摘要: 【目的】為了探明杜梨類鈣調(diào)磷酸酶B亞基蛋白(Calcineurin B-like protein,CBL)基因的序列特征和表達特點,【方法】以杜梨幼苗為試材,運用同源克隆和半定量RT-PCR對PbCBL10基因進行克隆和表達分析?!窘Y(jié)果】結(jié)果表明,PbCBL10基因編碼區(qū)cDNA長度為801 bp,編碼的多肽由266個氨基酸組成。該多肽預測的等電點為4.56,估計的相對分子質(zhì)量為30.45 ku。其對應基因組DNA序列長1 983 bp,包括9個外顯子和8個內(nèi)含子。通過PSORT進行亞細胞定位分析發(fā)現(xiàn)PbCBL10蛋白位于質(zhì)膜上的幾率最大。PbCBL10基因編碼的多肽具有4個鈣離子結(jié)合域EF手形結(jié)構(gòu)和1個鈣調(diào)磷酸酶A亞基結(jié)合位點。PbCBL10與番茄SlCBL10(NP_001239045)和擬南芥AtCBL10(NP_195026)蛋白間的同源性較高,分別為82%和77%,并與AtCBL10親緣關系最近。PbCBL10基因在杜梨幼苗根、莖和葉片中均為誘導型表達,50~200 mmol·L-1 CaCl2、20 μmol·L-1 ABA、100 mmol·L-1 NaCl、10% (w/v) PEG6000或180 mmol·L-1 甘露醇處理后其表達量明顯上調(diào)?!窘Y(jié)論】PbCBL10基因具備植物CBL基因家族的固有特征,能夠響應胞內(nèi)鈣濃度變化,對ABA、鹽堿、干旱和滲透脅迫均存在轉(zhuǎn)錄響應。
關鍵詞: 杜梨; 類鈣調(diào)磷酸酶B亞基蛋白; 基因克??; 表達特性