孫小燕

參蟻膠囊由人參、螞蟻等中藥組成，是我院醫(yī)院制劑，具有免疫調(diào)節(jié)作用，主要用于治療白癜風(fēng)，在多年的運(yùn)用中取得良好效果。為了控制參蟻膠囊的質(zhì)量，保證臨床用藥效果，本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC法對(duì)參蟻膠囊中人參皂苷Rg1的含量進(jìn)行測(cè)定。經(jīng)方法學(xué)考察證實(shí)，該方法特異性高，回收率和精密度好，結(jié)果滿意。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試藥 515高效液相色譜系統(tǒng)(美國(guó)Waters公司);SB22200超聲波清洗器(上海Branson超聲波儀器廠)。人參皂苷Rg1對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):0703-200917);乙腈為色譜純;其余試劑為分析純;參蟻膠囊(江蘇省如皋市皮膚病防治所，每粒0.5 g，每瓶100粒，批號(hào):20100809、 20100914、 20101014、 20101225、20110221、20110324、20110425、20110526，其中前4批人參原料購(gòu)自南通藥材采購(gòu)供應(yīng)站，后4批人參原料購(gòu)自南京中藥飲片廠)。

1.2 方法與結(jié)果

1.2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性［1-2］色譜柱為HangBang C18(200mm ×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸(21∶79)，流速為1.0mL/min，進(jìn)樣量為10μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm。理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計(jì)算不低于2×103，被測(cè)組分及雜質(zhì)峰之間的分離度均大于1.5，處方中的其他成分及輔料無(wú)干擾(見圖1)。

1.2.2 溶液的制備 取參蟻膠囊12粒，稱重，得出平均粒重，傾出膠囊內(nèi)粉末，研勻，精密稱取5 g，精密加入10mL流動(dòng)相，精密稱定，超聲處理(功率300 W，頻率50 Hz)45min，室溫放置，精密稱定，補(bǔ)充缺失的重量，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，作為供試品溶液。

1.2.3 精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品12.65 mg，置100mL量瓶中，加適量流動(dòng)相溶解并定容，即得126.5μg/mL的對(duì)照品溶液。按參蟻膠囊配方制備不含人參的陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

1.2.4 線性關(guān)系的考察 按“1.2.1”項(xiàng)的色譜條件，取對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣 5、10、15、20、25、50μL，測(cè)定峰面積。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)、人參皂苷Rg1的量為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程:Y=1.847×104X-9.636×102(r=0.9998)。結(jié)果表明，人參皂苷 Rg10.633～6.326μg時(shí)，與峰面積的線性關(guān)系良好。

1.2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取10μL對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，其峰面積的RSD=0.95%。

1.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批參蟻膠囊，制備5份供試品溶液，分別進(jìn)樣，按“1.2.8”項(xiàng)的方法測(cè)定人參皂苷Rg1的含量，平均含量為0.2154 mg/粒，RSD=1.63%。

1.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于制備后 0、2、4、6、8、12、24 h 進(jìn)樣 10μL，記錄峰面積。其峰面積的RSD=0.82%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

1.2.8 回收試驗(yàn) 分別精密稱取5 g已測(cè)定含量的參蟻膠囊(含人參皂苷Rg10.2154 mg/粒)6份，分別精密加入 10、20、30mL 的126.5μg/mL人參皂苷Rg1對(duì)照品溶液，混勻后再按“1.2.7”項(xiàng)的方法測(cè)定人參皂苷Rg1的含量，其平均回收率為98.99%，RSD=0.56%(見表1)。

圖1 人參皂苷Rg1陰性樣品(A)、對(duì)照品(B)和樣品(C)溶液的色譜圖

表1 回收率測(cè)定結(jié)果

1.2.9 樣品的測(cè)定 取參蟻膠囊，按“1.2.2”項(xiàng)的方法制備成供試品溶液，在“1.2.1”項(xiàng)色譜條件下，分別取10μL供試品溶液和對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣。以峰面積按外標(biāo)法計(jì)算含量，測(cè)得8批樣品的含量分別為0.2154 mg/粒、0.2241 mg/粒、0.2108 mg/粒、0.2187 mg/粒、0.2218 mg/粒、0.2356 mg/粒、0.2191 mg/粒、0.2103 mg/粒，平均含量為0.2195 mg/粒，RSD=0.66%。

2 討論

取同一批號(hào)樣品內(nèi)容物，加流動(dòng)相適量，超聲處理 5、15、45、60min，測(cè)定峰面積。結(jié)果表明，超聲45min以上測(cè)得的人參皂苷Rg1峰面積不再增加，故采用超聲45min處理樣品。

測(cè)得8批參蟻膠囊中人參皂苷Rg1的含量均在0.2195 mg/粒左右?？紤]到藥材的來(lái)源、炮制加工、顆粒生產(chǎn)及貯存等因素，含量限度在8批均值的基礎(chǔ)上下降20%，故暫定本品含量限度為含人參皂苷Rg1不得少于0.2 mg/粒。

采用HPLC法測(cè)定參蟻膠囊中人參皂苷Rg1的含量，方法穩(wěn)定、快速、準(zhǔn)確，可作為其質(zhì)量控制的有效方法。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:7.

［2］楊麗敏，王紅艷.HPLC法測(cè)定參茸鹿胎丸中人參皂苷Rg1的含量［J］.中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2011，6(3):165-167.