趙建峰

（北京萬(wàn)生藥業(yè)有限責(zé)任公司，北京 101113)

奧美沙坦酯氫氯噻嗪片是治療高血壓新藥，2010年在我國(guó)上市，臨床用于治療高血壓、充血性心力衰竭。奧美沙坦酯與氫氯噻嗪有互補(bǔ)的作用機(jī)制，兩者合用既能協(xié)同降壓，又可以減少氫氯噻嗪的應(yīng)用劑量，具有快速起效、強(qiáng)效降壓和持久降壓的特點(diǎn)，適于國(guó)內(nèi)眾多高血壓患者使用。由于該產(chǎn)品上市時(shí)間短，目前文獻(xiàn)少見(jiàn)對(duì)該產(chǎn)品有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法的報(bào)道，本研究建立了該產(chǎn)品含量和關(guān)物質(zhì)的HPLC測(cè)定方法，簡(jiǎn)單快速，結(jié)果準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥

安捷倫1200高效液相色譜儀及其色譜工作站（安捷倫公司）；奧美沙坦酯對(duì)照品（原中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100864-200601）；氫氯噻嗪對(duì)照品（原中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100309-200702）；奧美沙坦酸對(duì)照品（自制）；氯噻嗪對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)101129-201101）；奧美沙坦酯氫氯噻嗪片（自制，規(guī)格：奧美沙坦酯 20 mg，氫氯噻嗪 12.5 mg）；乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 含量測(cè)定研究[1]

2.1 色譜條件[2]

C18色譜柱 (Kromasil，5μm，4.6 mm×250 mm)；流動(dòng)相：A液：0.02 mol/L磷酸二氫鈉溶液（用磷酸調(diào)節(jié) pH 至 3.0），B 液：甲醇 - 乙腈（100∶900）；梯度洗脫，0～17 min，流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)從85%降至20%；17～20 min流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)從20%增加至85%；20～25 min流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)保持85%不變。檢測(cè)波長(zhǎng)為272 nm；柱溫為30℃。理論塔板數(shù)按奧美沙坦酯峰和氫氯噻嗪峰計(jì)應(yīng)均不低于3 000。奧美沙坦酯峰和奧美沙坦酸峰的分離度應(yīng)符合要求，氫氯噻嗪峰和氯噻嗪峰的分離度應(yīng)符合要求。

2.2 線性關(guān)系考察

分別精密取奧美沙坦酯對(duì)照品20.26 mg，氫氯噻嗪對(duì)照品12.65 mg，精密稱(chēng)定，置100 mL量瓶中，加稀釋液[0.02 mol/L磷酸二氫鈉溶液（調(diào)節(jié) pH 至 3.0）-乙腈（50∶50）]超聲溶解后并稀釋至刻度，搖勻。在上述色譜條件下檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 奧美沙坦酯氫氯噻嗪片含量HPLC圖A對(duì)照品 B供試品 C陰性對(duì)照

精 密 量 取 1、5、10、15、20 mL 上 述 溶 液 置100 mL量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，搖勻。精密量取各20μL注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。根據(jù)奧美沙坦酯濃度C與峰面積A繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求得線性回歸方程：

奧美沙坦酯濃度在0.002 026～0.040 52 mg/mL之間呈良好的線性關(guān)系；根據(jù)氫氯噻嗪濃度C與峰面積A繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求得線性回歸方程：

氫氯噻嗪濃度在0.001 265～0.025 30 mg/mL之間呈良好的線性關(guān)系。

2.3 回收率試驗(yàn)

按處方量稱(chēng)取輔料，另取奧美沙坦酯對(duì)照品20 mg和氫氯噻嗪對(duì)照品12.5 mg各3份，分別置100 mL量瓶中，加稀釋液超聲溶解并稀釋至刻度搖勻，濾過(guò)，精密量取5 mL置50 mL量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度搖勻，得中濃度供試品溶液（100%）3份，同法制得低濃度供試品溶液（80%）和高濃度供試品溶液（120%）各3份。按色譜條件進(jìn)樣，并按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算回收率，結(jié)果奧美沙坦酯平均回收率為99.8%，RSD為0.59%（n=9）；氫氯噻嗪平均回收率為99.5%，RSD為0.68%（n=9）。

2.4 精密度試驗(yàn)

取奧美沙坦酯氫氯噻嗪片1批（自制），于同1日內(nèi)及不同日內(nèi)分別按上述方法測(cè)定含量5次，日內(nèi)奧美沙坦酯的平均含量為99.8%，RSD為0.35%，氫氯噻嗪的平均含量為99.6%，RSD為0.30%；日間奧美沙坦酯的平均含量為99.6%，RSD為0.46%，氫氯噻嗪的平均含量為99.5%，RSD為0.58%。

2.5 溶液的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性試驗(yàn)

取含量測(cè)定項(xiàng)下的溶液，分別在 0、1、2、4 h進(jìn)樣，測(cè)得奧美沙坦酯峰面積的RSD值為0.55%，氫氯噻嗪峰面積的RSD值為0.52%。表明本品4 h內(nèi)穩(wěn)定，進(jìn)樣重現(xiàn)性良好。

3有關(guān)物質(zhì)研究[3]

3.1 色譜條件

檢測(cè)波長(zhǎng)為225 nm；其他色譜條件同含量測(cè)定項(xiàng)。

3.2 實(shí)驗(yàn)方法

取本品20片，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量（約含奧美沙坦酯20 mg），置100 mL量瓶中，用稀釋液超聲溶解并稀釋至刻度，振搖均勻，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，續(xù)濾液作為供試品溶液。取供試品溶液用稀釋液稀釋100倍作為對(duì)照溶液；量取對(duì)照溶液20μL注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使氫氯噻嗪峰高約為滿(mǎn)量程刻度的20%；再精密量取供試品溶液和對(duì)照溶液各20μL，分別注入液相色譜儀。供試品溶液如顯雜質(zhì)峰，扣除空白溶劑峰，在氫氯噻嗪主峰相對(duì)保留時(shí)間0.86處的雜質(zhì)不得大于對(duì)照溶液中氫氯噻嗪主峰面積（1.0%），在奧美沙坦酯主峰相對(duì)保留時(shí)間0.92處的雜質(zhì)不得大于對(duì)照溶液中奧美沙坦酯主峰面積（1.0%），其他單個(gè)雜質(zhì)不得大于對(duì)照溶液中奧美沙坦酯和氫氯噻嗪兩主峰面積和的50%（0.5%），總雜質(zhì)不得大于對(duì)照溶液中奧美沙坦酯和氫氯噻嗪兩主峰面積和的1.0倍（1.0%）。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖2。

3.3 溶液穩(wěn)定性考察

按要求配制供試液和對(duì)照液，于 0、1、2、3 h分別注入液相色譜儀，證明本品溶液放置2 h，相對(duì)奧美沙坦酯0.92處的雜質(zhì)峰明顯增加。

圖2 奧美沙坦酯氫氯噻嗪片有關(guān)物質(zhì)的HPLC圖A供試品 B陰性對(duì)照

3.4 專(zhuān)屬性考察

高溫破壞試驗(yàn)（120℃放置 2 h），光照破壞試驗(yàn)（4 500 lx放置10 d），強(qiáng)酸破壞試驗(yàn)（加1 mol/L HCl溶液 5 mL，于 60℃水浴放置 0.5 h），強(qiáng)堿破壞試驗(yàn)（加 1 mol/L NaOH溶液 5 mL，于 60℃水浴放置0.5 h）和氧化破壞試驗(yàn)（加6%雙氧水溶液 5 mL，于60℃水浴放置 1 h），上述條件下均有新雜質(zhì)產(chǎn)生，主成份峰有不同程度的降解，總雜質(zhì)明顯增大，主峰與雜質(zhì)峰能夠完全分離。

4 討論

有關(guān)物質(zhì)檢查溶液穩(wěn)定性考察表明，溶液放置2 h，雜質(zhì)奧美沙坦酯酸峰明顯增大，故本品應(yīng)臨用新配。

經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)選定色譜條件，該條件下，氫氯噻嗪主峰相對(duì)保留時(shí)間0.86處的雜質(zhì)為氯噻嗪，二者分離度為3.0；奧美沙坦酯主峰相對(duì)保留時(shí)間0.92處的雜質(zhì)為奧美沙坦酸，二者分離度為5.5，主峰和雜質(zhì)峰能夠很好的分離。測(cè)定方法研究結(jié)果表明，該方法精密度高，重現(xiàn)性好，可用于奧美沙坦酯氫氯噻嗪片的含量和有關(guān)物質(zhì)測(cè)定。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄194.

[2]陳敏，周斌，魏大鵬.HPLC法測(cè)定復(fù)方奧美沙坦氫氯噻嗪片的含量[J].中國(guó)新藥雜志，2006，15（23）：2050-2052.

[3]張玉琥.仿制藥有關(guān)物質(zhì)研究的特點(diǎn)及研究思路[J].中國(guó)執(zhí)業(yè)藥師，2009，6 （6）：31-34.