陳雅慧,朱 梅,李寶莉△,符兆英,高 楓

(1.延安大學醫(yī)學院,陜西延安 716000;2.廣西山云生化科技有限公司,柳州 545600)

酸柏梔油軟膠囊是由酸棗仁、梔子配伍柏子仁組成方劑,并用其有效成分酸棗仁油、梔子油、柏子仁油制成的復方制劑。該膠囊富含不飽和脂肪酸、油酸、亞油酸和亞麻酸,現(xiàn)代醫(yī)學研究認為,不飽和脂肪酸和亞油酸可以增強機體抵抗力,抗氧化,抗缺氧,減肥增肌等作用。我們前期研究該軟膠囊具有安神、增強記憶作用,本次主要在抗缺氧、改善體能等方面進行研究,為酸柏梔油軟膠囊的進一步開發(fā)和利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健康昆明種ICR小鼠,雌雄各半,體質(zhì)量18～22 g,二級動物合格證號SCXK(陜)2007-001,由西安交通大學實驗動物中心提供。

1.2 主要藥品

酸棗仁油購自陜西旭煌植物科技發(fā)展有限公司,批號:XHS-080107;柏子油由廣西山云生化科技有限公司生產(chǎn),批號081012;梔子油由廣西山云生化科技有限公司生產(chǎn),批號080501;萬基牌西洋參膠囊由深圳萬基藥業(yè)有限公司生產(chǎn),生產(chǎn)批號2008821,規(guī)格每粒0.6 g,成人每日最高劑量0.04 g/kg。

1.3 常壓耐缺氧實驗

取小鼠50只,按體質(zhì)量分層隨機分為5組,每組10只。以空白為對照組,西洋參為陽性組,給藥量0.36 g/kg,酸柏梔油軟膠囊小劑量組(0.84mg/kg)、中劑量組(20 mg/kg)、大劑量組(40 mg/kg),連續(xù)灌胃給藥30 d,于末次灌胃后1 h,將各組小鼠分別放入盛有5 g鈉石灰的250 ml磨口瓶內(nèi)(每瓶1只),用凡士林封瓶口,蓋嚴,使之不漏氣,立即計時,以呼吸停止為指標,觀察小鼠因缺氧而死亡的時間。

1.4 亞硝酸鈉中毒存活實驗

取小鼠50只,分組給藥量和時間同上,于末次灌胃后1 h,各組動物按220mg/kg bw劑量腹腔注射亞硝酸鈉(注射量為0.1 ml/10 g),立即計時,記錄動物存活時間。

1.5 急性腦缺血性缺氧實驗

取小鼠50只,分組給藥量和時間同上,于末次灌胃后1 h,各組動物(在乙醚淺麻醉下)自頸部逐只斷頭,立即按秒表記錄小鼠斷頭后至張口喘氣停止時間。

1.6 負重游泳實驗

取小鼠50只,分組給藥量和時間同上,末次給予受試樣品30min后,置小鼠在游泳箱(大小約50 cm×50 cm×40 cm)中游泳。水深不少于24～25 cm,水溫(25±1.0)℃,鼠尾根部負荷5%體重的鉛皮,進行游泳實驗,在整個試驗中使每只小鼠四肢不停運動,記錄小鼠持續(xù)游泳的時間和力竭游泳時間,力竭判斷標準按Dawson法[1],用秒表記錄動物入水至頭部全部入水持續(xù)8 s內(nèi)不能浮出水面為止。記錄游泳開始時間至力竭的時間作為小鼠游泳時間。

1.7 血清尿素測定

取小鼠50只,分組給藥量和時間同上,末次給藥30 min后,在溫度為30℃的水中不負重游泳90 min,立即小鼠取眼球采全血約0.5 ml(不加抗凝劑)。置4℃冰箱約 3 h,血凝固后2 000 r/min離心15 min,取血清備用。按試劑盒要求操作,在520 nm波長處,以蒸餾水調(diào)零,測定各管吸光度值。

1.8 肝糖元測定

處理同1.5處死動物,取肝臟經(jīng)生理鹽水漂洗后用濾紙吸干,精確稱取肝臟200 mg,按試劑盒要求操作。在620 nm波長下,用空白管調(diào)零,測定各管吸光度。代入公式計算出糖元含量(以mg/100 g肝表示)。

1.9 血乳酸測定

取小鼠50只,按體質(zhì)量分層隨機分為5組,每組10只。連續(xù)灌胃給藥30 d,末次給樣30 min后采血,然后不負重在溫度為30℃的水中游泳10 min后停止。在游泳前用毛細管從內(nèi)眥各采血20μ l,游泳后立即采血20μ l,休息20 min后再各采血20μ l,然后按試劑盒的步驟操作。在波長530 nm處用蒸餾水調(diào)零,測定各管吸光度。代入公式計算出乳酸含量(mmol/L)。

實驗結(jié)果判定:以三個時間點血乳酸曲線下面積為判定標準。任一試驗組的面積小于對照組,且差異有顯著性,可判定該實驗結(jié)果陽性。

血乳酸曲線下面積計算方法:血乳酸曲線下面積=1/2×(游泳前血乳酸值+游泳后0 min的血乳酸值)×10+1/2×(游泳后0 min的血乳酸值+游泳后休息20 min的血乳酸值)×20=5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0min的血乳酸值+2×游泳后休息20 min的血乳酸值)。

1.10 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

2.1 酸柏梔油軟膠囊對小白鼠體重的影響

對上述5組的所有受試小鼠每天按時灌胃,分別每周記錄一次體重,受試30 d內(nèi)體重的變化情況見表1。

Tab.1 Effects of compound gardenia oil soft capsule on weight inmice within 30 days(g,±s,n=10)

Tab.1 Effects of compound gardenia oil soft capsule on weight inmice within 30 days(g,±s,n=10)

*P＜0.05,**P＜0.01 vs control group;#P＜0.05,##P＜0.01 vs D1

Group D1 D8 D15 D22 D30 Control group 25.79±1.64 26.32±1.34 33.25±1.52## 33.98±1.47## 34.89±2.93##Positive control group 25.32±1.45 27.11±2.35 34.01±1.51*# 34.86±2.36# 36.17±1.47#Low dose group 25.74±2.28 26.98±3.38 30.64±2.50*# 32.76±2.55# 33.95±3.36#Middle dose group 25.84±1.52 27.56±2.46 31.01±1.95*# 33.61±3.12# 34.50±1.55#High dose group 26.19±1.97 27.06±2.13 28.90±3.05**# 30.68±1.26*# 31.43±1.60**#

在各個測定階段,各組小鼠的體重較給藥前均有明顯增加,與給藥前比較有顯著性意義(P＜0.01);與生理鹽水組比較,給藥組的體重增加較輕,尤以大劑量組明顯,也有顯著性意義(P＜0.05)。

2.2 酸柏梔油軟膠囊對小鼠缺氧耐受力的影響

對上述5個實驗組分別記錄常壓耐缺氧存活時間、亞硝酸鈉中毒存活時間和缺氧喘息時間統(tǒng)計見表2;酸柏梔油軟膠囊有延長小鼠在常壓條件下的存活時間,也可延長亞硝酸鈉中毒后的存活時間,并可延長小鼠斷頭后至張口喘氣停止時間,與生理鹽水組比較有顯著性意義(P＜0.05),與西洋參組比較無顯著性意義。

Tab.2 Effects of compound gardenia oil soft capsule on hypoxia in mice(±s,n=10)

Tab.2 Effects of compound gardenia oil soft capsule on hypoxia in mice(±s,n=10)

*P＜0.05,**P＜0.01 vs control group

Group Survival time of hypoxia(min)Survival time of poisoning(min)Oxygen breathing space(s)Control group 16.98±1.75 20.52±5.78 15.73±1.02 Positive control group27.31±1.34**28.63±1.53**22.15±1.21**Low dose group 18.89±3.42* 34.36±13.27**16.44±2.93 Middle dose group 20.03±4.84* 21.63±6.37* 17.27±3.39*High dose group 26.73±14.22**28.13±11.49**21.79±3.73**

2.3 酸柏梔油軟膠囊緩解體力疲勞實驗結(jié)果

分別記錄上述5個實驗組小鼠負重游泳時間、不負重游泳后血清尿素和肝糖元測定結(jié)果,以及運動過程中血清中乳酸水平變化(表3)。結(jié)果表明酸柏梔油軟膠囊能使小鼠在負重情況下的存活時間延長,減少游泳90 min后的小鼠血尿素氮,增加肝糖元含量,并能減少血清乳酸水平(P＜0.05)。

Tab.3 Effects of compound gardenia oil soft capsule on fatigue in mice(±s,n=10)

Tab.3 Effects of compound gardenia oil soft capsule on fatigue in mice(±s,n=10)

*P＜0.05,**P＜0.01 vs control group

Group Survival time of loaded swimming(min)Urea(mmol/L)Glycogen(mg/100 g)Areas under the curve of lactic acid Control group 13.88±0.93 12.56±1.17 9.19±3.51 336.84±55.19 Positive control group 51.69±6.49** 9.47±6.51** 14.98±3.65** 247.57±4.39**Low dose group 13.40±1.17 11.87±2.29* 12.58±5.46* 325.05±38.53 Middle dose group 21.97±27.31* 10.55±1.66** 14.87±3.24** 231.57±27.37**High dose group 49.48±23.85** 9.30±1.15** 12.88±8.78 241.60±32.18**

3 討論

酸柏梔油軟膠囊富含不飽和脂肪酸,油酸、亞油酸和亞麻酸,維生素E等,該藥配方簡單,材料來源廣泛,藥食同源,是其他同類藥無可比擬的。藥理研究發(fā)現(xiàn),酸柏梔油軟膠囊具有鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥及促學習記憶等作用[2]。本研究表明酸柏梔油軟膠囊有耐缺氧緩解體力疲勞功能,以上藥理學作用可能與其含有不飽和脂肪酸以及維生素E有關(guān)。

缺氧對機體是一種不良刺激,影響機體的氧化供能。酸柏梔油軟膠囊可提高了小鼠在亞硝酸鈉中毒實驗中的存活時間。小鼠急性腦缺血性實驗中,大劑量組能顯著延長小鼠的喘氣時間,說明其能減少腦耗能、耗氧。低氧條件下,自由基不能及時清除,造成機體內(nèi)氧自由基的堆積,進而發(fā)生強烈的脂質(zhì)過氧化反應(yīng),易導致疲勞。酸柏梔油軟膠囊中含有維生素E,維生素E作為脂溶性抗氧化劑,一方面維生素E通過直接清除過氧化物或自由基而起到抗氧化或阻止氧化脅迫損傷作用,另一方面維生素E也可通過限制超氧化物及相應(yīng)的活性氧或氮化合物的生成和水平發(fā)揮其抗氧化功能[3]。因此酸柏梔油軟膠囊耐缺氧可能與維生素E抗氧化作用密切相關(guān)。

運動耐力的提高是抗疲勞能力加強最有力的宏觀表現(xiàn),游泳時間的長短可以反映動物運動疲勞的程度。當機體長時間運動時糖元耗竭,血糖濃度降低,機體蛋白質(zhì)和脂肪酸分解代謝增強,代謝產(chǎn)物乳酸尿素含量也隨之增加,因此肝糖原、尿素和乳酸水平反映機體的疲勞程度,是評價機體疲勞的重要標志物。酸柏梔油軟膠囊能使小鼠在負重情況下的游泳存活時間延長,減少小鼠血中尿素水平,增加肝糖原含量,減少游泳后乳酸的曲線下面積,說明該復方有緩解體力疲勞功能。還有研究證實,無論是口服還是靜脈注射脂肪酸均可提高血漿游離脂肪酸的水平,在運動中可使肌糖原節(jié)約[4]。由于酸柏梔油軟膠囊富含油酸、亞油酸、亞麻酸,小鼠灌胃服用后,也可通過脂肪酸氧化來增加機體運動供能。

運動耐力的提高是抗疲勞能力加強最直接的表現(xiàn),力竭游泳時間是運動耐力的直接體現(xiàn),其時間的長短直接反應(yīng)抗疲勞的能力。西洋參是已被證實有較強的抗疲勞作用,同時能夠提高機體的體液免疫和細胞免疫功能的藥物[5]。本研究中以西洋參作為陽性對照,酸柏梔油軟膠囊小鼠負重游泳持續(xù)時間均明顯長于生理鹽水組,與西洋參組的差異無統(tǒng)計學意義,說明該方具有提高小鼠抗運動性疲勞的作用。但其作用不呈劑量一效應(yīng)關(guān)系,以中劑量組作用最明顯。酸柏梔油軟膠囊耐缺氧抗疲勞的機制可能與抗氧化、改善機體物質(zhì)代謝及提高機體有氧代謝能力有關(guān),但具體機制尚需進一步研究。

[1]Dawson CA,Horvath SM.Swimming in small laboratory animals[J].Med Sci Sports,1970,2(2):51-78.

[2]李寶莉,陳雅慧,胡 銳,等.復方酸棗仁油梔子油對小鼠的鎮(zhèn)靜、催眠和抗驚厥作用[J].南方醫(yī)科大學學報,2008,28(9):1636-1639.

[3]李軍生,鄒義英.維生素E作用機制研究新進展[J].中國醫(yī)院藥學雜志,2005,25(6):556-558.

[4]Caifiths A J,Humphreys S M,Clark M L.Forearm substrate utilization during exercise after a meal containing both fat and carbohydrate[J].Clin SCL,1994,86(2):169-175.

[5]張雪香,張 月.西洋參人參皂甙抗疲勞作用的實驗研究[J].中國公共衛(wèi)生學報,1998,17(4):238-239.