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        乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4的表達及其意義

        2012-08-02 01:00:52萬彥彬李觀強李朝輝
        海南醫(yī)學 2012年17期
        關鍵詞:血清檢測

        萬彥彬,李觀強,李朝輝

        (深圳市龍崗區(qū)人民醫(yī)院檢驗科,廣東 深圳 517182)

        乙型肝炎是臨床常見疾病,患者發(fā)病過程中除了肝細胞中相關蛋白異常表達,還可引起血清中相關蛋白的表達增加。Toll樣受體(Toll-like receptor,TLR)至今已發(fā)現10余個[1],它通過識別病原相關的分子模式及某些內源性配體,引發(fā)信號轉導并導致炎癥介質的釋放,在天然防御中起重要作用,并最終激活獲得性免疫系統(tǒng)[2]。目前研究中多為檢測外周血單個核細胞中TLR的表達水平,尚未見TLR為分泌型表達的相關報道,尤其是在乙型肝炎病變中。本實驗通過酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測血清中TLR2和TLR4的表達,探討其表達意義及相互關系,為探討腫瘤的生物學行為提供必要的理論依據。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 收集2010年1月至2011年12月在我院確診為乙型肝炎患者的血清標本。共130例作為觀察組,納入標準均符合慢性乙型肝炎防治指南2010年更新版。本組患者中慢性乙型肝炎46例,乙型肝炎肝硬化57例,重型肝炎27例。本組中男性患者70例,女性患者60例。年齡24~69歲,平均(49.89±8.55)歲。排除標準:①近三個月有嚴重感染的患者;②伴有其他嚴重內臟器官疾病的患者;③有風濕病史的患者;④伴有惡性腫瘤的患者。收集同期體驗證實為健康的成人血清60例作為對照組,其中男性40例,女性20例,年齡25~68歲。觀察組與對照組在一般臨床資料的比較中,無明顯差別,可以進行臨床比較。

        1.2 TLR2和TLR4表達的檢測 TLR2和TLR4 ELISA試劑盒均購自上海研吉生物科技有限公司。觀察組患者在確診為乙型肝炎后次日早晨空腹抽取靜脈血5 ml,經枸椽酸鈉抗凝后,以3 000 r/min離心10 min,留取血漿,于-20℃冰箱中凍存?zhèn)溆?;對照組采血方法同上。本組均在取血后一個月內檢測。應用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測血清中TLR2和TLR4的表達。檢測均由同一檢驗師操作,步驟嚴格按照操作說明進行,嚴格質控。

        1.3 統(tǒng)計學方法 應用SAS6.12統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,兩組間比較采用t檢驗,多組間比較應用方差分析,同時應用SNK法進行兩兩比較,而相關分析應用線性相關分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

        2 結果

        2.1 觀察組與對照組血清中TLR2和TLR4表達的比較 TLR2和TLR4在觀察組血清中的表達量明顯高于對照組,見表1。

        表1 兩組血清中TLR2和TLR4表達的比較(ng/L,±s)

        表1 兩組血清中TLR2和TLR4表達的比較(ng/L,±s)

        注:與對照組比較,**P<0.05。

        *

        2.2 乙型肝炎不同病變程度患者血清中TLR2和TLR4表達的比較 觀察組中TLR2和TLR4在乙肝患者不同分型的比較中差異均有統(tǒng)計學意義,即TLR2和TLR4在慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、重型肝炎中的表達依次升高,見表2。

        表2 觀察組中TLR2和TLR4在不同分組患者的表達(ng/L,±s)

        表2 觀察組中TLR2和TLR4在不同分組患者的表達(ng/L,±s)

        注:經方差分析,組間比較應用SNK法進行兩兩比較。*組間比較差異均有統(tǒng)計學意義。

        組別慢性乙型肝炎乙型肝炎肝硬化重型肝炎27例數46 TLR2 74.12±11.94 t P t P 8.68 0.0019**TLR4 78.64±17.24 7.32 0.0019**57 83.43±26.35 99.67±28.53 112.33±25.53 118.60±36.46*

        2.3 乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4表達的關系 經相關分析,觀察組患者血清中TLR2和TLR4的表達呈正相關(P=0.021 4,r=0.39)。

        3 討論

        TLRs作為具有免疫調節(jié)作用的物質,能有效的識別受體,包括對病原和病毒的特異性的位點的識別。也有研究認為TLRs可以形成機體免疫調節(jié)的重要防線,并通過信號轉導,調節(jié)內環(huán)境中細胞合成物質的釋放,而在此過程中TLR2主要針對G+桿菌、螺旋體和支原體等[3]。而TLR4作為內毒素的特異性受體,通過識別血清內毒素,與LPS/LBP/CD14結合,可以激活IRAK家族,可以成功誘導核因子的活化,進而發(fā)揮生物學作用[4]。TLR-4還可以激活靶基因轉錄,釋放一系列細胞因子,引起肝組織細胞的廣泛損傷。當機體感染肝炎病毒后,在機體清除病毒、病毒感染的慢性化及重癥肝損傷的各個環(huán)節(jié)中,TLR2和TLR4的高表達均起到了重要的促進作用[5],還有研究認為TLR-2的作用可能通過與NF-κB作用實現的[6]。

        本實驗對收集的血清標本應用酶聯(lián)免疫吸附實驗進行檢測,結果顯示乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4的表達明顯增高,提示TLR2和TLR4在乙型肝炎發(fā)生中可能起重要促進作用。在乙型肝炎不同類型分組的比較中,我們能明顯觀察到慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化及重型肝炎的表達依次增強,提示TLR2和TLR4在乙型肝炎病變發(fā)展中起重要作用,也提示臨床中聯(lián)合檢測TLR2和TLR4可能是初步判斷病情嚴重程度的重要指標。相關分析顯示乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4的表達呈正相關,提示二者具有明顯協(xié)同作用,并參與肝炎的發(fā)展過程。而慢性肝炎患者發(fā)病時過程中,胃腸道的黏膜出現明顯的病變,引起靜脈內淤血,而且肝細胞出現變性和壞死,引起蛋白產生減少,機體的免疫力低下,竇內皮細胞清除功能下降,因此對毒素的吞噬和清除功能降低,伴發(fā)內毒素血癥。還有學者認為肝硬化時內毒素的表達升高,引起TLR4異常表達,對疾病進展中發(fā)揮了重要作用[7]。TLR2信號途徑可能起較為重要的作用,其原因是TLR2可對病原體直接產生防御反應,從而介導天然免疫反應,并同時誘發(fā)機體繼發(fā)免疫反應。鑒于乙肝患者的病情越重,TLR2的表達強度越高,也間接說明TLR2參與了乙型肝炎發(fā)病過程中的免疫損傷[8]。

        總之,乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4高表達,二者可能具有協(xié)同作用。聯(lián)合檢測血清中TLR2和TLR4可能對判斷病情的嚴重程度有重要價值。

        [1]Round JL,Lee SM,Li J,et al.The Toll-like receptor 2 pathway establishes colonization by a commensal of the human microbiota[J].Science,2011,332(6032):974-977.

        [2] Li N,Chen MQ,Qian ZP,et al.Correlation of the expression of toll-like receptors in monocyte-derived dendritic cells with prognosis of chronic severe hepatitis B[J].J Dig Dis,2011,12(2):117-124.

        [3]陳 煜,時紅波,張 帆,等.慢性重型肝炎患者外周血單個核細胞中TLR2、TLR3和TLR9的mRNA表達[J].肝臟,2010,15(4):244-246.

        [4]張進祥,吳河水,王 慧,等.小鼠肝缺血再灌注后Toll樣受體2在缺血肝組織中的激活及其意義[J].中國普通外科雜志,2005,14(2):114-117.

        [5]Zhang Y,Lian JQ,Huang CX,et al.Overexpression of Toll-like receptor 2/4 on monocytes modulates the activities of CD4(+)CD25(+)regulatory T cells in chronic hepatitis B virus infection[J].Virology,2010,397(1):34-42.

        [6]Toubiana J,Rossi AL,Grimaldi D,et al.IMPDHII Protein Inhibits Toll-like Receptor 2-mediated Activation of NF-{kappa}B[J].J Biol Chem,2011,286(26):23319-23333.

        [7]Chen Z,Cheng Y,Xu Y,et al.Expression profiles and function of Toll-like receptors 2 and 4 in peripheral blood mononuclear cells of chronic hepatitis B patients[J].Clin Immunol,2008,128(3):400-408.

        [8]郭云蔚,尉秀清,李永偉,等.慢性乙型肝炎患者肝組織中Toll樣受體2的表達及其臨床意義[J].新醫(yī)學,2007,38(2):79-81.

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