苗培福 張瑞霞

(2.內(nèi)蒙古烏海市蒙中醫(yī)院，內(nèi)蒙古 烏海016000)

安全性、有效性和質(zhì)量可靠性是藥品屬性的三個基本要素，蒙藥也不例外。蒙藥是我國的傳統(tǒng)用藥，攝入汞劑量稍大或長期少量攝入在體內(nèi)蓄積到一定程度均可引起中毒，損害腎臟、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)以及泌尿系統(tǒng)〔1〕。近年來，藥汞含量超標(biāo)問題已引起國內(nèi)外的關(guān)注，為實現(xiàn)蒙藥現(xiàn)代化，并且使蒙藥走向國際市場，就必須強化對蒙藥中可溶性汞含量的測定和分析〔2〕。

銀朱最早載于《本草綱目》，它是人工制成的赤色硫化汞(HgS)，尚含有微量鉛(Pb)、銅(Cu)、鈉(Na)、鐵(Fe)、鋁(Al)等雜質(zhì)。其味辛，性溫，有毒。具有:攻毒、殺蟲、燥濕、劫痰，等功效。銀朱為許多蒙藥成方所應(yīng)用，例如清肺十八味丸。

蒙藥使用的黑辰砂非天然產(chǎn)物，是按1:1比例硫磺炮制銀朱(汞)，在鐵鍋內(nèi)用煤爐加熱至200～300℃左右反復(fù)攪拌形成黑灰色為止，其主要成分是硫化汞，它是蒙藥復(fù)方制劑常用藥材，具有鎮(zhèn)驚、清熱、收斂、破癰等作用，在44%蒙藥水丸劑中配伍使用〔13〕。

銀朱、黑辰砂中的硫化汞是一種較為穩(wěn)定的汞鹽，溶度積為9.3×10～53，在水中幾乎不溶，是一種極難溶的化合物，與其它含汞化合物相比，毒性較低〔4－5〕。動物實驗表明，銀朱口服后，其中的汞可經(jīng)胃腸道吸收，且吸收量遠(yuǎn)大于按溶度積計算的理論值。有文獻報道，銀朱中的硫化汞是不被機體吸收的無活性成分(約占給藥量的98%)，而且有活/毒性成分為可溶性汞部分〔6〕。因此本實驗?zāi)M胃腸道實際情況，系統(tǒng)的比較人工胃液、人工腸液中胃蛋白酶、胰蛋白酶及硫化物對汞溶出的影響，用雙硫腙分光光度法測定銀朱、黑辰砂、納米銀朱及蒙藥成方清肺十八味丸在不同化學(xué)體系中可溶性汞的含量，初步研究可能被人體吸收的汞的含量，從而為建立銀朱及含銀朱蒙藥的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和臨床用藥的安全合理性提供依據(jù)〔7－8－9〕。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

RC806溶出試驗儀(天大天發(fā));WFJ7200型可見分光光度計(尤尼柯(上海)儀器有限公司);FA214電子天平(上海?？惦娮觾x器廠);DGG－9240B型智能鼓風(fēng)干燥箱(杭州卓馳儀器有限公司);H1850臺式高速離心機(湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司)。

1.2 試劑

胃蛋白酶，胰蛋白酶硫，雙硫腙，鹽酸羥胺，乙二胺四乙酸二鈉，氯仿，氨水，高錳酸鉀，鹽酸，硫酸，硝酸，氫氧化鈉，磷酸二氫鉀等均為分析純。

1.3 藥品

銀朱(湖南省湘潭市滴水化工廠);黑辰砂(內(nèi)蒙古呼和浩特市蒙藥研究所);納米銀朱(內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院無機化學(xué)專題室合成);清肺十八味丸(內(nèi)蒙古蒙藥股份有限公司);硝酸汞。

2 實驗方法

2.1 溶液的制備

2.1.1 0.65%(m/V)雙硫腙氯仿貯備液:稱取 0.65g雙硫腙溶于100mL三氯甲烷，貯于棕色瓶中，存于暗處。

2.1.2 0.026%(m/V)雙硫腙工作液:吸取2ml雙硫腙貯備液于分液漏斗中，加入2%氨水50mL，振搖萃取，棄去有機相，水相提取液過濾后即得。此液需在臨用時配制。

2.1.3 汞標(biāo)準(zhǔn)貯備液:稱取在硫酸銅干燥器中放置過夜的0.1646g硝酸汞，用去離子水溶解后，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，再用去離子水稀釋至標(biāo)線，搖勻。此溶液每毫升含0.9897mg汞。

2.1.4 汞標(biāo)準(zhǔn)使用溶液:吸取汞標(biāo)準(zhǔn)貯備液1.00mL，注入100mL容量瓶，用1%硝酸溶液稀釋至標(biāo)線，搖勻。此溶液每毫升含9.897μg汞。

2.1.5 人工胃液:用去離子水稀釋13mol·L－1HCl至pH=1.50，現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.1.6 胃蛋白酶液:稱取1.6g胃蛋白酶溶于10mL0.1mol·L－1HCl，配制成質(zhì)量濃度為 0.16g·mL－1胃蛋白酶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.1.7 人工腸液:稱取 KH2PO46.8g，加去離子水500mL溶解，用 0.1mol·L－1NaOH 水溶液調(diào)節(jié) pH 值至 6.8，現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.1.8 胰蛋白酶液:稱取0.180g胰蛋白酶溶于45mL人工腸液，配制成胰蛋白酶質(zhì)量濃度為0.004g·mL－1的胰蛋白酶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.1.9 含硫人工腸液:稱取每份樣品質(zhì)量三分之一的硫粉溶于已配制的人工腸液中，現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.1.1010 %(m/V)EDTA溶液:將10g分析純乙二胺四乙酸二鈉用去離子水溶解并稀釋至100ml。

2.1.11 6mol/L NaOH溶液:將24g分析純氫氧化鈉用去離子水溶解并稀釋至100mL。

2.1.12 5%(m/V)KMnO4溶液:將5g分析純高錳酸鉀用去離子水溶解并稀釋至100mL。

2.1.13 10%(m/V)鹽酸羥胺溶液:將10g分析純鹽酸羥胺用去離子水溶解并稀釋至100mL。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

于 8個 50ml容量瓶中，分別加入 1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00mL 的汞標(biāo)準(zhǔn)使用液，每個容量瓶中加入10mL10%(m/V)EDTA溶液，搖勻后加入 8ml 6mol/L NaOH溶液，搖勻后加入2mL 0.026%(m/V)雙硫腙工作液，用去離子水稀釋至標(biāo)線，搖勻，于551nm波長處測定吸光度。以試劑空白為參比，于551nm波長處測定吸光度。

表1 汞標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)

回歸方程:在0.2～1.6(?μ/ml)范圍內(nèi)線性關(guān)系為:A=0.2955c+0.0127，r=1.0442.

2.3 銀朱、黑辰砂、納米銀朱、清肺十八味丸、硝酸汞的溶出

準(zhǔn)確稱取銀朱、黑辰砂、納米銀朱、清肺十八味丸，硝酸汞一定量 (均做3個平行樣)，與不同溶出液500ml混合，將放于37℃，100r·min－1振搖，人工胃液、胃蛋白酶液中2h，人工腸液、胰蛋白酶液、含硫人工腸液中8h。再在室溫下，5000r·min－1離心10min，取上清液(除胃蛋白酶液組和胰蛋白酶液組)，待測;胃蛋白酶液組和胰蛋白酶液組則是先靜置至溶液分3層，將上清液和下層沉淀棄去，取中層含絮狀沉淀的溶出液，在室溫下，5000r·min－1離心10min，取上清液，待測。

為研究pH、蛋白質(zhì)以及硫化物的影響，溶出液分別為用鹽酸和磷酸鹽緩沖液配制的不同pH的溶液，含不同蛋白質(zhì)胃蛋白酶(pepsin)，胰蛋白酶(trypsin)的溶液及一定濃度的含硫人工腸液。

2.4 可溶性汞含量的測定

分別吸取25.00ml溶出液(除硝酸汞組)于50ml容量瓶中，依次加入10%(m/V)EDTA 10.00ml，6mol/L NaOH 8.00mL，0.026%(m/V)雙硫腙工作液 2.00mL，用去離子水稀釋至標(biāo)線。以相應(yīng)的試劑空白為參比，在551nm波長下測定吸光度。結(jié)果見表2、表3。

表2 胃液、胃蛋白酶液中藥品溶出數(shù)據(jù)

表3 腸液、胰蛋白酶液、含硫腸液中藥品溶出數(shù)據(jù)

3 討論

3.1 pH對汞溶出的影響

試驗結(jié)果(見表4)表明，pH對銀朱、黑辰砂、納米銀朱和清肺十八味丸中汞的溶出量有較大的影響，隨著 pH的降低，汞的溶出量明顯增加。人工胃液中(pH=1.5)汞的溶出量明顯大于人工腸液(pH=6.8)。這可能是由于銀朱礦物中含有了其他形式的汞化合物雜質(zhì)而造成的。

表4 人工胃液和人工腸液汞溶出量比較

3.2 胃蛋白酶和胰蛋白酶對汞溶出的影響

在消化道存在胃蛋白酶和胰蛋白酶，這些物質(zhì)特別是含巰基的物質(zhì)對于汞均有結(jié)合能力。因此本試驗研究了胃蛋白酶和胰蛋白酶對銀朱、黑辰砂、納米銀朱和清肺十八味丸中汞的溶出量的影響，試驗結(jié)果(見表5)表明，胃蛋白酶和胰蛋白酶對汞溶出量有一定的促進作用，但是不夠明顯。

3.3 硫?qū)艹龅挠绊?/h3>

由于腸內(nèi)經(jīng)細(xì)菌代謝后會產(chǎn)生硫化物，而HgS具有與硫形成多硫化物的性質(zhì)，所以本試驗研究了人工腸液中加入硫粉對汞溶出的影響。試驗結(jié)果(見表6)表明，人工腸液中加入硫粉對銀朱、黑辰砂、納米銀朱和清肺十八味丸中汞的溶出有較強的助溶作用。

表5 人工胃液和人工腸液加酶前后汞溶出量比較

表6 人工腸液和加硫人工腸液汞溶出量比較

在人體腸道內(nèi)存在形成汞多硫化物的條件，包括弱堿性環(huán)境和腸內(nèi)細(xì)菌分解所產(chǎn)生的大量 H2S(主要以 HS－的形式存在)。因此可以推測，多硫化汞配合物可能是銀朱在體內(nèi)的一種重要形式。

3.4 溶出液中微粒的存在和粒度分布對汞溶出的影響

為觀察HgS溶出的形式是可溶性物質(zhì)還是懸浮微粒，分別對銀朱和納米銀朱在人工胃液、胃蛋白酶液、人工腸液、胰蛋白酶液和含硫人工腸液進行溶出試驗，試驗結(jié)果(見表7)表明，含硫人工腸液對納米銀朱中汞溶出的影響顯著，汞的溶出量約為銀朱中的15倍。

表7 銀朱和納米銀朱汞溶出量比較

4 結(jié)論

通過比較胃腸道中存在的各種化學(xué)因素對銀朱、黑辰砂、納米銀朱、清肺十八味丸中汞溶出的影響，得結(jié)果為pH對汞溶出量有較大的影響，蛋白質(zhì)的促溶作用有限，硫?qū)艹隽康挠绊戯@著高于其他，納米銀朱對含硫人工腸液中汞溶出的影響顯著。提示銀朱在腸道中的形式可能為汞的各種含硫配合物;至于汞的含硫配合物能否在腸道中吸收并發(fā)揮藥理作用還有待進一步去證實。

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