崔萌萌 李福昌 王雪鵬 王春陽(yáng) 麻名文

(山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，泰安 271018)

氨基酸是蛋白質(zhì)的基本組成單位，蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)的本質(zhì)是氨基酸營(yíng)養(yǎng)，并且主要是限制性氨基酸營(yíng)養(yǎng)。根據(jù)缺乏的程度，限制性氨基酸可分為不同序列的限制性氨基酸。賴氨酸是獺兔玉米－豆粕型飼糧的第二限制性氨基酸，是“理想蛋白質(zhì)”的參比氨基酸［1］。賴氨酸最重要的生理功能是參與體蛋白質(zhì)的合成，與動(dòng)物生長(zhǎng)密切相關(guān)［2］。畜禽飼糧中添加合成賴氨酸可平衡氨基酸組成，降低飼糧蛋白質(zhì)水平，從而達(dá)到節(jié)約蛋白質(zhì)、減少氮排放的效果。目前，關(guān)于賴氨酸的研究多集中在豬、家禽和反芻動(dòng)物上，研究已具有一定的深度和廣度;但在獺兔上的研究很少，并且目前國(guó)內(nèi)缺少獺兔飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)。本試驗(yàn)擬通過(guò)飼養(yǎng)試驗(yàn)和消化代謝試驗(yàn)等手段研究飼糧賴氨酸水平對(duì)生長(zhǎng)獺兔生長(zhǎng)性能、氮代謝及血清免疫和生化指標(biāo)的影響，旨在尋求生長(zhǎng)獺兔的飼糧適宜賴氨酸水平，為獺兔飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)的制訂提供一定的理論和數(shù)據(jù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼糧

基礎(chǔ)飼糧參考 NRC(1977)［3］和 De Blas 等［4］的家兔飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制而成，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。在基礎(chǔ)飼糧中分別添加0、0.15%、0.30%、0.45%和0.60%的賴氨酸，配制成賴氨酸水平分別為0.55%、0.70%、0.85%、1.00%和1.15%的5種試驗(yàn)飼糧。各種飼料原料粉碎后逐級(jí)混勻，用制粒機(jī)壓制成粒徑為4～6 mm的顆粒飼料，儲(chǔ)存于通風(fēng)干燥處備用。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels ofthe basal diet(air－dry basis) %

1)預(yù)混料為每千克飼糧提供 Premix provided the following per kg of diet:VA 12 000 IU，VD31 000 IU，VE 50 mg，VK 2 mg，Cu 40 mg，Zn 50 mg，Mn 30 mg，F(xiàn)e 100 mg，I 0.5 mg，Se 0.05 mg。

2)營(yíng)養(yǎng)水平為計(jì)算值。Nutrient levels were calculated values.

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物分組與飼養(yǎng)管理

選取平均體重為(665±123)g的斷奶獺兔200只(公母各占1/2)，按性別和體重隨機(jī)分為5組，每組40個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1只試驗(yàn)兔。試驗(yàn)兔單籠飼養(yǎng)，試驗(yàn)期間早、晚各飼喂1次。采用常規(guī)飼養(yǎng)管理和免疫程序，自然采光和通風(fēng)，自由采食和飲水。預(yù)試期7 d，正試期53 d。

1.3 樣品采集與制備

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束前6天，每組隨機(jī)抽取8只試驗(yàn)兔，轉(zhuǎn)移到經(jīng)消毒處理的代謝籠內(nèi)，單籠飼養(yǎng)，并飼喂相應(yīng)的試驗(yàn)飼糧，自由采食和飲水。預(yù)試期3 d，預(yù)試期后連續(xù)3 d收集每只試驗(yàn)兔全天的糞樣和尿樣，4℃密封保存，同時(shí)記錄每只試驗(yàn)兔每天的采食量、排糞量和排尿量。鮮糞稱重后，取其中一部分稱重后加10%的硫酸固氮，每天取樣比例相同，然后在烘箱中于65℃下烘干72 h，稱重即得糞樣的風(fēng)干重，最后將3 d的風(fēng)干糞樣混合后粉碎，于－20℃冷凍保存，待測(cè)含氮量。尿樣測(cè)量后，取一定比例于備好的250 mL塑料瓶中，加入5 mL濃硫酸固氮，每天取樣比例相同，混勻后－20℃冷凍保存，待測(cè)含氮量。

在試驗(yàn)開(kāi)始后的第53天飼喂前，每組隨機(jī)抽取8只試驗(yàn)兔，立即心臟采血10 mL，37℃水浴40 min后，3 000 r/min離心15 min，分離所得血清分裝于Eppendorf管中，置于－20℃冷凍保存，待測(cè)免疫和生化指標(biāo)。

1.4 測(cè)定指標(biāo)和方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能指標(biāo)

試驗(yàn)結(jié)束后，以重復(fù)為單位稱量試驗(yàn)兔的體重，并統(tǒng)計(jì)全期的喂料量，計(jì)算平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.4.2 氮代謝指標(biāo)

飼糧、糞樣和尿樣含氮量利用凱氏定氮法［5］進(jìn)行測(cè)定，各氮代謝指標(biāo)計(jì)算公式如下:

可消化氮(g/d)=食入氮－糞氮排出量;

氮沉積(g/d)=食入氮－糞氮排出量－尿氮排出量;

氮表觀消化率(%)=100×可消化氮/食入氮;

氮利用率(%)=100×沉積氮/食入氮;

氮生物學(xué)效價(jià)(%)=100×沉積氮/可消化氮。1.4.3 血清免疫指標(biāo)

血清免疫球蛋白 A(IgA)、免疫球蛋白 G(IgG)和免疫球蛋白M(IgM)含量的測(cè)定均采用免疫比濁法。

1.4.4 血清生化指標(biāo)

血清總蛋白(TP)、球蛋白(GLO)、膽固醇(CHO)和尿素氮(UN)含量以及谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性均采用日本和光純藥工業(yè)株式會(huì)社提供的試劑盒測(cè)定，按說(shuō)明書(shū)操作，并在日立7020型全自動(dòng)分析儀上進(jìn)行測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

數(shù)據(jù)以平均值和均方根誤差表示，采用SAS 8.02統(tǒng)計(jì)軟件中的GLM進(jìn)行數(shù)據(jù)的方差分析，若有顯著差異，則采用Duncan氏法進(jìn)行數(shù)據(jù)的多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼糧賴氨酸水平對(duì)生長(zhǎng)獺兔生長(zhǎng)性能的影響

由表2可以看出，在初始體重?zé)o顯著差異(P＞0.05)的情況下，飼糧賴氨酸水平對(duì)平均日增重、平均日采食量和料重比均無(wú)顯著影響(P＞0.05)。隨著飼糧賴氨酸水平的升高，平均日增重先升高后降低，在飼糧賴氨酸水平為0.70%時(shí)為最高。

2.2 飼糧賴氨酸水平對(duì)生長(zhǎng)獺兔氮代謝的影響

由表3可以看出，飼糧賴氨酸水平對(duì)糞氮排出量、尿氮排出量、可消化氮、氮表觀消化率和氮利用率均無(wú)顯著影響(P＞0.05)。飼糧賴氨酸水平極顯著影響食入氮(P=0.006 5)，其中飼糧賴氨酸水平為1.00%和1.15%的組極顯著高于飼糧賴氨酸水平為0.55%和0.70%的組(P＜0.01)，其他各組間無(wú)顯著差異(P＞0.05)。飼糧賴氨酸水平顯著影響氮沉積(P=0.045 9)，其中飼糧賴氨酸水平為0.70%、0.85%、1.00%和1.15%的組顯著高于飼糧賴氨酸水平為0.55%的組(P＜0.05)，其他各組間無(wú)顯著差異(P＞0.05)。飼糧賴氨酸水平顯著影響氮生物學(xué)效價(jià)(P=0.022 6)，其中飼糧賴氨酸水平為0.70%、0.85%、1.00%和1.15%的組顯著高于飼糧賴氨酸水平為0.55%的組(P＜0.05)，其他各組間無(wú)顯著差異(P＞0.05)。

表2 飼糧賴氨酸水平對(duì)生長(zhǎng)獺兔生長(zhǎng)性能的影響Table 2 Effects of dietary lysine level on growth performance of growing Rex rabbits(n=40)

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P＜0.05)，不同大寫(xiě)字母表示差異極顯著(P＜0.01)，相同字母或無(wú)字母表示差異不顯著(P＞0.05)。下表同。

In the same row，values with different small letter superscripts mean significant difference(P＜0.05)，and with different capital letter superscripts mean significant difference(P＜0.01)，while with the same or no letter superscripts mean no significant difference(P＞0.05).The same as below.

2.3 飼糧賴氨酸水平對(duì)生長(zhǎng)獺兔血清免疫指標(biāo)的影響

由表4可以看出，飼糧賴氨酸水平極顯著影響血清IgA(P＜0.000 1)、IgG(P＜0.000 1)和IgM含量(P＜0.000 1)。飼糧賴氨酸水平為0.70%、0.85%、1.00%和1.15%的組的 IgA和IgM含量均極顯著低于飼糧賴氨酸水平為0.55%的組(P＜0.01)，其他各組間無(wú)顯著差異(P＞0.05);飼糧賴氨酸水平為0.55%的組的IgG含量極顯著高于其他各組(P＜0.01)，飼糧賴氨酸水平為0.70%和0.85%的組的IgG含量極顯著高于飼糧賴氨酸水平為1.15%的組(P＜0.01)。

2.4 飼糧賴氨酸水平對(duì)生長(zhǎng)獺兔血清生化指標(biāo)的影響

由表5可以看出，飼糧賴氨酸水平顯著影響血清膽固醇含量(P=0.016 7)，其中飼糧賴氨酸水平為1.15%的組顯著低于飼糧賴氨酸水平為0.55%、0.70%和1.00%的組(P＜0.05)。飼糧賴氨酸水平對(duì)血清總蛋白、球蛋白、尿素氮含量以及谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性無(wú)顯著影響(P＞0.05)。

3 討論

3.1 飼糧賴氨酸水平與生長(zhǎng)獺兔生長(zhǎng)性能

賴氨酸是動(dòng)物機(jī)體的必需氨基酸，適當(dāng)添加賴氨酸具有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的作用。林映才等［6］報(bào)道，提高飼糧中賴氨酸水平可顯著改善仔豬的生長(zhǎng)性能。譙仕彥等［7］報(bào)道，將飼糧賴氨酸水平增加到1.14%，可顯著改善斷奶仔豬的日增重、飼料增重比、日氮存留量及凈氮利用率，降低血清尿素氮含量，從而提高蛋白質(zhì)的合成量。席鵬彬等［8］報(bào)道，隨著飼糧賴氨酸水平的升高，仔豬飼料增重比線性降低，每克賴氨酸增重量也線性降低，血清游離氨基酸濃度線性升高。袁中彪等［9］報(bào)道，當(dāng)飼糧中可消化賴氨酸水平為1.20%時(shí)，額外添加賴氨酸對(duì)仔豬的日采食量、日增重和料重比沒(méi)有改善作用，反而有降低仔豬生長(zhǎng)性能的趨勢(shì)。本試驗(yàn)中，飼糧賴氨酸水平對(duì)生長(zhǎng)獺兔的平均日增重、平均日采食量和料重比均沒(méi)有顯著影響，表明在本試驗(yàn)條件下基礎(chǔ)飼糧的賴氨酸水平(0.55%)可以滿足該階段獺兔生長(zhǎng)發(fā)育的需要。

表3 飼糧賴氨酸水平對(duì)生長(zhǎng)獺兔氮代謝的影響Table 3 Effects of dietary lysine level on nitrogen metabolism of growing Rex rabbits(n=8)

表4 飼糧賴氨酸水平對(duì)生長(zhǎng)獺兔血清免疫指標(biāo)的影響Table 4 Effects of dietary lysine level on serum immune indices of growing Rex rabbits(n=8) g/L

表5 飼糧賴氨酸水平對(duì)生長(zhǎng)獺兔血清生化指標(biāo)的影響Table 5 Effects of dietary lysine level on serum biochemical indices of growing Rex rabbits(n=8)

3.2 飼糧賴氨酸水平與生長(zhǎng)獺兔氮代謝

關(guān)于氮代謝與飼糧氨基酸水平的關(guān)系，已有的研究結(jié)果存在較大差異。De Silva等［10］報(bào)道，隨著飼糧氨基酸水平的升高，動(dòng)物對(duì)氨基酸的消化率呈先上升后下降的趨勢(shì)。鄢華等［11］報(bào)道，在一定量范圍內(nèi)添加賴氨酸可以通過(guò)增加動(dòng)物的采食量、提高飼料蛋白質(zhì)的品質(zhì)、提高動(dòng)物的消化吸收能力影響機(jī)體的氮代謝。Cheng等［12］報(bào)道，飼糧中添加包被賴氨酸后，綿羊的干物質(zhì)進(jìn)食量、干物質(zhì)消化率、食入氮、糞氮排出量各組間均差異不顯著，但降低了尿氮排出量，提高了氮沉積率。張海華等［13］報(bào)道，飼糧蛋白質(zhì)水平降到27.4%并加入相應(yīng)量的賴氨酸和蛋氨酸，生長(zhǎng)前期藍(lán)狐的終體重、日增重、氮沉積極顯著升高，飼料轉(zhuǎn)化率、氮沉積率和氮生物學(xué)效價(jià)顯著升高。歐陽(yáng)靖等［14］研究顯示，給150日齡以下羔羊添喂一定水平的賴氨酸可影響羔羊的采食量和消化率，提高有機(jī)物的消化量，增加氮沉積，提高日增重。本試驗(yàn)條件下，基礎(chǔ)飼糧中添加0.15%的賴氨酸(飼糧賴氨酸水平為0.70%)即可顯著提高生長(zhǎng)獺兔的氮沉積和氮生物學(xué)效價(jià)，添加量再增加則無(wú)顯著效果。這說(shuō)明適當(dāng)提高飼糧賴氨酸水平有利于氮利用效率的提高。此外，本試驗(yàn)中，飼糧賴氨酸水平對(duì)糞氮和尿氮的排出量無(wú)顯著影響，說(shuō)明單純添加賴氨酸可能導(dǎo)致了氨基酸的不平衡，甚至可能造成了氨基酸的拮抗，影響了氨基酸的吸收利用。

3.3 飼糧賴氨酸水平與生長(zhǎng)獺兔血清免疫指標(biāo)

具有免疫和防御功能的細(xì)胞因子和抗體大多數(shù)是以蛋白質(zhì)為主體構(gòu)成的，因而蛋白質(zhì)和氨基酸營(yíng)養(yǎng)對(duì)維持機(jī)體正常免疫功能起著重要的作用［15－16］。研究表明，飼糧中蛋白質(zhì)和賴氨酸水平影響動(dòng)物的免疫機(jī)能。Williams等［17］研究表明，賴氨酸的需要量與仔豬體內(nèi)免疫系統(tǒng)的活性有關(guān)，要想提高仔豬的生長(zhǎng)性能，就必須降低仔豬體內(nèi)免疫系統(tǒng)的活性，同時(shí)還要相應(yīng)地提高仔豬飼糧中賴氨酸的水平。本試驗(yàn)條件下，在基礎(chǔ)飼糧中添加不同水平的賴氨酸后血清IgA、IgG和IgM含量均極顯著降低，說(shuō)明提高飼糧賴氨酸水平降低了生長(zhǎng)獺兔體內(nèi)免疫系統(tǒng)的活性。

3.4 飼糧賴氨酸水平與生長(zhǎng)獺兔血清生化指標(biāo)

血清總蛋白和球蛋白可以反映機(jī)體營(yíng)養(yǎng)狀況以及蛋白質(zhì)代謝水平。一般來(lái)說(shuō)，機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)狀況好，蛋白質(zhì)合成增加，血清總蛋白和球蛋白含量升高［18］。本試驗(yàn)條件下，血清總蛋白、球蛋白含量未受飼糧賴氨酸水平的顯著影響。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶是廣泛存在于動(dòng)物線粒體中的重要氨基酸轉(zhuǎn)氨酶，不僅是反映肝細(xì)胞生長(zhǎng)狀況的靈敏指標(biāo)，而且是機(jī)體中間代謝的關(guān)鍵酶，在機(jī)體蛋白質(zhì)代謝中起重要作用。在正常情況下，谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性是相對(duì)穩(wěn)定的，其活性升高或降低均可反映出肝臟和心臟可能有所損傷。本試驗(yàn)條件下，各組間谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性差異不顯著，說(shuō)明提高飼糧賴氨酸水平?jīng)]有對(duì)生長(zhǎng)獺兔的肝臟和心臟造成損傷。

血清尿素氮通過(guò)鳥(niǎo)氨酸循環(huán)合成，是蛋白質(zhì)、氨基酸代謝的終產(chǎn)物，其含量受飼糧中蛋白質(zhì)、氨基酸量與質(zhì)的影響，并與體內(nèi)氮沉積率、蛋白質(zhì)或氨基酸利用率有顯著負(fù)相關(guān)［19］。血清尿素氮含量可以準(zhǔn)確地反映動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝和氨基酸之間的平衡狀況，較低的血清尿素氮含量表明氨基酸平衡好，機(jī)體蛋白質(zhì)合成效率較高［20］。有研究認(rèn)為，隨著飼糧賴氨酸水平的升高，飼糧中氨基酸的平衡狀況得到改善，當(dāng)賴氨酸達(dá)到某一水平時(shí)，飼糧的氨基酸平衡達(dá)到最佳，之后再增加賴氨酸，氨基酸的平衡又被打破，血清尿素氮含量則隨著氨基酸平衡狀況的變化呈現(xiàn)先下降后上升的變化規(guī)律，而不是線性增加［21］。本試驗(yàn)條件下，飼糧賴氨酸水平對(duì)生長(zhǎng)獺兔的血清尿素氮含量無(wú)顯著影響，說(shuō)明基礎(chǔ)飼糧中添加賴氨酸后對(duì)體內(nèi)氨基酸平衡無(wú)顯著影響，基礎(chǔ)飼糧的賴氨酸水平(0.55%)可以滿足該階段獺兔的代謝需要。

血清總膽固醇含量可作為機(jī)體脂類代謝的指標(biāo)。薛豐等［22］報(bào)道，添加過(guò)瘤胃賴氨酸后肉牛血清總膽固醇含量有不同程度的提高，說(shuō)明過(guò)瘤胃賴氨酸的添加對(duì)脂類代謝有一定的改善作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧賴氨酸水平顯著影響血清膽固醇含量，適量添加賴氨酸對(duì)生長(zhǎng)獺兔脂類代謝有一定的積極影響。

4 結(jié)論

綜合本試驗(yàn)測(cè)定指標(biāo)可以得出，生長(zhǎng)獺兔的飼糧適宜賴氨酸水平為0.55%～0.70%。

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