馬麗萍 章 琦 章定生

（1 甘肅中醫(yī)學(xué)院，蘭州 730020；2 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，蘭州 730070；3 天水西聯(lián)蜂業(yè)有限公司，天水 741000）

油菜花粉內(nèi)酯是應(yīng)用亞臨界-超臨界聯(lián)合萃取工藝萃取油菜花粉所獲取的以脂肪酸為主的化合物的總稱。油菜花粉及油菜花粉內(nèi)酯均具有降血脂、促進(jìn)血液微循環(huán)、排毒養(yǎng)顏的功效，理論上分析，應(yīng)該與其含有的類黃酮有關(guān)。為評(píng)價(jià)萃取工藝效果、探討其作用機(jī)理，我們對(duì)油菜花粉內(nèi)酯與油菜花粉中總黃酮的含量進(jìn)行了對(duì)比分析。

1 材料與方法

1.1 方法：分光光度法

1.2 材料

1.2.1 實(shí)驗(yàn)用油菜花粉樣品由天水西聯(lián)蜂業(yè)有限公司提供，產(chǎn)地為甘肅張掖；實(shí)驗(yàn)用油菜花粉內(nèi)酯也由該公司提供。

1.2.2 乙醇（95%）（AR）、無(wú)水乙醇（AR）：開封市芳晶化學(xué)試劑有限公司。

1.2.3 硝酸鋁（AR）：天津光復(fù)精細(xì)化工研究所；硝酸鋁溶液（100 g/100 l）：稱取 Al(NO3)3.9H2O 17.60 g,加水溶解，定容至100 ml，均質(zhì)。

1.2.4 乙酸鉀（AR）：天津光復(fù)精細(xì)化工研究所；乙酸鉀溶液(9.8g/100 ml)：稱取乙酸鉀9.814 g,加水溶解，定容至100 ml,均質(zhì)。

1.2.5 蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品（色譜純）：中國(guó)藥品生物制品檢定所。

1.2.5.1 蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液（1mg/ml）:精密稱取經(jīng)120℃減壓真空干燥至恒重的蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品50mg,置于50ml的容量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻。

1.2.5.2 蕓香苷對(duì)照品使用溶液（0.2mg/ml）：精密吸取蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液10ml置于50ml的容量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻。

1.2.6 實(shí)驗(yàn)用水為重蒸蒸餾水。

2 儀器設(shè)備

752紫外可見分光光度計(jì)（上海佑科儀器儀表有限公司）；分析天平（上海精密儀器有限公司）；恒溫水浴鍋（金壇市華峰儀器有限公司）；低溫冰箱（海爾電器有限公司）。

3 分析步驟

3.1 試樣制備

3.1.1 稱取花粉樣品約10 g，在研缽中研細(xì)。

3.1.2 精密稱取花粉內(nèi)酯樣品和花粉樣品各2g，精確到1mg，分別置燒杯中，加入95%的乙醇約30ml,置于65℃水浴中45min,攪拌，取出后冷卻至室溫，使用快速濾紙過(guò)濾。燒杯、漏斗、濾渣、濾紙用95%的乙醇洗滌。最后用95%的乙醇稀釋至50ml,搖勻，靜置1h,待測(cè)。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及回歸方程的建立

3.2.1 精密吸取蕓香苷對(duì)照品使用溶液 1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml,分別置于 50ml容量瓶中；加 95%的乙醇至總體積15ml,依次加入硝酸鋁溶液1ml、乙酸鉀溶液1ml，搖勻；加水至刻度，搖勻，靜置1h。

3.2.2 以1cm比色杯于415nm處，以30%乙醇溶液為空白，測(cè)定其吸光度。

3.2.3 以50ml蕓香苷質(zhì)量（mg）為橫坐標(biāo)，以吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并建立直線回歸方程如式（1），并由標(biāo)準(zhǔn)曲線可以看出在0.4000～24.000μg的范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系（n=6）r=0.9998。

2.3.4 空白實(shí)驗(yàn) 精密吸取待測(cè)溶液1.0ml,置于50ml容量瓶中,加95%乙醇至14ml,用水稀釋至刻度，搖勻。

3.3 測(cè)定

3.3.1 精密吸取待測(cè)溶液1.0ml,置于50ml容量瓶中,加95%的乙醇至15ml，依次加入硝酸鋁溶液1ml、乙酸鉀溶液1ml，搖勻；加水至刻度，搖勻，靜置1h。

3.3.2 以空白為參比，用1cm比色杯于415nm處，測(cè)定試樣溶液的吸光度。

3.3.3 查標(biāo)準(zhǔn)曲線或通過(guò)式（1）計(jì)算溶液中黃酮類化合物的濃度。

3.4 計(jì)算

試樣中的黃酮類化合物的含量可用式（2）計(jì)算：

式中：X為試樣中黃酮類化合物的含量（g/100g）；M為從回歸方程（1）或工作曲線中求得的黃酮類化合物的濃度（mg）；W:樣品質(zhì)量（g）；1000：由 mg化為 g。

4 結(jié)果 見表1

表1 油菜花粉內(nèi)酯與油菜花粉中總黃酮檢測(cè)結(jié)果

5 實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性與精確性

為驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，我們用同一樣品重復(fù)做了6次實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表2：

表2 油菜花粉內(nèi)酯與油菜花粉中總黃酮檢測(cè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表2可以看出：6次重復(fù)實(shí)驗(yàn)平行實(shí)驗(yàn)誤差RSD≤3.0%。為此，認(rèn)為方法可行，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

6 問題與討論

6.1 分光光度法的檢測(cè)原理是：溶于乙醇中的黃酮類化合物在弱堿性條件下，與顯色劑三價(jià)鋁離子生成有色物質(zhì)，可在415nm波長(zhǎng)附近產(chǎn)生最大吸收。在一定濃度范圍內(nèi)，其吸光度與黃酮類化合物成正比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，可定量測(cè)定黃酮類化合物的含量。

6.2 應(yīng)用亞臨界-超臨界聯(lián)合萃取工藝萃取油菜花粉所獲取的花粉內(nèi)酯其總黃酮含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)了油菜花粉的含量，為油菜花粉的2.96倍。

6.3 黃酮類化合物是蜂膠主要的功能成分，蜂膠制品具有的降血脂、輔助治療高脂血癥的功用與其含有一定量的生物類黃酮密切相關(guān)。表3列出了市售幾種蜂膠制品與花粉內(nèi)酯的總黃酮含量[1]。由表3可以看出，油菜花粉內(nèi)酯中的總黃酮含量雖低于蜂膠片和蜂膠膠囊，但高于蜂膠液中的含量，故可推斷油菜花粉內(nèi)酯與蜂膠制品具有等同的降血脂的功效。與油菜花粉相比，油菜花粉內(nèi)酯由于含有更高的生物類黃酮，因而，理論上講，油菜花粉內(nèi)酯降血脂的功效要好于油菜花粉。

表3 市售幾種蜂膠制品與花粉內(nèi)酯的總黃酮含量（%）

6.4 對(duì)于油菜花粉和油菜花粉內(nèi)酯中所含類黃酮的種類和其具體的含量，尚待進(jìn)一步探討。

[1]章定生等.分光光度法與RP-HPLC法測(cè)定蜂膠及其制品中總黃酮含量的分析與比較[J]中國(guó)蜂業(yè)，2009，（10）：38～39