顧夕章 高啟平* 謝 駿 張媛媛 蔣宗杰 劉 波 戈賢平 李云蘭

(1.通威股份有限公司技術中心水產(chǎn)研究所，成都 610041;2.中國水產(chǎn)科學研究院淡水漁業(yè)研究中心，無錫 214081)

隨著飼料工業(yè)的快速發(fā)展，油脂類原料特別是大豆油的價格快速上漲，飼料生產(chǎn)企業(yè)和魚類營養(yǎng)研究者正積極探討其他油脂部分或全部替代大豆油的可能性。亞麻是重要油料作物之一，居世界油料總產(chǎn)量的第7位。亞麻籽雖含有生氰糖甙、亞麻籽膠和抗維生素B6等，但油脂含量高達38%，亞麻籽油中的亞麻酸含量高達55%(大豆油中僅為8%)，粗蛋白質(zhì)含量為19.3%，賴氨酸和蛋氨酸含量分別為0.93%和0.37%。關于亞麻籽應用的研究報道主要集中在牛、羊等反芻動物及雞飼料方面［1－2］，或是亞麻籽油在魚飼料中的應用研究，很少有在魚飼料中直接使用亞麻籽的報道。本試驗開展了亞麻籽應用于異育銀鯽飼料中的試驗研究，旨在探討異育銀鯽飼料中亞麻籽的適宜用量，為異育銀鯽配合飼料節(jié)省原料成本提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及試驗設計

異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)魚苗由中國水產(chǎn)科學研究院淡水漁業(yè)研究中心南泉養(yǎng)殖試驗基地提供。經(jīng)15d暫養(yǎng)、馴化后，選擇體格健康、初均重(14.32±0.02)g的異育銀鯽336尾，隨機分為4個組，每組設3個重復，每個重復放魚28尾，以重復為單位放養(yǎng)于實驗室可控溫流水循環(huán)系統(tǒng)中的12個圓形蓄養(yǎng)槽中。

1.2 試驗飼料

試驗以魚粉、豆粕、菜籽粕、棉籽粕為蛋白質(zhì)源，以大豆油為脂肪源配制基礎飼料，用亞麻籽替代部分大豆油配制3種與基礎飼料等氮、等能的試驗飼料，用面粉和200型菜籽粕來調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)平衡。Ⅰ組為對照組，飼喂基礎飼料(大豆油含量為 5.4%)，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組分別飼喂用 2.40%、4.80%和7.20%亞麻籽替代基礎飼料中16.67%、33.33%和50.00%大豆油的試驗飼料。飼料組成及營養(yǎng)水平見表1。飼料原料經(jīng)粉碎過40目篩，混合均勻后用SLP－45小型顆粒機(中國水產(chǎn)科學研究院漁業(yè)機械儀器研究所研制)加工成直徑1.5 mm、長3～4 mm的顆粒飼料，電風扇條件下干燥后置于冰箱中4℃密封保存。

表1 飼料組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)Table 1 Composition and nutrient levels ofdiets(air-dry basis) %

1.3 飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖設施為室內(nèi)控溫流水循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)，單個圓形蓄養(yǎng)槽規(guī)格為820 mm×700 mm，以曝氣自來水為水源，使用自動控電開關調(diào)節(jié)水溫度，日夜連續(xù)充氣增氧、控溫，定期測量水質(zhì)。整個試驗期間水質(zhì)條件為:水溫 24.5～27.5℃、溶解氧在6 mg/L以上、氨氮在0.1 mg/L以下、亞硝酸鹽在0.1 mg/L 以下、pH 6.8 ～ 7.0。飼料于每天08:30、12:30、16:30各投喂1次，投喂量為各試驗組魚體體重的3%～4%。

1.4 樣品采集與分析

1.4.1 生物學指標的測定方法

飼養(yǎng)試驗第63天每缸隨機抽取3尾魚測定體重、體長、內(nèi)臟重、肝臟重，用于肥滿度、內(nèi)臟比、肝體比的測定。采樣前停喂24 h，對每缸分別進行稱重，測定每缸魚的總體重和尾數(shù)，計算特定生長率、飼料系數(shù)。

1.4.2 常規(guī)營養(yǎng)成分的測定方法

1.4.2.1 樣品制備

每缸隨機抽取3尾魚，每組采集9尾魚。自魚體兩側頭蓋骨后至尾鰭前取體背肌肉樣品，剪碎、混勻后一部分用于常規(guī)營養(yǎng)成分的測定;另一部分冷凍干燥，用于脂肪酸的測定。

1.4.2.2 營養(yǎng)成分的測定

魚體肌肉水分含量測定采用105℃烘干法;粗蛋白質(zhì)含量測定采用微量凱氏定氮法;粗脂肪含量測定采用全脂肪法;粗灰分含量測定采用小火炭化后馬福爐560℃灼燒法。

1.4.2.3 脂肪酸的測定

每缸隨機抽取3尾魚，每組采集9尾魚，每3尾魚作1個混合樣本，每組脂肪酸分析3個樣本?？傊舅岬臏y定采用馮大偉等［3］的方法，氯仿∶甲醇∶H2O=2∶2∶1 抽提總脂肪，分別用 1 mol/L 氫氧化鉀－甲醇和0.5 mol/L硫酸甲醇溶液使脂肪酸甲酯化，再用正庚烷萃取脂肪酸甲酯。樣品皂化甲酯化后，直接上氣相色譜－質(zhì)譜儀進行分析。檢索美國國家標準與技術研究院(NIST)質(zhì)譜圖庫，比較樣品質(zhì)譜圖與圖庫中標準質(zhì)譜圖，以確定樣品中脂肪酸種類，各脂肪酸相對含量的確定采用面積歸一化法計算。

1.4.3 血清生化指標測定

養(yǎng)殖試驗結束后分別從每個缸隨機取異育銀鯽3尾，每組9尾魚，麻醉后用紗布擦干尾部，采用一次性注射器尾靜脈采血，于4℃冰箱中靜置3 h后，10 000 r/min、4 ℃離心 5 min，提取血清，置于－70℃冰箱中保存?zhèn)溆茫糜谘迳笜说臏y定。堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性采用駿實生物技術有限公司生產(chǎn)的試劑盒在美國貝克曼Cx－4型自動生化分析儀上測定。血清葡萄糖(glucose，Glu)含量用葡萄糖氧化酶－過氧化物酶終點比色法(美國貝克曼Cx－4型自動生化分析儀)測定，試劑盒購自衛(wèi)生部上海生物制品研究所。血清谷草轉氨酶(aspartate aminotransferase，AST) 活性及膽固醇(cholesterol，CHOL)、甘油三酯(triglyceride，TG)、總蛋白(total protein，TP)、白蛋白(albumin，AP)、球蛋白(globin，GP)含量采用比色法(美國貝克曼Cx－4型自動生化分析儀)測定，試劑盒購自上海名典生物工程公司。血清皮質(zhì)醇(cortisol，COR)含量采用放射免疫法(RIA)測定，試劑盒購自北京北方生物技術研究所。

1.5 相關指標計算公式

特定生長率(specific growth rate，SGR，%/d)=100×(ln末均重－ln初均重)/飼養(yǎng)天數(shù);

飼料系數(shù)(feed conversion ratio，F(xiàn)CR)=每個缸投喂飼料總量/每個缸魚體總增重量;

肝體比(hepatosomatic index，HIS，%)=100 ×試驗末魚體肝重/試驗末魚體重;

肥滿度(condition factor，CF，%)=100 ×試驗末魚體重/試驗末魚體長度3;

內(nèi)臟比(viserosomatic index，VSI，%)=100 ×(試驗末魚內(nèi)臟重/試驗末魚體重)。

1.6 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗結果采用SPSS 13.5軟件進行統(tǒng)計分析，采用Duncan氏法多重比較檢驗組間差異，數(shù)據(jù)用平均值±標準誤表示，以P＜0.05表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 飼料中亞麻籽替代部分大豆油對異育銀鯽魚苗生長性能的影響

由表2可見，各組間魚體特定生長率、飼料系數(shù)沒有顯著差異(P＞0.05)。各組鯽魚的末均重依次為Ⅱ組＞Ⅲ組＞Ⅳ組＞Ⅰ組，Ⅱ組鯽魚的增重最大。Ⅲ、Ⅳ組鯽魚特定生長率相當(P＞0.05)。以上結果說明，飼料中使用亞麻籽替代部分大豆油對鯽魚的生長性能沒有顯著影響。

2.2 飼料中亞麻籽替代部分大豆油對異育銀鯽魚苗形體指標及肌肉成分的影響

由表3可見，與對照組相比，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組的魚體肥滿度顯著提高(P＜0.05)，Ⅲ組的魚體內(nèi)臟比顯著提高(P＜0.05)。各組異育銀鯽的肝體比無顯著差異(P＞0.05)。由表4可見，各組魚體肌肉水分、粗脂肪、粗灰分含量差異不顯著(P＞0.05);與對照組相比，Ⅲ、Ⅳ組魚體肌肉粗蛋白質(zhì)含量顯著降低(P＜0.05)。以上結果說明，飼料中使用一定水平的亞麻籽有利于提高魚體的肥滿度，但魚體肌肉中粗脂肪、粗蛋白質(zhì)含量會下降，尤其是肌肉粗蛋白質(zhì)含量會較對照組顯著下降。

由表5可見，隨著亞麻籽水平增加，魚體肌肉中亞麻酸水平相應增加，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組魚體肌肉中亞麻酸含量顯著高于對照組(P＜0.05)，其他脂肪酸含量與對照組無顯著差異(P＞0.05)。這說明飼料中使用亞麻籽會顯著提高魚體肌肉中亞麻酸含量。

表2 異育銀鯽的生長性能Table 2 The growth performance of allogynogenetic silver crucian carp(n=3)

表3 異育銀鯽的肝體比、肥滿度和內(nèi)臟比Table 3 The HSI，CF and VSI of allogynogenetic silver crucian carp(n=9) %

表4 異育銀鯽肌肉成分Table 4 The muscle composition of allogynogenetic silver crucian carp(n=9)

表5 異育銀鯽肌肉的脂肪酸組成Table 5 The fatty acid composition of allogynogenetic silver crucian carp(n=3) %

2.3 飼料亞麻籽替代部分大豆油對異育銀鯽魚苗血清生化指標的影響

由表6可見，各組之間血清谷草轉氨酶、堿性磷酸酶活性及甘油三酯、皮質(zhì)醇、總蛋白、白蛋白、球蛋白含量沒有顯著差異(P＞0.05)。I組異育銀鯽血清葡萄糖含量顯著高于Ⅲ、Ⅳ組(P＜0.05);Ⅲ、Ⅳ組異育銀鯽血清膽固醇含量顯著高于Ⅰ、Ⅱ組(P ＜0.05)。

表6 異育銀鯽的血清生化指標Table 6 The serum biochemical indices of allogynogenetic silver crucian carp(n=9)

3 討論

淡水魚能很好地利用n-3和n-6短鏈脂肪酸，它們能夠?qū)⑦@些短鏈脂肪酸延長和去飽和，變成代謝所需的長鏈脂肪酸［3］。姜召山等［4］的研究結果表明，基礎飼料中添加亞麻酸能提高鯽魚的增長率和特定生長率，降低飼料系數(shù)。本試驗結果表明，在飼料中使用少量的亞麻籽替代大豆油對異育銀鯽生長性能沒有顯著影響，說明在異育銀鯽飼料中可使用亞麻籽替代部分大豆油，這可能跟亞麻籽能直接在飼料中提供亞麻酸有關。亞麻籽在動物飼料中使用受制約的因素主要有:1)含有生氰糖甙，可引起動物氫氰酸中毒。生氰糖甙在進入動物機體后，在體內(nèi)酶的作用下，被水解為劇毒的氫氰酸，氫氰酸和氰化物容易經(jīng)消化道或呼吸道被吸收，氫基根和體內(nèi)組織細胞含有的細胞色素氧化酶中的鐵結合，使細胞色素氧化酶的正常生物氧化過程不能進行，造成組織細胞缺氧，引起動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)機能嚴重障礙，發(fā)生興奮、痙攣、抑郁、迅速死亡;2)亞麻籽種子體積小、外皮堅實、脂肪含量高，增加了飼料生產(chǎn)工藝上的粉碎難度;3)亞麻籽含有亞麻籽膠和抗維生素B6，對動物產(chǎn)生有害作用［5－7］。

為期63d的異育銀鯽養(yǎng)殖試驗過程中沒有發(fā)現(xiàn)添加亞麻籽后對魚體生長有明顯的負面影響。這可能是與亞麻籽含量，尤其是亞麻籽中的氫氰酸含量不高有關。從養(yǎng)殖試驗結束后對魚體血清生化指標的檢測數(shù)據(jù)來看，添加亞麻籽飼料組魚體的血清生化指標中葡萄糖、膽固醇發(fā)生了一定程度的變化，而皮質(zhì)醇、谷草轉氨酶、堿性磷酸酶、甘油三酯等指標沒有明顯變化。這表明使用亞麻籽后對異育銀鯽苗種生理上產(chǎn)生了一定程度的影響，但對肝功能沒有造成明顯的負面影響。通過通威檢測中心檢測，亞麻籽中氫氰酸的含量為140 mg/kg，折算到飼料中因其所帶來的氫氰酸最高含量為10.02 mg/kg，這遠遠低于國家衛(wèi)生標準(氫氰酸含量小于350 mg/kg;豬雞飼料中小于50 mg/kg)。Abd-Aleem 等［8］的研究表明，鯉魚飼料中當生氰糖甙含量為379 mg/kg的亞麻籽餅用量不超過8%時不會明顯影響魚體生長，該試驗亞麻籽餅的適宜用量較高，分析認為可能是與該試驗飼料的原料組成有關。

研究表明，亞麻籽在飼料中的應用可以提高肉雞［9］、反芻動物［10］等肉品質(zhì)。姜召山等［4］的研究也表明，飼料中添加亞麻酸能顯著提高魚體蛋白質(zhì)和脂肪的含量。本試驗中亞麻籽的使用能顯著提高異育銀鯽肌肉中亞麻酸含量。這可能是因為亞麻籽中含有亞麻酸，提高了異育銀鯽肌肉中的亞麻酸含量，這與王利華等［11］在蛋雞、郎婧等［12］在豬方面的研究結果一致。但是如果使用過多的亞麻籽，如在異育銀鯽飼料中使用4.80%、7.20%的亞麻籽替代大豆油時，顯著降低了肌肉粗蛋白質(zhì)含量。分析認為這可能與亞麻籽中的毒素含量有關，具體還有待進一步研究。

4 結論

① 飼料中使用 2.40%、4.80%、7.20% 亞麻籽替代部分大豆油對異育銀鯽生長性能無顯著影響，并提高了肌肉亞麻酸含量。

②育銀鯽飼料中使用過多的亞麻籽(4.80%、7.20%)替代大豆油時可顯著降低肌肉粗蛋白質(zhì)含量，降低血清葡萄糖含量，增加血清膽固醇含量。

③綜合分析可知，異育銀鯽魚苗飼料中亞麻籽替代大豆油以不超過2.40%為宜。

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