廖鵬飛 趙君幸 雷發(fā)揚(yáng) 余潮 李紹波

摘要：以川香２９Ｂ、中９Ｂ、金２３Ｂ和Ⅱ－３２Ｂ ４種秈稻的成熟胚為外植體，研究ＭＳ、Ｎ６、ＮＢ和ＮＭＢ ４種基本培養(yǎng)基，２，４－Ｄ與ＫＴ或６－ＢＡ聯(lián)合使用對(duì)秈稻愈傷組織誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明，４種秈稻在ＮＭＢ基本培養(yǎng)基中愈傷組織的誘導(dǎo)率最高，平均誘導(dǎo)率為７７.00％～９６.00％，其中在ＮＭＢ中的誘導(dǎo)效果最好，在４種不同基本培養(yǎng)基中愈傷組織總平均誘導(dǎo)率的高低順序依次為川香２９Ｂ、中９Ｂ、Ⅱ－３２Ｂ、金２３Ｂ。當(dāng)３．０ ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ與不同濃度的ＫＴ或６－ＢＡ聯(lián)合使用時(shí)，ＫＴ濃度為０．１ ｍｇ／Ｌ時(shí)，川香２９Ｂ和中９Ｂ愈傷組織誘導(dǎo)率高；對(duì)于Ⅱ－３２Ｂ，ＫＴ濃度為０．６ ｍｇ／Ｌ愈傷組織誘導(dǎo)率較高；６－ＢＡ濃度為０．４ ｍｇ／Ｌ時(shí)，川香２９Ｂ愈傷組織誘導(dǎo)率最高；對(duì)于中９Ｂ和Ⅱ－３２Ｂ，添加０．１ ｍｇ／Ｌ的６－ＢＡ最有利于愈傷組織的誘導(dǎo)；而對(duì)于金２３Ｂ，無論是添加ＫＴ或６－ＢＡ都會(huì)抑制愈傷組織的誘導(dǎo)。

關(guān)鍵詞：秈稻；愈傷組織誘導(dǎo)；培養(yǎng)基；激素

中圖分類號(hào)：Ｓ５１１．２＋１；Ｑ８１３．１＋２文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ 文章編號(hào)：0439－８114（２０12）18－4121-04

Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｂａｓａｌ Ｍｅｄｉum ａｎｄ Ｐｈｙｔｏｋｉｎｉｎ ｏｎ Ｃａｌｌｕｓ Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Iｎｄｉｃａ Ｒｉｃｅ Ｍａｔｕｒｅ Ｅｍｂｒｙｏｓ

ＬＩＡＯ Ｐｅｎｇ－ｆｅｉ１，２，ＺＨＡＯ Ｊｕｎ－ｘｉｎｇ１，ＬＥＩ Ｆａ－ｙａｎｇ１，ＹＵ Ｃｈａｏ１，２，ＬＩ Ｓｈａｏ－ｂｏ２

(1. Teaching Center for Experimental Biology / School of Life Science and Food Engineering, Nanchang University, Nanchang 330031, China； 2. Key Laboratory of Molecular Biology and Gene Engineering in Jiangxi Province, Nanchang University, Nanchang 330031, China)

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｆｏｕｒ ｂａｓａｌ ｍｅｄｉum（ＭＳ，Ｎ６，ＮＢ ａｎｄ ＮＭＢ） ａｎｄ ｔｗｏ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｐｈｙｔｏｋｉｎｉｎ（ＫＴ，６－ＢＡ） ｏｎ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｍａｔｕｒｅ ｅｍｂｒｙｏｓ ｏｆ ｆｏｕｒ ｉｎｄｉｃａ ｒｉｃｅ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ（Ｃｈｕａｎｘｉａｎｇ２９Ｂ， Ｚｈｏｎｇ９Ｂ， Ｊｉｎ２３Ｂ， Ⅱ－３２Ｂ） ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｂａｓａｌ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ ＮＭＢ ａｓ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ７７.00％ ｔｏ ９６.00％． Ｔｈｅ ｏｒｄｅｒ ｏｆ ａｖｅｒａｇｅ ｒａｔｅ ｆｒｏｍ ｈｉｇｈ ｔｏ ｌｏｗ ｗａｓ Ｃｈｕａｎｘｉａｎｇ２９Ｂ， Ｚｈｏｎｇ９Ｂ， Ⅱ－３２Ｂ， Ｊｉｎ２３Ｂ． Ｗｈｅｎ ３ ｍｇ／Ｌ ２， ４－Ｄ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｗｉｔｈ ０．１ ｍｇ／Ｌ ＫＴ ｏｒ ０．４ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ， ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ Ｃｈｕａｎｇｘｉａｎｇ２９Ｂ ｗａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ． Ｆｏｒ Ｚｈｏｎｇ９Ｂ， ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ３ ｍｇ／Ｌ ２， ４－Ｄ ｗｉｔｈ ０．１ ｍｇ／Ｌ ＫＴ ｏｒ ０．１ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ ｗａｓ ｏｐｔｉｍｕｍ． ＦｏｒⅡ－３２Ｂ， ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ３ ｍｇ／Ｌ ２， ４－Ｄ ｗｉｔｈ ０．６ ｍｇ／Ｌ ＫＴ ｏｒ ０．１ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ ｗａｓ ｏｐｔｉｍｕｍ． Ｈｏｗｅｖｅｒ， ｔｈｅ ｃａｌｌｕｓ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｊｉｎ２３Ｂ ｗｏｕｌｄ be ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｂｙ ａｄｄｉｎｇ ｅｉｔｈｅｒ ６－ＢＡ ｏｒ ＫＴ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｉｎｄｉｃａ ｒｉｃｅ； ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ； ｂａｓａｌ ｍｅｄｉum； ｐｈｙｔｏｋｉｎｉｎ

農(nóng)桿菌介導(dǎo)的高效遺傳轉(zhuǎn)化體系已經(jīng)在水稻外源基因轉(zhuǎn)化中取得了很大的成功［１－３］，利用該技術(shù)不僅可以把感興趣的基因?qū)氲剿净蚪M中，進(jìn)而培育優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、多抗的水稻新品種［４，５］，而且也為水稻基因功能研究提供重要手段，如通過Ｔ－ＤＮＡ插入構(gòu)建突變體庫(kù)、基因打靶等［６，７］。水稻胚性愈傷組織是農(nóng)桿菌介導(dǎo)外源基因進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化的良好受體，因此水稻愈傷組織的形成和狀態(tài)是直接影響著水稻遺傳轉(zhuǎn)化效率的重要因素。

秈稻和粳稻是栽培稻的兩個(gè)主要亞種，粳稻的組織培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)成熟，愈傷組織誘導(dǎo)容易，誘導(dǎo)出來的愈傷組織是胚性愈傷組織，生長(zhǎng)速度快，再生率高，并且許多粳稻品種已建立了基于愈傷組織的重復(fù)性好、轉(zhuǎn)化頻率高的遺傳轉(zhuǎn)化體系［８，９］。而栽培面積占全球水稻８０％的秈稻卻具有不良的組織培養(yǎng)特性，其誘導(dǎo)率和再生率都比粳稻低得多，后續(xù)繼代過程中容易褐化，且不同品種秈稻之間組織培養(yǎng)特性差別很大［１０，１１］，使得秈稻遺傳轉(zhuǎn)化效率低，甚至難以進(jìn)行轉(zhuǎn)化，這樣極大地阻礙了秈稻遺傳轉(zhuǎn)化的發(fā)展。

水稻成熟胚由于具有取材容易、不受季節(jié)限制、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)是獲得愈傷組織較好的外植體。秈稻成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)率和質(zhì)量除與基因型及外植體有關(guān)外，外源激素濃度、培養(yǎng)基成分也是重要的影響因素。一些研究表明在秈稻愈傷組織誘導(dǎo)中適當(dāng)改變培養(yǎng)基成分、調(diào)節(jié)外源激素濃度及其配比等可以在一定程度上提高愈傷組織誘導(dǎo)率和質(zhì)量［１２－１４］。因此，研究４種不同基本培養(yǎng)基、不同濃度的ＫＴ、６－ＢＡ對(duì)川香２９Ｂ、中９Ｂ、金２３Ｂ、Ⅱ－３２Ｂ ４種常用的秈型雜交水稻保持系成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)的影響，以期提高秈稻愈傷組織的誘導(dǎo)率和質(zhì)量，篩選出組織培養(yǎng)特性較好的秈稻品種，為秈稻基因工程和分子育種研究的進(jìn)一步發(fā)展打下一定基礎(chǔ)。

１材料與方法

１．１材料

秈稻保持系中９Ｂ、金２３Ｂ、Ⅱ－３２Ｂ和川香２９Ｂ種子由南昌大學(xué)江西省分子生物學(xué)基因工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供?；瘜W(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純，試驗(yàn)所用激素為Ｓｉｇｍａ公司產(chǎn)品。

１．２方法

１．２．１基本培養(yǎng)基的組分與含量以ＭＳ、Ｎ６、ＮＢ和ＮＭＢ作為秈稻愈傷組織誘導(dǎo)的４種基本培養(yǎng)基，組分與含量見表１，配制完成后滅菌，倒入已滅菌的培養(yǎng)皿中備用。

１．２．２含不同濃度ＫＴ和６－ＢＡ的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配制以ＭＳ為基本培養(yǎng)基，加入3.0 ｍｇ／Ｌ 2，4-D以及ＫＴ或６－ＢＡ，使KT或６－ＢＡ最終濃度分別為０、０．１、０．２、０．４和０．６ ｍｇ／Ｌ，滅菌后倒入已滅菌的培養(yǎng)皿中備用。

１．２．３種子的滅菌與接種選取飽滿成熟的種子，剝?nèi)シf殼后，先用體積分?jǐn)?shù)７０％的乙醇浸泡種子１ ｍｉｎ，用１ ｇ／Ｌ ＨｇＣｌ２消毒５ ｍｉｎ，再用有效氯為３％的次氯酸鈉溶液消毒３０ ｍｉｎ，期間搖動(dòng)數(shù)次，然后用無菌水洗滌５遍。將洗好的種子放在鋪有無菌濾紙的培養(yǎng)皿中晾干，然后將滅菌的種子接種于相應(yīng)的培養(yǎng)基上，每種處理接種５０粒種子，每種處理重復(fù)３次，放入人工氣候室中在２６ ℃暗培養(yǎng)。

１．２．４數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析２０ ｄ后記錄愈傷組織的誘導(dǎo)率與狀態(tài)。所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均用Ｅｘｃｅｌ ２００７和ＳＰＳＳ １７．０軟件進(jìn)行處理，對(duì)不同處理的誘導(dǎo)率分別進(jìn)行單因素方差分析（Ｏｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）和顯著性測(cè)驗(yàn)。誘導(dǎo)率＝［產(chǎn)生愈傷組織的種胚數(shù)∕接種的種胚數(shù)］×１００％。

２結(jié)果與分析

２．１不同基本培養(yǎng)基對(duì)秈稻愈傷組織誘導(dǎo)的影響

在水稻組織培養(yǎng)中，應(yīng)用的基本培養(yǎng)基有ＭＳ、Ｎ６、Ｂ５、ＣＣ以及改良的組合培養(yǎng)基，如ＮＢ、ＭＢ、ＮＭＢ等［１５，１６］。研究采用了ＭＳ、Ｎ６、ＮＢ、ＮＭＢ ４種基本培養(yǎng)基對(duì)川香２９Ｂ、中９Ｂ、金２３Ｂ和Ⅱ－３２Ｂ ４種秈稻雜交水稻保持系成熟胚進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，３～４ ｄ后開始發(fā)芽，一周后盾片上開始有愈傷組織生長(zhǎng)，１０ ｄ后拔掉長(zhǎng)出的芽。２０ ｄ后統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率和狀態(tài)，結(jié)果如表2所示。

從表２和圖１可知，川香２９Ｂ、中９Ｂ、金２３Ｂ和Ⅱ－３２Ｂ的成熟胚在４種基本培養(yǎng)基上的愈傷組織誘導(dǎo)率不同，在ＮＭＢ基本培養(yǎng)基上愈傷組織誘導(dǎo)率最高，平均誘導(dǎo)率為７７.00％～９６.00％，并且誘導(dǎo)出來的愈傷組織狀態(tài)比較好，說明ＮＭＢ基本培養(yǎng)基成分比較適合用于這４種秈稻愈傷組織的誘導(dǎo)，ＮＭＢ基本培養(yǎng)基是由Ｎ６大量元素、ＭＳ微量元素和Ｂ５維生素等組成，這種組合在一定程度上改善了４種秈稻的組織培養(yǎng)效果。４種秈稻在Ｎ６基本培養(yǎng)基中雖然也具有較高的誘導(dǎo)率，但是川香２９Ｂ、金２３Ｂ、Ⅱ－３２Ｂ這３個(gè)秈稻品種誘導(dǎo)出來的愈傷組織的狀態(tài)不佳，顏色呈乳白色，愈傷組織呈大塊或疏松狀，在后續(xù)的繼代中生長(zhǎng)速度慢；在４種基本培養(yǎng)基中，川香２９Ｂ的誘導(dǎo)率較高，且在后續(xù)的繼代中不容易褐化，分化率較高，其次為中９Ｂ、Ⅱ－３２Ｂ，而金２３Ｂ愈傷組織誘導(dǎo)率較低。

２．２添加不同濃度的ＫＴ對(duì)秈稻愈傷組織誘導(dǎo)的影響

將川香２９Ｂ、中９Ｂ、金２３Ｂ和Ⅱ－３２Ｂ ４種秈稻的成熟胚分別接種到以ＭＳ作為基本培養(yǎng)基并含有不同濃度ＫＴ的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。２０ ｄ后統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率，結(jié)果如表３所示。

從表３可知，川香２９Ｂ和中９Ｂ在ＫＴ濃度為０．１ ｍｇ／Ｌ時(shí)愈傷組織誘導(dǎo)率最高，而后隨著ＫＴ濃度進(jìn)一步升高愈傷組織誘導(dǎo)率呈下降趨勢(shì)，ＫＴ濃度為０．４ ｍｇ／Ｌ以上時(shí)，川香２９Ｂ和中９Ｂ兩個(gè)秈稻品種的愈傷組織誘導(dǎo)率下降顯著，而對(duì)于金２３Ｂ，在ＫＴ濃度為低濃度０．１ ｍｇ／Ｌ時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率顯著下降，說明ＫＴ可能會(huì)抑制金２３Ｂ愈傷組織的形成。對(duì)于Ⅱ－３２Ｂ，在試驗(yàn)的ＫＴ濃度范圍內(nèi)，增加ＫＴ濃度對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率的影響不顯著，在ＫＴ濃度為０．６ ｍｇ／Ｌ愈傷組織誘導(dǎo)率較高。總的來說，ＫＴ對(duì)不同的秈稻品種的成熟胚誘導(dǎo)愈傷組織的作用效果不同。

２．３添加不同濃度的６－ＢＡ對(duì)秈稻愈傷組織誘導(dǎo)的影響

將川香２９Ｂ、中９Ｂ、金２３Ｂ和Ⅱ－３２Ｂ ４種秈稻種子分別接種到以ＭＳ為基本培養(yǎng)基并含有不同濃度６－ＢＡ的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。２０ ｄ后統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率，結(jié)果如表４所示。

從表４可知，對(duì)于川香２９Ｂ，添加了６－ＢＡ后愈傷組織誘導(dǎo)率有一定的提高，其中添加了０．４ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ的愈傷組織的誘導(dǎo)率最高，平均值為８９．６０％，與對(duì)照（不添加６－ＢＡ）相比差異達(dá)到顯著水平。對(duì)于Ⅱ－３２Ｂ，添加了６－ＢＡ后愈傷組織誘導(dǎo)率有顯著的提高，其中６－ＢＡ濃度為０．１ ｍｇ／Ｌ時(shí)，其愈傷組織誘導(dǎo)率最高，隨著６－ＢＡ濃度的增高，對(duì)Ⅱ－３２Ｂ成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)率影響不大。對(duì)于中９Ｂ，６－ＢＡ濃度為０．１、０．２ ｍｇ／Ｌ時(shí)愈傷組織誘導(dǎo)率最高，隨著６－ＢＡ濃度進(jìn)一步增高，其愈傷組織誘導(dǎo)率呈下降趨勢(shì)。而對(duì)于金２３Ｂ，添加６－ＢＡ后愈傷組織誘導(dǎo)率下降，這與前面添加ＫＴ激素的結(jié)果相一致，說明兩種激素對(duì)金２３Ｂ成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)具有不利影響，從以上結(jié)果可知，６－ＢＡ對(duì)不同基因型的秈稻愈傷組織誘導(dǎo)率的影響也各有不同。

３小結(jié)與討論

３．１小結(jié)

基本培養(yǎng)基成分對(duì)秈稻愈傷組織的誘導(dǎo)有一定的影響，４種秈稻（川香２９Ｂ、中９Ｂ、金２３Ｂ、Ⅱ－３２Ｂ）在ＭＳ、Ｎ６、NB、ＮＭＢ基本培養(yǎng)基上愈傷組織的誘導(dǎo)效果不同，其中在ＮＭＢ上的誘導(dǎo)效果最好，４種秈稻品種的組織培養(yǎng)特性也存在差異，其中川香２９Ｂ的組織培養(yǎng)特性最好。植物外源激素對(duì)不同基因型的秈稻愈傷組織誘導(dǎo)的影響不同，因此，在不同基因型秈稻的組織培養(yǎng)試驗(yàn)中，選擇合適的基本培養(yǎng)基和適當(dāng)?shù)募に嘏浔仁翘岣叨i稻成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)率和質(zhì)量的重要前提。

３．２不同基本培養(yǎng)基對(duì)秈稻愈傷組織誘導(dǎo)的影響

水稻胚性愈傷組織的誘導(dǎo)是水稻遺傳轉(zhuǎn)化中的重要環(huán)節(jié)，愈傷組織的狀態(tài)直接影響著遺傳轉(zhuǎn)化頻率，所以提高愈傷組織的誘導(dǎo)率和質(zhì)量很重要。胚性愈傷組織的誘導(dǎo)除主要與水稻基因型和外植體類型有關(guān)外［１０，１１］，同時(shí)也受組織培養(yǎng)過程眾多因素（如溫度、ｐＨ、培養(yǎng)基的成分等）的影響，其中培養(yǎng)基的成分就是其中一個(gè)關(guān)鍵影響因子。

很多學(xué)者也研究了常用的培養(yǎng)基以及改良過的培養(yǎng)基對(duì)秈稻愈傷組織誘導(dǎo)率的影響，取得了一定的進(jìn)展［１２，１７］，但是所得出的最佳培養(yǎng)基成分不具有普遍適用性，往往只能適合某一種或者某些品種的水稻。本研究利用的４種基本培養(yǎng)基，即ＭＳ、Ｎ６、ＮＢ、ＮＭＢ對(duì)４種秈稻川香２９Ｂ、中９Ｂ、金２３Ｂ、Ⅱ－３２Ｂ成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)率的影響不同，最適的基本培養(yǎng)基是ＮＭＢ。這與高麗麗等［１５］以秋桂矮１１、華秈占、萬秈占４５這３個(gè)秈稻品種種子為研究對(duì)象的結(jié)果相一致，其原因可能是秈稻愈傷組織形成過程中需要較多種類的有機(jī)成分，而ＮＭＢ能夠給愈傷組織提供比較充足的營(yíng)養(yǎng)元素，有利于愈傷組織的誘導(dǎo)［１８］，但是ＮＭＢ是否還適用于其他秈稻品種愈傷組織的誘導(dǎo)，還有待進(jìn)一步探討。研究所選的４種秈稻品種，其愈傷組織誘導(dǎo)率之間也有一定的差異，誘導(dǎo)率最高的秈稻品種是川香２９Ｂ，其誘導(dǎo)出來的愈傷組織的狀態(tài)較其他３種要好，不容易褐化，并且分化率也較高，說明川香２９Ｂ具有較好的組織培養(yǎng)特性。因此，可望作為進(jìn)行大規(guī)模遺傳轉(zhuǎn)化的試驗(yàn)材料。

３．３２，４－Ｄ與ＫＴ或６－ＢＡ聯(lián)合使用對(duì)秈稻愈傷組織誘導(dǎo)的影響

２，４－Ｄ對(duì)誘導(dǎo)愈傷組織的形成和生長(zhǎng)起著非常重要的作用，一般誘導(dǎo)粳稻的愈傷組織時(shí)，２，４－Ｄ添加量為２.0 ｍｇ／Ｌ比較適宜，而前期的試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)２，４－Ｄ的濃度為３．０ ｍｇ／Ｌ時(shí)，４種水稻能產(chǎn)生較高的愈傷組織誘導(dǎo)率，很多學(xué)者認(rèn)為生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素配合使用可以在一定程度上提高愈傷組織誘導(dǎo)率和狀態(tài)［１９，２０］。凌定厚等［２１］的研究認(rèn)為２，４－Ｄ與ＫＴ是秈稻體細(xì)胞胚胎發(fā)生的基本因素。田文忠［２２］對(duì)秈稻愈傷組織再生頻率的研究發(fā)現(xiàn)，無論選用幼胚、成熟種子胚或經(jīng)過繼代的愈傷組織，在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中加入ＮＡＡ和ＫＴ既可以改善秈稻愈傷組織的質(zhì)量，還可以顯著提高秈稻愈傷組織的再生頻率。郭曉麗［２３］的研究認(rèn)為，２，４－Ｄ與６－ＢＡ配合使用更有利于旱稻愈傷組織的誘導(dǎo)，研究將３.0 ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ和不同濃度的ＫＴ或６－ＢＡ聯(lián)合使用誘導(dǎo)４種秈稻愈傷組織，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在４種秈稻品種中加入一定濃度的ＫＴ或６－ＢＡ，對(duì)川香２９Ｂ、中９Ｂ、Ⅱ－３２Ｂ品種秈稻愈傷組織的誘導(dǎo)有促進(jìn)作用，對(duì)金２３Ｂ愈傷組織的誘導(dǎo)反而有抑制作用，因此外源激素對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率的影響要依據(jù)秈稻品種而論，可能是因?yàn)橛鷤M織誘導(dǎo)率高低不僅與外源激素種類和配比有關(guān)，還與不同品種秈稻的內(nèi)源激素的種類和含量有密切的關(guān)系［２４］。

參考文獻(xiàn)：

［１］ ＲＡＩＮＥＲＩ Ｄ Ｍ，ＢＯＴＴＩＮＯ Ｐ，ＧＯＲＤＯＮ Ｍ Ｐ，ｅｔ ａｌ． Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｉｃｅ（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）［Ｊ］． Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ，１９９０，８（１）：３３－３８．

［２］ ＨＩＥＩ Ｙ，ＯＨＴＡ Ｓ，ＫＯＭＡＲＩ Ｔ，ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｉｃｅ（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．） ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｂｏｕｎｄａｒｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｔ－ＤＮＡ［Ｊ］． Ｐｌａｎｔ Ｊ，１９９４，６（２）：２７１－２８２．

［３］ ＨＩＥＩ Ｙ，ＫＯＭＡＲＩ Ｔ，ＫＵＢＯ Ｔ． Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｉｃｅ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ［Ｊ］． Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，１９９７，３５（１）：２０５－２１８．

［４］ ＴＹＡＧＩ Ａ Ｋ，ＭＯＨＡＮＴＹ Ａ． Ｒｉｃｅ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｃｒｏｐ ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｇｅｎｏｍｉｃｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉ，２０００，１５８（１）：１－１８．

［５］ ＰＲＡＳＨＡＮＴＨ Ｓ Ｒ，ＳＡＤＨＡＳＩＶＡＭ Ｖ，ＰＡＲＩＤＡ Ａ． Ｏｖｅｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ｃｏｐｐｅｒ／ｚｉｎｃ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ ｆｒｏｍ ａ ｍａｎｇｒｏｖｅ ｐｌａｎｔ Ａｖｉｃｅｎｎｉａ ｍａｒｉｎａ ｉｎ ｉｎｄｉｃａ Ｒｉｃｅ ｖａｒ Ｐｕｓａ Ｂａｓｍａｔｉ－１ ｃｏｎｆｅｒｓ ａｂｉｏｔｉｃ ｓｔｒｅｓｓ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ［Ｊ］． Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ｒｅｓ，２００８，１７（２）：２８１－２９１．

［６］ ＪＥＯＮ Ｊ Ｓ，ＬＥＥ Ｓ，ＪＵＮＧ Ｋ Ｈ，ｅｔ ａｌ． Ｔ－ＤＮＡ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎａｌ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ ｆｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｇｅｎｏｍｉｃｓ ｉｎ ｒｉｃｅ［Ｊ］． Ｐｌａｎｔ Ｊ，２０００，２２（６）：５６１－５７０．

［７］ ＴＥＲＡＤＡ Ｒ，ＵＲＡＷＡ Ｈ，ＩＮＡＧＡＫＩ Ｙ，ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｇｅｎｅ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｂｙ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｒｉｃｅ［Ｊ］． Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ，２００２，２０（１０）：１０３０－１０３４．

［８］ 林擁軍，陳浩，曹應(yīng)龍，等． 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的牡丹江８號(hào)高效轉(zhuǎn)基因體系的建立［Ｊ］． 作物學(xué)報(bào)，２００２，２８（３）：２９４－３００．

［９］ ＵＲＵＳＨＩＢＡＲＡ Ｓ，ＴＯＺＡＷＡ Ｙ，ＫＡＷＡＧＩＳＨＩ－ＫＯＢＡＹＡＳＨＩ Ｍ，ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ－ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｒｉｃｅ ｃｅｌｌｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ［Ｊ］． Ｂｒｅｅｄｉｎｇ Ｓｃｉ，２００１， ５１（１）：３３－３８．

［１０］ ＭＩＫＡＭＩ Ｔ，ＫＩＮＯＳＨＩＴＡ Ｔ． Ｇｅｎｏｔｙｐｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｃａｌｌｕｓ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｏｆ ｒｉｃｅ，Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ.［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｔｉｓｓｕｅ Ｏｒｇａｎ Ｃｕｌｔ，１９８８，１２（３）：３１１－３１４．

［１１］ 馬炳田，李平，周開達(dá)． 雜交秈稻親本愈傷組織培養(yǎng)力的研究［Ｊ］． 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，２００２，２０（３）：２００－２０４．

［１２］ ＬＩＮ Ｙ Ｊ，ＺＨＡＮＧ Ｑ Ｆ． Ｏｐｔｉｍｉｓｉｎｇ ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｈｉｇｈ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｄｉｃａ ｒｉｃｅ［Ｊ］． Ｐｌａｎｔ Cｅｌｌ Ｒｅｐ，２００５，２３（８）：５４０－５４７．

［１３］ 王維旭，張?bào)K誠(chéng)，劉學(xué)群，等． 微量元素對(duì)秈稻品種愈傷組織誘導(dǎo)和褐化的影響［Ｊ］． 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，２０１０，２９（１）：６－８．

［１４］ 周杰，陳為，胡文，等． 不同基本培養(yǎng)基對(duì)秈稻粵泰Ａ與粵泰Ｂ成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)及繼代的影響［Ｊ］． 種子，２００９，２８（８）：７４－７６．

［１５］ 高麗麗，陳遠(yuǎn)玲，簡(jiǎn)玉瑜． 提高秈稻愈傷組織誘導(dǎo)率和增殖率的研究［Ｊ］． 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，２００５（４）：２８－３０．

［１６］ 范欽，許新萍，黃小樂，等． 早秈稻培矮６４ Ｓ愈傷組織形成及植株再生［Ｊ］． 西北植物學(xué)報(bào)，２００２，２２（６）：１４６９－１４７３．

［１７］ 周永國(guó)，尹中明，沈忠偉，等． 秈稻９３１１成熟胚再生體系［Ｊ］．上海師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），２００７，３６（４）：７１－７７．

［１８］ 王志成，易自力，皮燦輝，等． 兩種水稻優(yōu)良親本高頻離體再生系統(tǒng)的建立［Ｊ］． 揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版），２００４，２５（３）：３３－３７．

［１９］ 王曉春，師尚禮，梁慧敏，等．２，４－Ｄ和６－ＢＡ組合配比對(duì)金達(dá)苜蓿愈傷組織誘導(dǎo)與分化的影響［Ｊ］． 草地學(xué)報(bào)，２０１０，１８（２）：２１９－２２２．

［２０］ ＺＡＩＤＩ Ｍ Ａ，ＮＡＲＡＹＡＮＡＮ Ｍ，ＳＡＲＤＡＮＡ Ｒ，ｅｔ ａｌ． Ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉａ ｆｏｒ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｎｄｉｃａ ｒｉｃｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ［Ｊ］． Ａｇｒｏｎｏｍｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００６，４（２）：５６３－５７５．

［２１］ 凌定厚，吉田昌一．影響秈稻體細(xì)胞胚胎發(fā)生的幾個(gè)因素的研究［Ｊ］．植物學(xué)報(bào)，１９８７，２９（１）：１－８．

［２２］ 田文忠．提高秈稻愈傷組織再生頻率的研究［Ｊ］．遺傳學(xué)報(bào)，１９９４， ２１（３）：２１５－２２１．

［２３］ 郭曉麗．旱稻愈傷組織培養(yǎng)研究［Ｊ］．湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，２０１０，４９（２）：２７１－２７２．

［２４］ 羅瓊，胡延玉，周開達(dá)．內(nèi)源激素對(duì)水稻成熟胚培養(yǎng)力的影響［Ｊ］．中國(guó)水稻科學(xué)，１９９８，１２（４）：２３８－２４０．

收稿日期：２０１１－１２－０７

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（３０８６０１５５）；江西省教育廳科技項(xiàng)目（ＧＪＪ１２０１３）

作者簡(jiǎn)介：廖鵬飛（１９８０－），男，湖南新田人，講師，在讀博士研究生，研究方向?yàn)橹参锓肿由飳W(xué)、基因打靶，（電話）１３８７０８４１９９２（電子信箱）

ｌｆｐ＿１９８０＠１６３．ｃｏｍ；通訊作者，李紹波，博士，（電話）０７９１－８３９６９５３７（電子信箱）ｈｅｓｈａｏｂｏｌｉ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ。