唐成霞，徐連偉

（黑龍江省哈爾濱市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心，黑龍江哈爾濱 150070）

食品，特別是植物性食品，往往天然含有大量的硝酸鹽，如果保存和處理不當(dāng)，在硝酸鹽還原酶作用下這些食品可能產(chǎn)生大量的亞硝酸鹽。一次攝入過(guò)量的亞硝酸鹽可以引起高鐵血紅蛋白血癥，3個(gè)月以下兒童尤其敏感。同時(shí)，亞硝酸鹽還能與食品中常見(jiàn)的有機(jī)胺類物質(zhì)形成致癌性的N-亞硝基化合物，從而威脅人體健康[1-2]。

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法（GB/T5009.33—2010）中規(guī)定了亞硝酸鹽含量測(cè)定的方法，即試樣經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、去除脂肪后，在弱酸條件下亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸重氮化，再與鹽酸萘乙二胺偶合反應(yīng)，以分光光度法測(cè)定其亞硝酸鹽含量[3]。由于蔬菜中含有葉綠素等大量色素，會(huì)增大吸光度，使檢測(cè)結(jié)果偏高，造成檢測(cè)結(jié)果的誤判[4]?；钚蕴渴且环N價(jià)格低廉、吸附性能優(yōu)良的吸附劑，能夠吸附液體中的色素物質(zhì)，具有脫色、脫臭的良好效果[5-6]。筆者在國(guó)標(biāo)法的基礎(chǔ)上，研究活性炭加入時(shí)間和加入量對(duì)蔬菜中亞硝酸鹽含量測(cè)定的影響，以期為蔬菜中檢測(cè)亞硝酸鹽含量提供一種更準(zhǔn)確、快速的檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 材料

供試蔬菜品種為市售新鮮菜薹、大白菜、番茄、辣椒、茄子、甘藍(lán)、豇豆、苦瓜、黃瓜、韭菜、芥藍(lán)和芹菜。將蔬菜洗凈，晾去表面水分，用四分法取可食部分，切碎，用家用電動(dòng)攪拌機(jī)制成勻漿。

1.2 試劑與儀器

活性炭（分析純），亞鐵氰化鉀溶液106 g/L，乙酸鋅溶液220 g/L，飽和硼砂溶液，0.4%對(duì)氨基苯磺酸溶液，0.2%鹽酸蔡乙二胺溶液，NaNO2儲(chǔ)備液0.1 mg/mL，NaNO2標(biāo)準(zhǔn)使用液 5 μg/mL。Cary50瓦里安分光光度計(jì)，感量為0.1 mg和1.0 mg的天平。

1.3 活性炭加入時(shí)間選擇

稱取樣品30 g，置于100 mL燒杯中，加入12.50 mL硼砂飽和溶液，攪拌均勻，以70℃蒸餾水洗入500 mL容量瓶中，加入活性炭的時(shí)間設(shè)3個(gè)處理：處理A加入2.00 g活性炭后在90℃水中加熱15 min；處理B在90℃水中加熱15 min后加入2.00 g活性炭；處理C不加活性炭，直接在90℃水中加熱15 min。待冷卻后3個(gè)處理分別加入5 mL亞鐵氰化鉀溶液，搖勻后再加入5 mL乙酸鋅溶液，定容，混勻后過(guò)濾，濾液備用。

1.4 活性炭加入量的確定

以韭菜和大白菜為試材，稱取樣品30 g，置于100 mL燒杯中，加入12.50 mL硼砂飽和溶液，以70℃蒸餾水洗入500 mL容量瓶中，分別加入1.00、1.50、2.00、2.50、3.00、3.50 g活性炭，90 ℃水中加熱15 min，冷卻后加入5 mL亞鐵氰化鉀溶液，搖勻，再加入5 mL乙酸鋅溶液，定容，混勻后過(guò)濾，濾液備用。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

吸取40.0 mL上述濾液于50 mL帶塞比色管中，另吸取 0、0.20、0.40、0.80、1.00、1.50、2.00 mL 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液（相當(dāng)于 0、1.00、2.00、4.00、5.00、7.50、10.00μg亞硝酸鈉），分別置于50 mL容量瓶中。在標(biāo)準(zhǔn)瓶和試樣瓶中分別加入2 mL對(duì)氨基苯磺酸溶液，混勻，靜置3～5 min后各加入1 mL鹽酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混勻，靜置15 min，用2 cm比色杯，以零瓶調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長(zhǎng)538 nm處測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時(shí)做試劑空白。亞硝酸鹽（以亞硝酸鈉計(jì)）的含量計(jì)算公式，

式中，X為試樣中亞硝酸鈉的含量，單位為mg/kg；A為測(cè)定用樣液中亞硝酸鈉的質(zhì)量，單位為μg；m為試樣質(zhì)量，單位為g；V1為測(cè)定用樣液體積，單位為mL；V0為試樣處理液總體積，單位為mL。

1.6 精密度的測(cè)定

以芥菜和菜薹為材料，按試驗(yàn)結(jié)果所確定的活性炭用量和加入時(shí)間等進(jìn)行 10次重復(fù)測(cè)定，計(jì)算其測(cè)定值及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.7 回收率的測(cè)定

選取菜薹、白菜、茄子、絲瓜、芥菜和芥藍(lán)6種有代表性的蔬菜進(jìn)行回收率試驗(yàn)。稱取勻漿液30.00 g，加入0.10 mg/mL的亞硝酸鈉溶液0.50 mL，在稱樣時(shí)加入，每種蔬菜各稱取6個(gè)樣品，加標(biāo)與不加標(biāo)的各3個(gè)，然后用1.3和1.4確定的方法進(jìn)行回收率測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

以測(cè)得吸光值（y）為縱坐標(biāo)，亞硝酸鹽的量（x）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性方程為y=0.014 8x+0.002 3，相關(guān)系數(shù)r=0.999 47，結(jié)果表明蔬菜亞硝酸鹽的量在0～10μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1 亞硝酸鹽含量標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 活性炭不同加入時(shí)間對(duì)蔬菜亞硝酸鹽含量測(cè)定的影響

由表1可知，處理A和處理B測(cè)得的各個(gè)蔬菜中亞硝酸鹽含量均低于處理C。其中，處理B測(cè)得的蔬菜中亞硝酸鹽含量高于處理A，并且蔬菜色素含量越高，2個(gè)處理間的差值就越大，表明處理A對(duì)蔬菜色素的脫除效果更優(yōu)。

2.3 活性炭不同加入量對(duì)蔬菜亞硝酸鹽含量測(cè)定的影響

由圖2、3可知，韭菜和白菜中亞硝酸鹽含量隨著活性炭加入量的增加而逐漸降低，加入2.00、2.50、3.00 g活性炭后測(cè)得的2種蔬菜中亞硝酸鹽含量趨于穩(wěn)定。

表1 活性炭不同加入時(shí)間對(duì)蔬菜中亞硝酸鹽含量測(cè)定的影響 mg/kg

圖2 活性炭不同加入量對(duì)韭菜中亞硝酸鹽含量測(cè)定的影響

圖3 活性炭不同加入量對(duì)白菜中亞硝酸鹽含量測(cè)定的影響

2.4 回收率和精密度

回收率試驗(yàn)結(jié)果（表2）表明，處理A和2.0 g活性炭加入量的測(cè)定方法的加標(biāo)回收率在97.9%～102.6%，表明該方法具有較高的回收率，證明其準(zhǔn)確度較高。

以黃瓜和芹菜為材料，按該方法重復(fù)測(cè)定10次，樣品中亞硝酸鹽含量分別為 (0.639±0.005 98)mg/kg和(2.494±0.020 50)mg/kg，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.935%和0.823%，說(shuō)明該方法具有良好的重現(xiàn)性和精密度。

3 小結(jié)

（1）試驗(yàn)結(jié)果表明，蔬菜亞硝酸鹽含量測(cè)定中，加入2.0 g活性炭后水浴可有效消除色素干擾，并且重現(xiàn)性好，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

（2）活性炭用量、脫色溫度、脫色時(shí)間是決定活性炭吸附效果的重要因素[5]。周文斌[7]采用活性炭脫色法測(cè)定泡菜中亞硝酸鹽含量，提取最佳條件是70℃水浴中提取30～45 min，樣品液加入2 g活性炭粉，能有效排除色素干擾，提高準(zhǔn)確率。黃占權(quán)[8]等以酸黃瓜、青豆、蘑菇罐頭為研究對(duì)象，亞硝酸鹽提取的最佳條件是70℃水浴30～45 min，樣品液加入2 g活性炭粉，能有效排除色素干擾。此外，廖惠玲[9]等研究了不同pH條件對(duì)活性炭脫色法測(cè)定食品中亞硝酸鹽含量的影響，結(jié)果表明pH 11～12是排除色素的最佳范圍，既有效消除色素的干擾，又保證了結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。由此可見(jiàn)，測(cè)定食物亞硝酸鹽含量時(shí)，在國(guó)標(biāo)法的基礎(chǔ)上，加入活性炭可以有效地消除測(cè)定時(shí)產(chǎn)生的誤差，從而提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

[1]吳永寧.現(xiàn)代食品安全科學(xué)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2008.

[2]田大民,劉向云,李曉,等.可見(jiàn)分光光度法測(cè)定酸腌菜中亞硝酸根的含量[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,38(10):5312-5314.

[3]GB/T5009.33-2010,食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定[S].

[4]謝紅梅,張麗,許尊煉,等.活性炭脫除廢水中對(duì)硝基苯酚的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(19):9107-9109.

[5]莎娜,王國(guó)澤.活性炭對(duì)甘薯果脯廢糖液的脫色效果研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(36):18145-18146.

[6]盧其時(shí),陳敏,廖宗文.紫外分光光度法測(cè)定蔬菜硝態(tài)氮的改進(jìn)[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1997,18(4):104-106.

[7]周文斌.泡菜中亞硝酸鹽測(cè)定方法研究[J].食品科學(xué),2006,27(2):241-243.

[8]黃占權(quán),馮一兵,穆瑩.蔬菜罐頭亞硝酸鹽測(cè)定影響因素研究[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué),2009(2):129-131.

[9]廖惠玲,陳德云,陳國(guó)雄.用活性炭排除色素干擾測(cè)定食品中亞硝酸鹽的探討[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2001,11(6):734-735.

[10]孫鵬,徐璨璨,孫先鋒.大蒜浸提液對(duì)亞硝酸鹽清除作用的效果分析[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,48(3):702-704.

[11]楊美玲,朱運(yùn)德,崔東亞.不同方法處理后蔬菜中亞硝酸鹽含量的測(cè)定[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,49(10):2533-2534,2540.

[12]余海蘭,方京京.高效液相色譜法同步測(cè)定蔬菜中硝酸鹽和亞硝酸鹽含量[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué),2010(7):97-99.

[13]蔡麗,崔艷.硝酸鹽和亞硝酸鹽對(duì)食品的污染及控制[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技,2010(1):64-65.