王佳君

上海科華生物工程股份有限公司，上海 200233

1 目前主要的檢測(cè)方法

1.1 免疫比濁法

免疫比濁法適用于自動(dòng)化分析，免疫散射要有專門儀器，免疫透射比濁法可用自動(dòng)生化分析儀。大多數(shù)生化自動(dòng)分析儀要求反應(yīng)在10分鐘內(nèi)完成，所以必須有高活性抗體和合適的反應(yīng)體系，且檢測(cè)血清用量大，在常用PEG反應(yīng)體系中存在明顯的非特異性反應(yīng)，需依賴表面活性劑作用來加速反應(yīng)速度和減少非特異性反應(yīng)。Levine等設(shè)計(jì)免疫比濁自動(dòng)反應(yīng)體系中含22.5g/L PEG，2g/L明膠等表面活性劑，10分鐘反應(yīng)線形范圍＞2.6g/L，不受蛋白纖溶酶原（pg）、ApoB、TG等干擾，能識(shí)別11種LP（a）的多態(tài)型，與ELISA有良好相關(guān)性。

1.2 粒子增強(qiáng)免疫比濁測(cè)定法

原理與免疫比濁法一樣，主要區(qū)別在于從抗血清IgG后，吸附或交聯(lián)于膠乳表面，因其有一定粒徑，可增強(qiáng)光散射強(qiáng)度等原因，可使度法靈敏度達(dá)到ng/ml水平。同時(shí)因抗體的固相化，增加了穩(wěn)定性。

本次評(píng)價(jià)采用市場(chǎng)上常用的普通免疫比濁法的試劑盒，與粒子增強(qiáng)免疫比濁測(cè)定法的試劑盒進(jìn)行比較，以了解現(xiàn)在市場(chǎng)上采用不同方法試劑的現(xiàn)狀。

2 采取的主要實(shí)驗(yàn)方法

2.1 實(shí)驗(yàn)所用試劑

免疫比濁法:羅氏:646866；

粒子增強(qiáng)法:第一化學(xué):815RA1（試劑）813 RA1（校準(zhǔn)品）邁克:0611031。

2.2 實(shí)驗(yàn)儀器

日立全自動(dòng)生化分析儀7100。

2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:

1）準(zhǔn)確性測(cè)定

測(cè)定項(xiàng)目 靶值范圍 羅氏免疫比濁法邁克粒子增強(qiáng)法羅氏Cfas第一化學(xué)粒子增強(qiáng)法57.14 24.9 2934.44% -41.41% -31.76%42.5 mg/dl羅氏Control 115.4-23.2（1）21.2-32.0（2）mg/dl 24.25 13.85 13.9羅氏Control 276.6-115（1）89-137（2）mg/dl 114 54.6 64.6

2）Bio-Rad Control范圍1為Beckman Coulter IMMAGE標(biāo)示值，范圍2為Roche cobas

INTEGRA標(biāo)示值。

由羅氏Cfas結(jié)果可知，羅氏結(jié)果偏高34.44%，而第一化學(xué)與邁克結(jié)果接近，偏低很多；由羅氏Control 1結(jié)果可知，羅氏試劑結(jié)果在標(biāo)示范圍內(nèi)，而第一化學(xué)與邁克結(jié)果接近，低于下限值；由羅氏Control 2結(jié)果可知，羅氏結(jié)果在范圍內(nèi)，而第一化學(xué)與邁克結(jié)果仍然低于范圍下限；由于Bio Control說明書上沒有提供日立機(jī)型的參考范圍，故將其他全自動(dòng)生化分析儀上的結(jié)果均進(jìn)行比較，除邁克 Bio Control2的結(jié)果在Beckman Coulter IMMAGE的標(biāo)示范圍內(nèi)，其他結(jié)果均不在標(biāo)示范圍內(nèi)。

2）相關(guān)性測(cè)定

將羅氏，第一化學(xué)，邁克3款試劑同時(shí)測(cè)定55份人血清樣本（注: Lp（a）含量超出線性范圍，用生理鹽水稀釋后測(cè)定，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)），結(jié)果統(tǒng)計(jì)如下:

測(cè)定樣本數(shù) 相關(guān)系數(shù) 回歸方程邁克-第一化學(xué) 55 0.9908 Y=1.2114x+1.7382邁克-羅氏 55 0.9120 Y=0.5784x-4.9798羅氏-第一化學(xué) 55 0.9129 Y=1.7601x+22.8

有以上結(jié)果可知，第一化學(xué)與邁克結(jié)果相近，相關(guān)系數(shù)R=0.9908，相關(guān)性很好；而羅氏與第一化學(xué)的相關(guān)系數(shù)R=0.9129；羅氏與邁克的相關(guān)系數(shù)R=0.9120；相關(guān)性不夠好。

3 結(jié)論

從以上數(shù)據(jù)結(jié)果表明，第一化學(xué)與邁克公司的LP（a）的定量測(cè)定試劑盒所測(cè)得的結(jié)果較為相近，普遍結(jié)果都要比羅氏公司的LP（a）的定量測(cè)定試劑盒的結(jié)果低上不少，究其原因可能第一化學(xué)與邁克公司的試劑盒均為粒子增強(qiáng)法試劑，體系相近，所以結(jié)果也相近；而此次試驗(yàn)中羅氏公司的試劑盒為常規(guī)的免疫比濁法試劑盒，且所用抗體為多抗，所測(cè)結(jié)果則較高。羅氏公司的試劑盒在測(cè)定羅氏control的結(jié)果都在給定的范圍內(nèi)，而第一化學(xué)與邁克的試劑盒的結(jié)果則偏出范圍外，低于給定范圍的下限，而且測(cè)定的Bio-Rad Control的結(jié)果幾乎都偏出所給參考范圍；在相關(guān)性實(shí)驗(yàn)中也體現(xiàn)出第一化學(xué)與邁克由于都是粒子增強(qiáng)法試劑盒，故相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.9908，而羅氏試劑盒所用方法不同，與第一化學(xué)，邁克公司的試劑盒的相關(guān)性并不好。說明市場(chǎng)上不同體系的LP（a）的定量測(cè)定試劑盒所測(cè)得的結(jié)果差異很大。

早在2004年，IFCC的生物標(biāo)準(zhǔn)化專家委員會(huì)就接受了“IFCC SRM 2B”為國際上第一個(gè)LP（a）免疫測(cè)定的WHO/IFCC國際參考物質(zhì)，該參考物質(zhì)的每個(gè)安瓿內(nèi)的LP（a）為0.1071nmol。但目前市場(chǎng)上常用的計(jì)算單位為mg/dl，又由于LP（a）結(jié)構(gòu)內(nèi)含的apo（a）具有多態(tài)性，特別是環(huán)餅區(qū)域K4的第2段中的相似環(huán)餅從3～40個(gè)不等，使得apo（a）的大小從187kDa到662kDa不等，也就導(dǎo)致LP（a）的分子量的不確定，故無法在2個(gè)單位間通過分子量進(jìn)行換算，因此從SRM 2B溯源的值無法在市場(chǎng)上得到普及，造成現(xiàn)在市場(chǎng)上各體系間的差異，希望在不久的將來，以SRM 2B為基準(zhǔn)溯源的結(jié)果能直接應(yīng)用于臨床，解決類似差異的問題。

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