楊艷敏，袁興福，魏永祥，王興東，魏 鑫，王 莉，張 舵

（1.遼寧省果樹科學(xué)研究所，遼寧熊岳 115009；2.遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，遼寧沈陽 1100161）

樹莓為薔薇科懸鉤子屬植物，果實(shí)富含多種維生素、SOD、花青素、鞣化酸等，具有特殊的保健和加工潛力，近年來國內(nèi)外市場(chǎng)的需求日益增加，加快了樹莓產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，常規(guī)的繁殖方式已難以滿足市場(chǎng)對(duì)苗木的需求，為此筆者進(jìn)行樹莓組織培養(yǎng)快繁技術(shù)的研究，并獲得理想結(jié)果[1-4]。

1 材料與方法

1.1 無菌材料的獲得

外植體處理：供試品種為托拉米、海爾特茲、秋紅，將外植體葉片從葉柄基部切除，枝條剪成1.0～1.5 cm左右含單個(gè)腋芽或頂芽的莖段用流水沖洗2～3 h后，在超凈工作臺(tái)上用75%酒精蕩洗30 s，再用0.1%的氯化汞溶液浸泡5～8 min，并不斷攪動(dòng)，倒去氯化汞溶液后用無菌水沖洗3～5次，經(jīng)用無菌濾紙吸去材料上的附著水，將芽上下兩端多余的莖段剪掉，留0.5 cm左右莖段，芽朝上接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。每瓶接種5個(gè)外植體，每處理接種10瓶，3 次重復(fù)[5]。

1.2 誘導(dǎo)培養(yǎng)基

設(shè)3個(gè)處理：

A1：MS+BA 0.5 mg/L+GA30.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L；A2：MS+BA 0.8 mg/L+GA30.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L；A3：MS+BA 1.0 mg/L+GA30.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L。

1.3 繼代增殖培養(yǎng)基

繼代增殖培養(yǎng)基設(shè)5個(gè)處理：當(dāng)試管苗長(zhǎng)至2～4 cm時(shí)進(jìn)行下一次的繼代。每次繼代時(shí)，將試管苗的莖條剪成單個(gè)芽的莖段，3個(gè)莖段為一叢，每瓶4～6叢接入培養(yǎng)基上。

B1：MS+BA 0.2 mg/L+IBA 0.1 mg/L+GA30.5 mg/L；B2：MS+BA 0.3 mg/L+IBA 0.1 mg/L+GA30.5 mg/L；B3：MS+BA 0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L+GA30.5 mg/L；B4：MS+BA 0.6 mg/L+IBA 0.1 mg/L+GA30.5 mg/L；B5：MS+BA 0.8 mg/L+IBA 0.1 mg/L+GA30.5 mg/L。

1.4 試管苗瓶?jī)?nèi)及瓶外生根培養(yǎng)

生根培養(yǎng)基設(shè)6個(gè)處理：以1/2 MS為基本培養(yǎng)基，IBA 濃度分別為：0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/L。將長(zhǎng)夠生根標(biāo)準(zhǔn)的試管苗，剪成2～3個(gè)芽一個(gè)單苗，去掉葉片或保留頂葉接種到生根培養(yǎng)基上，每個(gè)處理接種10瓶，每瓶接種10個(gè)單株，重復(fù)3次。

試管苗瓶外生根。供試材料為在壯苗培養(yǎng)基培養(yǎng)21 d后的托拉米、海爾特茲、秋紅組培苗；海藻素濃度為 400、500、667、1 000 mg/L，浸泡 3 ～ 5 min。以河沙+草炭土（1∶1）為培育基質(zhì)，每個(gè)處理300株，3次重復(fù)，以清水為對(duì)照。調(diào)查始生根天數(shù)、30 d后調(diào)查成活率和成活幼苗的生根率[3]。

供試材料為在壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)21 d后的海爾特茲組培苗，采用快速浸蘸和浸泡3～5 min 2種方式，生根誘導(dǎo)物選用 IBA(25、50、75、100 mg/L)、NAA(25、50、75、100 mg/L)和海藻素（400、500、667、1 000 mg/L）。以河沙+草炭土（1∶1）為培育基質(zhì)，每處理300株，3次重復(fù)，以清水為對(duì)照。栽植5 d后調(diào)查傷害率，始生根天數(shù)、30 d后調(diào)查成活率和成活幼苗的生根率。

1.5 移栽基質(zhì)篩選

培育基質(zhì)的篩選：基質(zhì)為河沙+園田土（1∶1）、河沙+草炭土（1∶1）、河沙+園田土+草炭土（1∶1∶1）、河沙(CK)。將試管苗浸泡在500 mg/L海藻素中3～5 min后，栽入4種基質(zhì)中，每處理300株，3次重復(fù)。30 d后調(diào)查成活率。

1.6 煉苗與定植

將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗去根部附著的培養(yǎng)基，再用 500 mg/L的海藻素快速浸沾后，栽入育苗盤中，基質(zhì)為河沙+園田土+草炭土（基質(zhì)經(jīng)55%敵克松可濕性粉劑配制的0.1%水溶液加惡霉靈稀釋1 000∶1 500倍噴施消毒）。移栽成活后，當(dāng)苗長(zhǎng)至15～20 cm時(shí)，即可轉(zhuǎn)入營(yíng)養(yǎng)缽中定植。

2 結(jié)果與分析

2.1 樹莓誘導(dǎo)培養(yǎng)基篩選

經(jīng)21～28 d培養(yǎng)后，樹莓不同品種在同一培養(yǎng)基上的培養(yǎng)效果明顯不同，同一品種在不同培養(yǎng)基上的表現(xiàn)也不同。通過表1可以看出：外植體在以MS為基本培養(yǎng)基附加BA 1.0 mg/L+GA30.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L上的誘導(dǎo)率達(dá)78.3%～84.4%（平均82.0%），效果均好于其他激素配比的培養(yǎng)基。

表1 各品種外植體在不同培養(yǎng)基上的誘導(dǎo)效果

2.2 繼代增殖培養(yǎng)

繼代增殖培養(yǎng)40 d后，調(diào)查新生芽數(shù)，計(jì)算增殖系數(shù)。紅樹莓的繼代周期為6周，以此計(jì)算，則全年的增殖次數(shù)為6.5次，平均每次的增殖倍數(shù)為3.6倍，每株無菌苗年增殖倍數(shù)為23.4倍。

BA濃度不僅對(duì)試管苗的增殖有很大影響，對(duì)苗的生長(zhǎng)狀態(tài)作用也很大。一般來說BA濃度較高時(shí)，試管苗的生長(zhǎng)狀態(tài)變?nèi)酰~柄較長(zhǎng)，葉片相對(duì)瘦小，有的組培苗會(huì)出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。而BA相對(duì)較低時(shí)，苗生長(zhǎng)狀態(tài)較好，不同品種對(duì)BA的適應(yīng)性不同。由表2可知，海爾特茲、秋紅增殖最適培養(yǎng)基為BA 0.5 mg/L，托拉米增殖最適培養(yǎng)基為BA 0.8 mg/L。

表2 組培苗在不同激素水平配比培養(yǎng)基上的增殖效果

2.3 試管苗生根培養(yǎng)

試驗(yàn)品種為海爾特茲，由表3可知，生根培養(yǎng)基不加IBA時(shí)，試管苗生根率僅為55.4%，根短且長(zhǎng)的慢。當(dāng)IBA為0.2～0.3 mg/L時(shí)，生根率提高到82.3%～97.3%，每株根數(shù)3～6條，根長(zhǎng)0.43～0.87 cm，根系堅(jiān)韌勻稱，質(zhì)量較好。當(dāng)IBA濃度增大到0.5 mg/L時(shí)，生根率下降到63.6%，每株根數(shù)1～3條，根長(zhǎng)0.10～0.58 cm，試管苗基部為愈傷組織，難以栽植成活。因此，合適的IBA濃度為0.3 mg/L。

表3 IBA對(duì)樹莓品種海爾特茲試管苗生根培養(yǎng)效果的影響

2.4 試管苗瓶外生根

2.4.1 海藻素對(duì)不同品種生根的影響。由表4可知，在一定范圍內(nèi)，隨著海藻素濃度的升高，3個(gè)品種的生根率和每株根數(shù)均呈先升高后下降的趨勢(shì)，當(dāng)海藻素濃度為500 mg/L時(shí)，海爾特茲、秋紅和托拉米成活率、生根率、每株根數(shù)、均達(dá)最高，極顯著高于其他3個(gè)濃度和對(duì)照。

2.4.2 不同生根誘導(dǎo)物瓶外生根效果。海爾特茲幼苗速蘸IBA、NAA和海藻素，其中海藻素濃度500 mg/L時(shí)，幼苗成活率和生根率最高，且生根速度快，栽植8 d時(shí)即可生根。海爾特茲幼苗浸泡IBA和NAA時(shí)，隨濃度的升高，傷害率逐漸增大，成活率和生根率逐漸降低。而海藻素浸泡幼苗無傷害，濃度為500 mg/L時(shí)效果最好，幼苗成活率和生根率較IBA高41.1～78.6個(gè)百分點(diǎn)，較NAA高56.4～88.0個(gè)百分點(diǎn)，生根率較IBA高 16.9～30.3個(gè)百分點(diǎn)，較NAA高18.8～31.2個(gè)百分點(diǎn)，且可提高植株生長(zhǎng)勢(shì)（見表5）。

2.4.3 培育基質(zhì)的篩選。托拉米在4種基質(zhì)中的生根率分別為河沙91.2%、河沙+園田土82.0%、河沙+草炭土94.7%，河沙+園田土+草炭土為89.7%，每株根數(shù)分別為 31.8、27.4、34.1 和 30.1 條。以河沙+草炭土=1∶1作為培育基質(zhì)時(shí)托拉米的生根率和每株根數(shù)最高，基質(zhì)為河沙+草炭時(shí)既保水又透氣，管理方便易行，為樹莓生根馴化最佳培育基質(zhì)（見表6）。

表4 海藻素對(duì)不同品種生根影響

2.5 移栽煉苗

栽苗采用扎孔定植法。深度0.5 cm，封嚴(yán)根際，隨栽隨澆水，栽后在植株上方覆蓋薄膜保濕，上遮蓋75%～80%遮陽網(wǎng)。一般在定植后7～10 d全天蓋膜、遮陽。溫度控制在13～23℃，若溫度≥25℃時(shí)一側(cè)揭膜放風(fēng)；空氣相對(duì)濕度保持50%～70%，5～7 d時(shí)噴殺菌藥，此時(shí)小苗長(zhǎng)出新根；移栽10～15 d，新葉生長(zhǎng)，新生根形成根群，此間溫度保持13～23℃，濕度≤50%，所蓋薄膜可兩側(cè)揭開，定時(shí)放風(fēng)，并增加光照，光強(qiáng)時(shí)仍須遮陽。此階段開始澆施營(yíng)養(yǎng)液，4～5 d一次，EC 1.0～1.3 ms/cm，可采取水肥交替，7 d噴一次保護(hù)性藥劑；移栽15～30 d時(shí)地上植株生長(zhǎng)，溫度保持13～25℃，濕度≤50%，去掉薄膜及遮陽網(wǎng)，全光照；而后水肥4～5 d一次，營(yíng)養(yǎng)液EC 1.3～1.5 ms/cm。當(dāng)植株生長(zhǎng)健壯，新葉3～5片且葉濃綠，高度1.0～1.5 cm，根群形成數(shù)量20～30條，長(zhǎng)度1～2 cm時(shí),開始移植到小營(yíng)養(yǎng)缽中。30 d后調(diào)查移栽成活率(見表7)。

表6 不同基質(zhì)生根情況

表7 移栽煉苗成活率

2.6 定植

當(dāng)苗高長(zhǎng)至10～20 cm時(shí)，即可轉(zhuǎn)入營(yíng)養(yǎng)缽中定植，基質(zhì)用田園土∶草炭＝（2～3）∶1，按干雞糞10 kg/m2混拌均勻，然后藥劑消毒（防治土傳病害的藥劑）采取分層噴施法，并覆蓋薄膜悶3～7 d即可。再用6 cm×6 cm營(yíng)養(yǎng)缽裝基質(zhì)，擺成寬20個(gè)缽、長(zhǎng)南北適宜的缽床，將缽澆透水，稍干后定植，將馴化好的穴盤苗取出，隨栽隨取，采取扎孔定植，深0.5 cm，必須將根系順于基質(zhì)并封嚴(yán)根跡，澆透水，控制溫度13～25℃，空氣相對(duì)濕度≤60%，全光照管理。一般4～6 d澆1次水。每7～10 d澆EC值1.5～1.8全元素營(yíng)養(yǎng)液。7 d后調(diào)查成活率為99%以上。

3 小結(jié)

最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+BA1.0 mg/L+GA30.5 mg/L+IBA0.1 mg/L；最佳增殖培養(yǎng)基MS+BA0.5 mg/L+GA30.5mg/L+IBA 0.1mg/L；最佳的生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.3 mg/L。瓶外生根海藻素最佳濃度500 mg/L，平均成活率98.2%，生根率94.3%，根數(shù)51.3條。馴化基質(zhì)河沙∶草炭土=1∶1最好。

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