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        和胃安神方對失眠大鼠血漿及下丘腦食欲素 A的影響

        2012-05-17 08:36:13黎發(fā)根李紹旦楊明會周建平曹科劉毅
        環(huán)球中醫(yī)藥 2012年11期
        關(guān)鍵詞:楊明下丘腦安神

        黎發(fā)根 李紹旦 楊明會 周建平 曹科 劉毅

        隨著生活、工作節(jié)奏的加快以及各種社會壓力的增大,失眠發(fā)生率逐漸上升,已經(jīng)成為現(xiàn)代社會的流行病,嚴重影響人們的生活和工作。失眠發(fā)生的機制目前尚不完全清楚,有研究認為orexin A是參與機體睡眠-覺醒調(diào)節(jié)的重要物質(zhì)之一[1]。本研究應(yīng)用失眠大鼠模型,通過觀察其血漿及下丘腦食欲素A(orexin A)的變化,來探討和胃安神方治療失眠癥的可能療效機制。

        1 材料與方法

        1.1 實驗動物及分組

        健康清潔級wistar雄性大鼠30只,體重(200±20)g,由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供(醫(yī)學動物合格證SCXK京2012-0001)。將大鼠按隨機數(shù)字表法分為3組,即正常對照組(正常組)、失眠模型組(模型組)及和胃安神方組(中藥組),每組10只。

        1.2 主要試劑與藥物

        對氯苯丙氨酸(PCPA)購自美國Sigma公司(C6506);orexin A放射免疫試劑盒購自美國phoenix公司。中藥和胃安神方由半夏10 g、薏苡仁15 g、陳皮15 g、茯苓15 g、石菖蒲10 g、合歡皮10 g、炒棗仁15 g、夜交藤15 g組成,所有飲片均經(jīng)解放軍總醫(yī)院中藥房提供并鑒定。將上述諸藥按傳統(tǒng)煎藥法獲取湯劑,以恒溫水浴鍋濃縮成分別含生藥1.75 g/ml的藥液,玻璃瓶密閉盛裝,4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

        1.3 動物造模及給藥

        采用目前公認的PCPA失眠模型。除正常對照組外,其余各組大鼠參照文獻[2]并結(jié)合預實驗結(jié)果,按300 mg/kg體質(zhì)量以10 ml/kg體積腹腔注射PCPA,于每天上午8:00~8:30進行,每天1次,連續(xù)2天。于第1次腹腔注射28~30小時后,動物出現(xiàn)晝夜節(jié)律消失,白天也活動不停,整體觀察與正常對照組有明顯不同,表明模型復制成功[3]。于第3天開始每天上午8:00灌胃給藥,中藥組大鼠給予10 ml/kg體積1.75 g/ml中藥水煎液(17.5 g/kg生藥);正常組和模型組給予同體積的生理鹽水,每天1次,連續(xù)灌胃6天。

        1.4 實驗指標檢測

        參考文獻[4]方法,于末次給藥后24小時,用10%水合氯醛腹腔注射麻醉各組大鼠,心臟采血3 ml,加入抑肽酶40 μl,3500 r/min低溫離心5分鐘,分離血漿,于-20 ℃保存待測。采血后立即將大鼠脫頸處死,斷頭取腦,分離下丘腦,充分勻漿后4000 r/min低溫離心10分鐘,取上清液于-20 ℃保存待測。用放射免疫法檢測orexin A的含量,具體操作嚴格參照orexin A放射免疫試劑盒說明書進行。

        1.5 統(tǒng)計學處理

        2 結(jié)果

        模型組大鼠血漿及下丘腦orexin A含量較正常組顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01);中藥組大鼠血漿及下丘腦orexin A含量明顯低于模型組,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。中藥組與正常組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),見表1。

        表1 各組大鼠血漿及下丘腦組織orexin A含量比較

        注:與正常組比較,aP<0.01;與模型組比較,bP<0.01.

        3 討論

        失眠是一種常見的睡眠障礙性疾病,其發(fā)生率高,長期的失眠會嚴重影響人們的身心健康[5-6]。筆者認為當前導致失眠最主要的直接因素就是現(xiàn)代生活方式改變和飲食結(jié)構(gòu)習慣變化,這些變化導致人體脾胃、腸道的消化功能紊亂,意即眾多原發(fā)性失眠者多存在“胃不和”。針對原發(fā)性失眠者的“胃不和”,筆者采用和胃安神方以治之。前期的臨床研究證實其對失眠癥的治療效果良好[6-7],但其療效機制尚不明確。

        Orexin(又名hypocretin)是一種由下丘腦外側(cè)區(qū)合成和分泌的具有促進攝食作用的小分子神經(jīng)多肽[8-9],食欲素A和食欲素B是它的兩個單體。目前研究認為orexin A是參與機體睡眠-覺醒調(diào)節(jié)的重要物質(zhì)[1]。Piper等[10]在大鼠的腦室內(nèi)注射食欲素A,通過記錄大鼠的腦電圖和肌電圖觀察大鼠的睡眠和覺醒周期變化,發(fā)現(xiàn)大鼠的覺醒時間與劑量相關(guān),證明了食欲素的睡眠調(diào)節(jié)作用。Terao等[11]發(fā)現(xiàn)大鼠隨著睡眠剝奪時間的延續(xù),食欲素原mRNA的表達越來越高,認為覺醒狀態(tài)可能需要高水平的食欲素維持。更有新近研究表明[12],通過透光基因技術(shù)反復刺激自由活動小鼠orexin神經(jīng)元,可以增加快速眼動或非快速眼動睡眠到覺醒的轉(zhuǎn)換次數(shù),這說明食欲素可能在睡眠-覺醒的調(diào)節(jié)中起到一種類似“開關(guān)”的作用。

        本研究采用廣泛應(yīng)用的對氯苯丙氨酸(PCPA)腹腔注射誘導的失眠大鼠模型,其結(jié)果顯示,模型組大鼠血漿及下丘腦中orexin A的含量顯著增加,中藥組大鼠經(jīng)和胃安神方治療后,其血漿及下丘腦中orexin A的含量明顯低于模型組(P<0.01),且大鼠睡眠節(jié)律得以恢復。結(jié)果提示,對orexin A的調(diào)節(jié)作用很可能是和胃安神方治療失眠的內(nèi)在機制之一。

        另有研究發(fā)現(xiàn)[13-14],orexin除了主要分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的下丘腦外,還廣泛分布于包括胃腸系統(tǒng)的外周組織。orexin在促進食欲的同時,還能通過中樞和外周途徑調(diào)節(jié)胃腸運動和消化液的分泌。本實驗對血漿食欲素A的測定也證實了外周食欲素系統(tǒng)的存在。這說明食欲素同時存在于胃腸道和神經(jīng)中樞,具有調(diào)節(jié)胃腸功能以及作為神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)節(jié)睡眠的雙重作用,這與和胃安神方具有和胃與安神的功效有著相通之處,由此推測食欲素可能是“胃不和”與“臥不安”兩者之間的生物物質(zhì)基礎(chǔ)之一,至于食欲素是如何發(fā)揮胃腸功能和睡眠之間的協(xié)調(diào)作用,還須進一步研究和探索。

        參考文獻

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