽培光果甘草主根粉末6份，每份25.0 mg，按上述方法制備總黃酮提取液，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線測定程序進(jìn)行處理并分別于0、5、10、20、30和 40 min測定溶液的吸光值。隨時間延長，吸光值逐漸降低，但吸光值在5～30 min內(nèi)相對穩(wěn)定，RSD為1.85%，故確定測定時間為5～30 min。

取總黃酮含量已知的2010年4月9日采集的2年生栽培光果甘草主根提取液6份，分別加入20、40、60、80、100和120 μL甘草苷標(biāo)準(zhǔn)品儲備液，按上述標(biāo)準(zhǔn)曲線測定程序進(jìn)行處理并測定溶液的吸光值?；厥章蕿?6.34%～102.44%，平均加樣回收率為98.93%，RSD為2.10%。

2 結(jié)果和討論

不同采集時間2年生和8年生栽培光果甘草各部位總黃酮含量見表1。

由表1可見:2年生植株總黃酮含量的平均值以6月份最高(35.55 mg·g－1)，10月份次之(34.55 mg·g－1)，4月份最低(18.05 mg·g－1)。不同采收期各部位的總黃酮含量均為上部葉最高，中部葉次之，各地下部位居中，下部莖最低;不同部位按4個采收期總黃酮含量平均值從高至低依次排序?yàn)?上部葉、中部葉、毛根、水平根莖、側(cè)根、主根、垂直根莖、上部莖、中部莖、下部莖。其中，2年生植株上部葉總黃酮含量的平均值最高，達(dá)到111.53 mg·g－1;下部莖總黃酮含量的平均值最低，僅為4.22 mg·g－1。1)UL:上部葉Upper leaf;ML:中部葉Middle leaf;US:上部莖Upper stem;MS:中部莖Middle stem;LS:下部莖Lower stem;MR:主根Main root;LR:側(cè)根Lateral root;VRH:垂直根莖Vertical rhizome;HRH:水平根莖Horizontal rhizome;HR:毛根Hair root;M:平均值A(chǔ)verage.－:未檢出Undetected.

表1 不同采收期2年生和8年生栽培光果甘草各部位總黃酮含量的比較1)Table 1 Comparison of total flavonoids content in different parts of two-year-old and eight-year-old cultivated Glycyrrhiza glabra L.at different collection times1)

由表1還可見:8年生植株總黃酮含量的平均值以6月份最高(39.97 mg·g－1)，8月份次之(33.35 mg·g－1)，10月份最低(22.20 mg·g－1)。不同采收期各部位的總黃酮含量均為上部葉最高，中部葉次之，各地下部位居中，下部莖最低;不同部位按4個采收期總黃酮含量平均值從高至低依次排序的順序與2年生光果甘草基本一致，也表現(xiàn)為上部葉最高(97.42 mg·g－1)，下部莖最低(5.32 mg·g－1)。

上述測定結(jié)果表明:2年生和8年生栽培光果甘草各部位總黃酮含量的平均值均為6月份最高，且2種齡期植株的總黃酮含量無明顯差異，分別為35.55和39.97 mg·g－1，所以2年生栽培光果甘草也可以作為藥材的采收對象。但6月份是植株的旺盛生長期，此時采收對植株的繼續(xù)生長有影響，因此，建議將2年生栽培光果甘草的采收時間安排在總黃酮含量較高(34.55 mg·g－1)的10月份。

光果甘草為多年生草本植物，在傳統(tǒng)中藥材生產(chǎn)過程中，通常在植株生長3～4 a后的秋季采挖其根及水平根莖作為甘草藥材的主要來源，而忽略了地上部分的藥用價值。本研究結(jié)果表明:2年生和8年生栽培光果甘草葉片特別是上部葉片的總黃酮含量均最高。這與不同種類植物體內(nèi)總黃酮含量的分布狀況相似［13－14］，據(jù)此推測葉片可能是植物合成黃酮類成分的主要器官。因此，光果甘草地上部分特別是葉片也可適時采收作為甘草藥材的原料。

綜上所述，若以黃酮類成分為采收目的，2年生光果甘草就可作為采收對象，最佳采收期為10月份，采收部位為葉和地下部位。因不同齡期光果甘草植株葉片的總黃酮含量無顯著差異，因此可每年采收。

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(責(zé)任編輯:佟金鳳)

Analysis of total flavonoids content in different parts of Glycyrrhiza glabra with different cultivated ages

LI Naa，LU Jia-huia，b，c，①，TIAN Run-weia，QIN Zhong-lia，LI Xue-yuc(Shihezi University:a.College of Life Science，b.The Key Laboratory of Oasis Eco-agriculture，Xinjiang Production and Construction Group，c.Institute of Licorice，Shihezi 832003，China)，J.Plant Resour.＆Environ.2012，21(2):114－116

The total flavonoids content in different parts(leaf，stem，root and rhizome)of two-year-old and eight-year-old cultivatedGlycyrrhiza glabraL.collected in April，June，August and October were determined by UV-visible spectrophotometry method.The result shows that the average content of total flavonoids of two-year-old and eight-year-old plants reaches the highest in June with the average content of 35.55 and 39.97 mg·g－1，respectively.According to the average content of total flavonids in different parts of two ages plants，the order from the highest to the lowest is basically same，all appear that upper leaf is the highest，middle leaf is the second，different under-ground parts are middle，and lower stem is the lowest.The comprehensive analysis results indicate that there are no obvious differences in change regularity of total flavonoids content inG.glabrawith different cultivated ages.Two-year-old cultivatedG.glabracould be harvested，the optimal harvesting time is October，and the harvesting parts are leaf and under-ground part.

光果甘草;總黃酮含量;葉;采收期

Glycyrrhiza glabraL.;total flavonoids content;leaf;collection time

book=2012,ebook=36

Q946.8;R282.4;S567.23+9

A

1674－7895(2012)02－0114－03

2011－09－09

國家自然科學(xué)基金資助項目(30760028);石河子大學(xué)研究生創(chuàng)新基金重點(diǎn)項目(YJCX2010－Z03)

李娜(1983—)，女，山東成武人，碩士研究生，主要從事資源植物研究。

①通信作者E-mail:ljhzw@tom.com