張曉勇

(山東環(huán)山集團(tuán)，山東煙臺(tái) 264006)

乳酸菌等益生菌對(duì)動(dòng)物的消化和健康起著至關(guān)重要的作用，尤其在反芻動(dòng)物的瘤胃微生物蛋白生產(chǎn)中作用更加突出。乳酸菌添加劑作為一種新型的微生態(tài)飼料添加劑，替代抗生素，提高動(dòng)物飼料效率、促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)、預(yù)防疾病、提高經(jīng)濟(jì)效益方面發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用[1]。微生態(tài)制劑在單胃動(dòng)物和水產(chǎn)方面的應(yīng)用效果顯著，但在反芻動(dòng)物方面應(yīng)用的報(bào)道較少[2]。反芻動(dòng)物體內(nèi)本身含有大量的益生菌與微生態(tài)制劑的成分有相似之處。成年反芻動(dòng)物對(duì)粗飼料的消化能力取決于瘤胃內(nèi)微生物的數(shù)量，增加瘤胃內(nèi)微生物的含量后，從而提高動(dòng)物的反芻能力，促進(jìn)小腸中微生物蛋白的總流量，從而使蛋白的沉積增加。本試驗(yàn)通過(guò)在飼糧中添加不同酸度的乳酸菌飼料添加劑，研究其對(duì)6月齡梅花鹿的采食量、消化率以及小腸微生物氮流量的影響，從而確定乳酸菌飼料添加劑在梅花鹿飼喂時(shí)的最適酸度，測(cè)定乳酸菌飼料添加劑對(duì)6月齡梅花鹿飼喂效果，以便在生產(chǎn)中應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)日糧

精料補(bǔ)充料（購(gòu)于吉林公主嶺漢紅牧業(yè)）,粗飼料使用揉制的玉米秸稈。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理

選擇健康、6月齡馴化好的梅花鹿4只，裝入代謝籠中，進(jìn)行編號(hào)，每天飼喂1次（16:30飼喂），先喂精料補(bǔ)充料（200 g/d），然后添加粗飼料，粗飼料自由采食，自由飲水。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)時(shí)間：2010年12月5日至2011年1月25日,整個(gè)試驗(yàn)每期20 d，預(yù)試期15 d，試驗(yàn)期5 d，試驗(yàn)期每天記錄動(dòng)物的采食量，排糞量與排尿量，在集尿盆中每天加入10 ml的10%的稀硫酸。試驗(yàn)以乳酸菌飼料添加劑在綿羊中的添加水平為參考；同時(shí)考慮動(dòng)物體重差異性，采用（自身）配對(duì)的單因素試驗(yàn),試驗(yàn)分3期進(jìn)行，設(shè)第一期為對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，第二期為未調(diào)酸組（pH值5.6乳酸菌組），飼喂基礎(chǔ)日糧+10 g/d未調(diào)酸乳酸菌添加劑，第三期為調(diào)酸組（pH值3.72乳酸菌組），飼喂基礎(chǔ)日糧+10 g/d酸度調(diào)到3.72乳酸菌飼料添加劑，具體試驗(yàn)方案見表1。

表1 試驗(yàn)方案

1.4 樣品采集與處理

在試驗(yàn)前采集精飼料與粗飼料，每天飼喂前采集前1 d的糞樣并稱重，收集剩料量，記錄采食量，取糞便總量的10%，使用10%的稀硫酸噴霧10 ml固氮，在65℃進(jìn)行干燥，并記錄干燥后重量，將每期每只梅花鹿的5個(gè)樣品混合并保存；收集全部尿液并稱重，取尿液總量的10%裝在一個(gè)密閉的容器內(nèi)混勻，于冰箱中冷凍保存。

1.5 測(cè)定指標(biāo)及方法

測(cè)定指標(biāo)：干物質(zhì)、有機(jī)物質(zhì)、粗纖維、粗蛋白[3-4]、氮平衡和小腸微生物氮流量。

小腸微生物氮流量測(cè)定方法：將尿酸標(biāo)準(zhǔn)樣品（Sigma色譜級(jí)試劑）溶于堿化的熱水中（用1 N的氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH值為10），當(dāng)尿酸溶解后再用稀磷酸調(diào)節(jié)pH值為6，配制成1 N的母液。分別取1.25、2.5、5、7.5、10、15、20 ml母液定容到 100 ml，配制成濃度為 12.5、25、50、75、100、150、200 μmol的尿酸溶液，以蒸餾水為空白樣，利用紫外分光光度計(jì)(型號(hào)：UV-1800)在260 nm處測(cè)定A值分別為0.033、0.069、0.109、0.158、0.268、0.358、0.482，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得出回歸方程，利用回歸方程計(jì)算出尿酸當(dāng)量。然后以尿液中尿酸當(dāng)量值來(lái)估測(cè)梅花鹿小腸微生物氮流量。公式為：Y=4.137+1.245X（盧天鳳，2004）[5]；其中 Y(g/d)為小腸的微生物氮流量。X(mmol/d)為鹿的尿酸當(dāng)量值。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

數(shù)據(jù)采用Excel 2003和SPSS16.0軟件輔助進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析（±Sd），統(tǒng)計(jì)顯著水平預(yù)設(shè)為 P＜0.05。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 不同酸度水平的乳酸菌添加劑對(duì)6月齡梅花鹿干物質(zhì)采食量、可消化干物質(zhì)及干物質(zhì)消化率的影響(見表2)

表2 梅花鹿的干物質(zhì)采食量、可消化干物質(zhì)及干物質(zhì)消化率

由表2可知：添加不同酸度的乳酸菌添加劑可明顯提高梅花鹿干物質(zhì)采食量(P＜0.05)，其中以pH=5.6乳酸菌組最高，各組間差異顯著(P＜0.05)；不同酸度的乳酸菌添加劑可提高梅花鹿可消化干物質(zhì)，pH=5.6的乳酸菌組最高，各處理組間差異不顯著(P＞0.05)；不同處理組間梅花鹿干物質(zhì)的消化率差異不顯著(P＞0.05)。

2.2 不同酸度水平的乳酸菌添加劑對(duì)6月齡梅花鹿有機(jī)物采食量、可消化有機(jī)物及有機(jī)物消化率的影響（見表3）

表3 梅花鹿的有機(jī)物采食量、可消化有機(jī)物及有機(jī)物消化率

由表3可知：添加不同酸度的乳酸菌添加劑可明顯提高梅花鹿有機(jī)物質(zhì)采食量(P＜0.05)，其中以pH值5.6乳酸菌組最高，各組間表現(xiàn)差異顯著(P＜0.05)；添加pH值5.6乳酸菌組的梅花鹿可消化的有機(jī)物顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，其余各組間差異不顯著(P＞0.05)；各處理組間梅花鹿有機(jī)物消化率差異不顯著(P＞0.05)。

2.3 不同酸度水平的乳酸菌添加劑對(duì)6月齡梅花鹿蛋白的采食量、可消化蛋白及蛋白消化率的影響（見表4）

表4 梅花鹿的蛋白采食量、可消化蛋白及蛋白消化率

由表4可知：添加不同酸度的乳酸菌添加劑與對(duì)照組相比，可顯著提高梅花鹿蛋白采食量（P＜0.05），其中以pH=5.6乳酸菌組最高，pH=5.6乳酸菌組梅花鹿蛋白采食量與pH=3.72乳酸菌組相比差異不顯著（P＞0.05）；不同酸度的乳酸菌添加劑組與對(duì)照組相比，有提高梅花鹿可消化蛋白的趨勢(shì)，其中以pH=5.6乳酸菌組最高，但各處理間差異不顯著（P＞0.05）；各處理間梅花鹿蛋白消化率差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 不同酸度水平的乳酸菌添加劑對(duì)6月齡梅花鹿采食氮、排出氮及沉積氮的影響（見表5）

表5 采食氮、排出氮（糞氮與尿氮量）及氮沉積(g/d)

由表5可知：添加不同酸度的乳酸菌添加劑與對(duì)照組相比，可顯著提高梅花鹿氮采食量（P＜0.05），其中以pH＝5.6乳酸菌組最高，pH＝5.6乳酸菌組梅花鹿氮采食量與pH＝3.72乳酸菌組相比差異不顯著（P＞0.05）；各處理水平梅花鹿氮排出量差異不顯著（P＞0.05）；添加pH＝5.6乳酸菌組梅花鹿的氮沉積顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），其余各處理組間差異均不顯著(P＞0.05)。

2.5 不同酸度水平的乳酸菌添加劑對(duì)6月齡梅花鹿粗纖維的采食量、可消化粗纖維及粗纖維消化率的影響（見表6）

由表6可知：不同酸度的乳酸菌添加劑可顯著提高梅花鹿粗纖維采食量（P＜0.05），其中以pH=5.6乳酸菌組最高，各組間表現(xiàn)差異顯著（P＜0.05）；添加不同酸度的乳酸菌對(duì)梅花鹿可消化粗纖維有影響，其中除pH=5.6乳酸菌組梅花鹿的可消化粗纖維顯著高于對(duì)照組外（P＜0.05），其余各處理間差異均不顯著(P＞0.05)；不同酸度的乳酸菌添加劑對(duì)梅花鹿粗纖維消化率影響差異不顯著（P＞0.05）。

表6 梅花鹿的粗纖維采食量、可消化粗纖維及粗纖維的消化率

2.6 不同酸度水平的乳酸菌添加劑對(duì)6月齡梅花鹿尿液中尿酸當(dāng)量的影響

以測(cè)定的A值為橫坐標(biāo)，尿酸標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度為縱坐標(biāo)，建立尿酸濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線（見圖1），表明尿酸濃度值與A值兩者之間強(qiáng)正相關(guān)（r=0.995，R2=0.991，P＜0.01），其回歸方程為：Y=410.75(Se17.538)X+0.831 9（Se4.569）。

式中：Y——尿酸濃度值（μmol/l）；

X——對(duì)應(yīng)濃度的吸光度A值。

圖1 尿酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

表7 梅花鹿小腸微生物氮流量

表明利用751在260 nm處測(cè)定的A值，通過(guò)回歸方程可求出尿中尿酸濃度值。然后以尿液中尿酸當(dāng)量值來(lái)估測(cè)梅花鹿小腸微生物氮流量（見表7）。由表7可知：pH=5.6乳酸菌組梅花鹿小腸微生物氮流量顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，pH=3.72乳酸菌組梅花鹿小腸微生物氮流量與對(duì)照組和pH=5.6乳酸菌組差異不顯著（P＞0.05）。

2.7 梅花鹿氮沉積與小腸微生物氮流量之間的回歸分析

以小腸微生物氮流量為橫坐標(biāo)，梅花鹿氮沉積為縱坐標(biāo)，檢測(cè)兩者的直線回歸關(guān)系（見圖2），表明小腸微生物氮流量與氮沉積兩者之間強(qiáng)正相關(guān)（r=0.993 3，R2=0.986 7，P＜0.01）,其回歸方程為：Y=0.281 9X（Se0.033）-0.793 1（Se0.297）。

式中：Y——氮沉積量（g/d）；

X——對(duì)應(yīng)的小腸微生物氮流量。

圖2 6月齡梅花鹿小腸微生物氮流量與氮沉積關(guān)系

3 討論

3.1 不同酸度的乳酸菌添加劑對(duì)6月齡梅花鹿采食量的影響

反芻動(dòng)物的采食量受日糧特性的影響，采食量與日糧在瘤胃中降解率和食糜在小腸中排空的速度成正相關(guān)（金立明等，2004）[6]。本研究添加未調(diào)酸的乳酸菌添加劑與對(duì)照組相比，可明顯提高6月齡梅花鹿的采食量；添加調(diào)酸的乳酸菌添加劑與對(duì)照組相比，采食量明顯增加，增加幅度不如未調(diào)酸組。原因如下：①對(duì)于試驗(yàn)結(jié)果中采食CP量、采食氮兩項(xiàng)指標(biāo)，如果調(diào)酸組與對(duì)照組間干物質(zhì)采食量差異顯著，飼喂日糧中蛋白含量測(cè)定準(zhǔn)確，那么調(diào)酸組與對(duì)照組間蛋白采食量、氮采食量也應(yīng)該差異顯著，試驗(yàn)結(jié)果則是差異不顯著，顯著性檢測(cè)結(jié)果為P=0.065。原因可能是試驗(yàn)采集的粗飼料樣混合不均，誤差造成。②乳酸菌飼料中添加的乳酸菌促進(jìn)瘤胃微生物的增長(zhǎng)，使微生物分泌的酶濃度增加，促進(jìn)飼糧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在瘤胃內(nèi)的降解率；乳酸菌在瘤胃內(nèi)大量增殖后，分泌大量的乳酸，降低了瘤胃內(nèi)食糜的酸度，從而促進(jìn)了食糜在小腸中排空的速度；瘤胃內(nèi)日糧的降解率與食糜在小腸中排空的速度加快，致使動(dòng)物的采食量提高。③調(diào)酸后的乳酸菌飼料添加劑進(jìn)入瘤胃內(nèi)，使瘤胃內(nèi)酸度降低，在一定程度上可能會(huì)抑制微生物的生長(zhǎng)，降低梅花鹿的消化性能，最終會(huì)影響動(dòng)物的采食；這與李忠寬等（2001）[7]的報(bào)道一致。

3.2 不同酸度的乳酸菌添加劑對(duì)6月齡梅花鹿可消化物質(zhì)的影響

李忠寬等（2001）[7]報(bào)道：反芻動(dòng)物瘤胃酸度pH值偏低，會(huì)影響飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在體內(nèi)正常消化。本試驗(yàn)顯示：添加乳酸菌可提高動(dòng)物的可消化營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，調(diào)酸組與對(duì)照組相比雖有增幅，但不如未調(diào)酸組與對(duì)照組間的增幅明顯；而且未調(diào)酸組與對(duì)照組間DOM、DCF差異顯著。結(jié)果分析：①蛋白的可消化量雖有增加，但差異不大，部分原因分析如下：尿液中含有部分嘌呤衍生物，在糞尿分離時(shí)進(jìn)行的不完全，可能有部分誤差，因此最好應(yīng)參考氮沉積的數(shù)據(jù)。②對(duì)于試驗(yàn)結(jié)果中DOM量大于DDM量這樣的試驗(yàn)結(jié)果，無(wú)論從營(yíng)養(yǎng)學(xué)還是從物質(zhì)守恒角度考慮都是不正確的，分析考慮原因如下：動(dòng)物采食的精料采用的是顆粒飼料(風(fēng)干樣200 g/d)，粗料采用的是揉碎的玉米秸稈(動(dòng)物自由采食)，測(cè)定粗料OM含量若與真實(shí)值差1%，就會(huì)出現(xiàn)這樣的結(jié)果?？紤]粗料的加工、采樣過(guò)程，造成這樣的結(jié)局就可以理解了，但是在比較DOM量時(shí)是不受影響的。③由于乳酸菌等瘤胃微生物在瘤胃內(nèi)的大量增值，提高了有機(jī)物質(zhì)（CF）的利用，從氮沉積上就可以知道瘤胃內(nèi)微生物的增殖情況。因此就會(huì)出現(xiàn)未調(diào)酸組與對(duì)照組間DOM、DCF差異顯著的情況。④調(diào)酸后的乳酸菌飼料添加劑進(jìn)入瘤胃內(nèi)，使瘤胃內(nèi)酸度降低，在一定程度上可能會(huì)抑制微生物的生長(zhǎng)，降低梅花鹿可消化物質(zhì)的量。

3.3 不同酸度的乳酸菌添加劑對(duì)6月齡梅花鹿消化率的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明：添加不同酸度的乳酸菌添加劑，各處理間梅花鹿消化率雖有變化，但差異不顯著。據(jù)Lessard(1987)報(bào)道[8],0.1%的乳酸菌添加量雖然提高豬生長(zhǎng)9.8%,但對(duì)飼料轉(zhuǎn)化率卻毫無(wú)影響。據(jù)丁保安報(bào)道：在羔羊全混合基礎(chǔ)日糧中添加益生素可明顯提高羔羊的日增重、鈣、磷以及CP的表觀消化率[9]。金立明等研究乳酸菌類加酶益生素對(duì)梅花鹿仔鹿和羔羊日糧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率影響的結(jié)果表明：添加益生素可明顯提高仔鹿和羔羊的干物質(zhì)采食量，但試驗(yàn)組干物質(zhì)、有機(jī)物質(zhì)、粗蛋白和中性洗滌纖維的消化率顯著低于對(duì)照組[6]，本試驗(yàn)動(dòng)物采食量研究結(jié)果與金立明（2004）的報(bào)道一致,而消化率則與 Lessard（1987）報(bào)道一致。

3.4 不同酸度的乳酸菌添加劑對(duì)6月齡梅花鹿小腸微生物氮流量的影響

對(duì)于反芻動(dòng)物，評(píng)價(jià)一種飼料的優(yōu)劣應(yīng)該以瘤胃內(nèi)微生物的生產(chǎn)量或小腸中微生物的流量為依據(jù)。據(jù)報(bào)道小腸中微生物的流量與尿液中嘌呤衍生物的量成正相關(guān)（Chen等，1992）[10]，尿中嘌呤衍生物的量與尿中尿酸當(dāng)量強(qiáng)正相關(guān)（盧天鳳，2004）[5]；本試驗(yàn)通過(guò)分析氮沉積與尿中尿酸當(dāng)量間的關(guān)系，結(jié)果表明二者間呈現(xiàn)強(qiáng)正相關(guān)，確定采用尿酸當(dāng)量法來(lái)評(píng)價(jià)反芻動(dòng)物對(duì)氮的利用是可靠的。通過(guò)尿酸當(dāng)量值來(lái)估測(cè)小腸微生物氮流量的試驗(yàn)結(jié)果與通過(guò)氮沉積來(lái)評(píng)價(jià)反芻動(dòng)物對(duì)添加劑的利用效果是一致。

4 結(jié)論

在6月齡梅花鹿飼養(yǎng)中添加10 g/d未調(diào)酸的乳酸菌飼料添加劑能提高梅花鹿的采食量、氮沉積和小腸微生物氮流量，在本試驗(yàn)范疇內(nèi)是最適宜的選擇。

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