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        擎天樹(shù)種子不同溶劑浸提液對(duì)白菜種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)的影響

        2012-04-29 08:37:59機(jī)黃銀珊黃伯高李婷覃英繁黃永
        湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2012年18期
        關(guān)鍵詞:抑制作用種子萌發(fā)白菜

        梁 機(jī) 黃銀珊 黃伯高 李婷 覃英繁 黃永

        摘要:以具有胎萌現(xiàn)象的擎天樹(shù)種子為材料,采用不同溶劑進(jìn)行提取,通過(guò)生物測(cè)定法研究了擎天樹(shù)種子不同溶劑浸提液對(duì)白菜種子萌發(fā)與幼苗生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明,擎天樹(shù)種子不同溶劑浸提液對(duì)白菜種子的發(fā)芽與生長(zhǎng)均有抑制效應(yīng),且隨浸提液濃度增大抑制作用增強(qiáng)。不同溶劑的種子浸提液對(duì)白菜種子萌發(fā)與幼苗生長(zhǎng)的抑制活性存在差異,其中以乙醚浸提液的抑制活性最強(qiáng),其他溶劑的浸提液對(duì)白菜種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)也表現(xiàn)出了不同程度地抑制作用,抑制強(qiáng)弱依次為乙醚、水、乙醇、甲醇、丙酮。

        關(guān)鍵詞:擎天樹(shù);溶劑;種子浸提液;白菜;抑制作用;種子萌發(fā)

        中圖分類號(hào):Q949.758.6;S722.1;Q945.78 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):0439-8114(2012)18-4031-04

        Effect of Different Solvent Extraction of Parashorea chinensis Seeds

        on Seed Germination and Early Seedling Growth of Brassica campestris ssp. chinensis

        LIANG Ji1,HUANG Yin-shan1,HUANG Bo-gao2,LI Ting1,QIN Ying-fan2,HUANG Yong2

        (1. College of Forestry, Guangxi University, Nanning 530005,China;

        2. Forest Tree Seed and Stock Master Station of Guangxi, Nanning 530022,China)

        Abstract: Parashorea chinensis Wang Hsie seeds with vivipary were extracted by different solvent extractions, and the effects of different solvent extraction of P. chinensis seeds on seed germination and early seedling growth of Brassica campestris L. ssp. chinensis (L.) Mak. were studied through biological assay method. The results indicated that there was obvious inhibitory effect of all crude extracts on the germination and growth of B. campestris ssp. chinensis, and the inhibitory effect became stronger as the concentration of extraction solution increased. The inhibitory activity on germination and growth of B. campestris ssp. chinensis differed with different solvent. The crude extracts from ether showed the strongest inhibitory activity; while other extracts also had inhibitory effect. The inhibitory activity of different solvent extractions ranked from strong to week as ether, water, alcohol, carbinol, acetone.

        Key words: Parashorea chinensis Wang Hsie; solvent; seed extracts; Brassica campestris L. ssp. chinensis(L.) Mak.; inhibitiory effect; seed germination

        擎天樹(shù)(Parashorea chinensis Wang Hsie)又名望天樹(shù),為龍腦香科(Dipterocarpaceae)柳安屬(Parashorea Kurz)常綠大喬木樹(shù)種,是我國(guó)重要的珍稀瀕危植物[1],也是我國(guó)熱帶雨林的標(biāo)志樹(shù)種之一,屬國(guó)家一級(jí)保護(hù)植物。其間斷地分布在云南省南部和廣西壯族自治區(qū)西南部的巴馬瑤族自治縣、都安瑤族自治縣、那坡縣、田陽(yáng)縣及龍州縣等地的局部生境[2]。擎天樹(shù)具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值,能提取龍腦香脂;其樹(shù)干通直圓滿,出材率高,是優(yōu)良的工業(yè)用材樹(shù)種,可用作橋梁、碼頭、建筑、車船、家具、室內(nèi)裝飾材料的生產(chǎn)原料,還可以制作膠合板,具有很好的發(fā)展前景[3,4]。擎天樹(shù)的種子沒(méi)有休眠期,極易發(fā)芽,在從母體植株上散落時(shí)就已開(kāi)始萌發(fā);有研究證明擎天樹(shù)的種子屬于極端頑拗性種子,具有胎萌現(xiàn)象[5,6]。種子萌發(fā)過(guò)程是植物生長(zhǎng)發(fā)育的起點(diǎn),大量研究表明,植物內(nèi)源激素赤霉酸(Gibberellic acid,GA)和脫落酸(Abscisic acid,ABA)是調(diào)控種子萌發(fā)與休眠的重要信號(hào)物質(zhì),起著不可替代的調(diào)節(jié)作用[7,8]。一些學(xué)者認(rèn)為種子內(nèi)源激素赤霉酸類似物(GA analogues,GAs)和ABA對(duì)種子胎萌有著重要的作用;GAs可使種子休眠解除;相反,ABA卻抑制種子早萌,誘導(dǎo)休眠[9]。有試驗(yàn)報(bào)道紅樹(shù)植物木欖[Bruguiera gymnorrhiza(L.)Savigny]的成熟種子和幼胚軸中的ABA含量較低,而赤霉素(Gibberellic A3,GA3)含量較高,推測(cè)這可能是影響紅樹(shù)植物胎生現(xiàn)象發(fā)生普遍的重要原因之一[10]。彭業(yè)芳等[11]研究發(fā)現(xiàn),龍眼(Dimocarpus longgana Lour.)、荔枝(Litchi chinensis Sonn.)的胎萌現(xiàn)象與其種子內(nèi)的ABA含量有關(guān)??梢?jiàn)植物種子的萌發(fā)、休眠與其內(nèi)含物質(zhì)成分及含量密切相關(guān)。目前以作物種子為受體,利用具有深長(zhǎng)休眠特性、種子難以萌發(fā)或發(fā)芽率低、發(fā)芽時(shí)間長(zhǎng)、發(fā)芽不整齊的林木種子浸提液來(lái)處理作物種子,探討林木種子中抑制萌發(fā)物質(zhì)的存在、確定萌發(fā)抑制物對(duì)作物種子休眠的作用、以及對(duì)作物種子萌發(fā)影響的研究等是比較多的[12-16],但用有胎萌現(xiàn)象的林木種子浸提液進(jìn)行作物種子生物測(cè)定、研究其對(duì)作物種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)影響的試驗(yàn)尚未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)探討了擎天樹(shù)種子的不同溶劑浸提液對(duì)白菜[Brassica campestris L. ssp. chinensis(L.)Mak.]種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)的影響,旨在揭示擎天樹(shù)種子內(nèi)含物的特性,了解種子中內(nèi)源物質(zhì)與其胎萌現(xiàn)象的關(guān)系,為進(jìn)一步研究擎天樹(shù)種子發(fā)芽生理機(jī)制以及為該珍稀瀕危植物種子的萌發(fā)、繁殖和保護(hù)提供理論依據(jù)。

        1材料與方法

        1.1材料

        擎天樹(shù)種子于2010年8月上旬,采集于廣西壯族自治區(qū)田陽(yáng)縣坤平鄉(xiāng)坡旺村那要山擎天樹(shù)天然林中,在實(shí)驗(yàn)室挑選出飽滿、胚根伸出約1 cm長(zhǎng)的種子,用濕紙包裹后裝入密閉的塑料袋中,保存在4 ℃的冰箱中,備用。受體植物白菜種子購(gòu)于南寧市蔬菜種子市場(chǎng)。

        1.2方法

        1.2.1擎天樹(shù)種子不同浸提液的制備浸提液的制備參照田勝尼等[14]的方法,分別稱取50.0 g擎天樹(shù)種子5份,研磨后裝入廣口瓶中,分別加入500 mL的去離子水、95%乙醇、80%甲醇、乙醚、丙酮浸泡,封口后放入4 ℃的冰箱中存放36 h。36 h后取出,濾除殘?jiān)?,除水浸提液外,其他有機(jī)溶劑浸提液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋轉(zhuǎn)蒸干,再用去離子水洗下,并定容為500 mL,使每種浸提液中擎天樹(shù)種子提取物的質(zhì)量濃度均為50 g/500 mL。然后將擎天樹(shù)種子浸提液分別稀釋成0.100、0.075、0.050、0.025 g/mL,以去離子水為對(duì)照,濃度即為0.000 g/mL(CK),都放在4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

        1.2.2種子萌發(fā)試驗(yàn)選取子粒飽滿、大小均勻的白菜種子,經(jīng)高錳酸鉀溶液浸泡15 min消毒后,放置在墊有雙層濾紙的培養(yǎng)皿中,每個(gè)重復(fù)100粒,然后添加不同溶劑浸提的不同濃度擎天樹(shù)種子浸提液,以浸濕白菜種子為度,每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)重復(fù);在光照培養(yǎng)箱中,(25±1) ℃、16 h/d條件下進(jìn)行種子發(fā)芽培養(yǎng),每天檢查并記錄發(fā)芽情況,及時(shí)補(bǔ)充相應(yīng)的處理液以保持濕潤(rùn)。到第七天于每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)測(cè)定10株白菜幼苗的高度和主根長(zhǎng)度;在發(fā)芽末期,以長(zhǎng)出完整的基本幼苗結(jié)構(gòu)的種子為正常發(fā)芽粒,直到連續(xù)5 d發(fā)芽種子數(shù)平均不到供試種子總數(shù)的1 %時(shí)統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率。發(fā)芽率為在一定時(shí)間內(nèi)生成正常幼苗的種子粒數(shù)占供試種子總數(shù)的百分率[17]。簡(jiǎn)化活力指數(shù) (Simplied vigor index) SVI=S×G[18];其中S為平均苗長(zhǎng)或干重、鮮重,G為發(fā)芽率(%)。試驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用Excel軟件和DPS軟件進(jìn)行方差分析與LSD多重比較分析。

        2結(jié)果與分析

        2.1擎天樹(shù)種子不同溶劑浸提液對(duì)白菜種子萌發(fā)的影響

        2.1.1擎天樹(shù)種子不同溶劑浸提液對(duì)白菜種子發(fā)芽率的影響擎天樹(shù)種子不同溶劑浸提液對(duì)白菜種子發(fā)芽率的影響結(jié)果見(jiàn)表1。從統(tǒng)計(jì)結(jié)果看,擎天樹(shù)種子不同溶劑浸提液均可對(duì)白菜種子的發(fā)芽率產(chǎn)生顯著的抑制作用(P<0.05),經(jīng)不同溶劑浸提液處理的白菜種子發(fā)芽率均低于對(duì)照,而且同一種溶劑不同濃度浸提液處理下的白菜種子發(fā)芽率隨著濃度的增加呈遞減趨勢(shì)。不同溶劑浸提液對(duì)白菜種子發(fā)芽率的影響是不同的,乙醚浸提液對(duì)白菜種子的萌發(fā)抑制作用最顯著,當(dāng)乙醚浸提液濃度在0.100 g/mL時(shí),白菜種子的發(fā)芽率僅為28.0%,比對(duì)照(CK)降低了69.3 個(gè)百分點(diǎn);當(dāng)乙醚浸提液濃度分別在0.075、0.050、0.025 g/mL時(shí),白菜種子的發(fā)芽率也顯著低于對(duì)照(P<0.05)。經(jīng)去離子水、乙醇、甲醇、丙酮浸提液處理后的白菜種子發(fā)芽率也表現(xiàn)出不同程度地降低,且發(fā)芽率在各浸提液內(nèi)各濃度間的差異也達(dá)到了顯著水平(P<0.05)。與對(duì)照相比,擎天樹(shù)種子各溶劑浸提液對(duì)白菜種子發(fā)芽率的抑制程度由大到小依次為:乙醚、去離子水、乙醇、甲醇、丙酮。

        2.1.2擎天樹(shù)種子不同溶劑浸提液對(duì)白菜種子簡(jiǎn)化活力指數(shù)的影響簡(jiǎn)化活力指數(shù)包含發(fā)芽速率和幼苗生長(zhǎng)勢(shì)2個(gè)變量,它比單獨(dú)采用發(fā)芽指數(shù)(Germination index,GI)來(lái)評(píng)價(jià)種子活力具有更充分、更全面的說(shuō)服力[18]。擎天樹(shù)種子不同溶劑浸提液對(duì)白菜種子簡(jiǎn)化活力指數(shù)的影響結(jié)果見(jiàn)表1。從表1可見(jiàn),各溶劑不同濃度浸提液處理均對(duì)白菜種子的簡(jiǎn)化活力指數(shù)產(chǎn)生了顯著的抑制作用(P<0.05),隨著浸提液濃度的增加,白菜種子簡(jiǎn)化活力指數(shù)呈現(xiàn)遞減現(xiàn)象,且濃度越大,簡(jiǎn)化活力指數(shù)越低,其中乙醚浸提液處理的白菜種子簡(jiǎn)化活力指數(shù)最低,反映出抑制活性最大;如乙醚濃度為0.100 g/mL時(shí),白菜種子的簡(jiǎn)化活力指數(shù)為0.34,比對(duì)照的3.17降低了2.83;即便是低濃度的乙醚浸提液處理(0.025 g/mL),白菜種子的簡(jiǎn)化活力指數(shù)也降低到1.73,同樣表現(xiàn)出顯著的抑制效應(yīng);并且乙醚浸提液各濃度處理的簡(jiǎn)化活力指數(shù)均顯著低于對(duì)照,明顯低于水浸提液和其他有機(jī)溶劑浸提液同濃度處理的簡(jiǎn)化活力指數(shù)。綜合以上分析結(jié)果,說(shuō)明擎天樹(shù)種子中存在著抑制白菜種子萌發(fā)的物質(zhì),但在不同溶劑處理中,這些物質(zhì)對(duì)白菜種子萌發(fā)產(chǎn)生的抑制作用強(qiáng)弱程度存在差異,這可能是由于不同種類的抑制物質(zhì)分別溶于不同的有機(jī)溶劑中、或者是由于各溶劑中所具有的抑制物含量不同所導(dǎo)致的。

        2.2擎天樹(shù)種子不同溶劑浸提液處理對(duì)白菜幼苗生長(zhǎng)的影響

        2.2.1擎天樹(shù)種子不同溶劑浸提液對(duì)白菜幼苗苗高生長(zhǎng)的影響擎天樹(shù)種子不同溶劑浸提液對(duì)白菜幼苗苗高生長(zhǎng)的影響結(jié)果見(jiàn)圖1。從圖1可知,經(jīng)過(guò)不同溶劑浸提液處理的白菜幼苗苗高均顯著地低于對(duì)照的苗高(P<0.05),而且各浸提液濃度間也存在一定的差異。其中對(duì)照的苗高生長(zhǎng)最好,幼苗高度為2.26 cm。而濃度為0.100 g/mL的各浸提液處理對(duì)白菜幼苗苗高的抑制作用均表現(xiàn)出最強(qiáng)的抑制效應(yīng),并且隨著濃度的降低,抑制作用也隨之減弱,如低濃度(0.025 g/mL)的各浸提液處理對(duì)白菜幼苗高度生長(zhǎng)的抑制作用最弱。試驗(yàn)中還觀察到,在5種溶劑浸提液的處理中,乙醚浸提液處理對(duì)白菜幼苗高度的抑制作用最顯著,其平均苗高比對(duì)照降低了0.89 cm,僅為對(duì)照苗高的60.6%,且幼苗子葉大部分發(fā)黃,幼苗發(fā)育幾乎為畸形,并在后期幼苗腐爛嚴(yán)重。

        2.2.2擎天樹(shù)種子不同溶劑浸提液對(duì)白菜幼苗主根長(zhǎng)度生長(zhǎng)的影響擎天樹(shù)種子不同溶劑浸提液對(duì)白菜幼苗主根長(zhǎng)度生長(zhǎng)的影響結(jié)果見(jiàn)圖2。由圖2可以看出,各溶劑浸提液不同濃度處理對(duì)白菜幼苗主根長(zhǎng)度的影響產(chǎn)生不同的效應(yīng),除乙醚浸提液處理外,其余處理對(duì)白菜主根長(zhǎng)度指標(biāo)表現(xiàn)出微弱的“低促高抑”濃度效應(yīng),與對(duì)照相比,白菜幼苗主根長(zhǎng)度在水、乙醇、甲醇和丙酮浸提液的0.025 g/mL濃度處理下均有不同程度地增大,主根長(zhǎng)度分別比對(duì)照增加0.18、0.18、0.25、0.18 cm。但浸提液濃度達(dá)到0.050、0.075、0.100 g/mL時(shí),則主根長(zhǎng)度的生長(zhǎng)表現(xiàn)為降低,且浸提液濃度在0.100 g/mL時(shí)根長(zhǎng)都顯著低于對(duì)照(P<0.05)。說(shuō)明低濃度的水、乙醇、甲醇和丙酮浸提液對(duì)白菜幼苗根系具促進(jìn)作用,而高濃度的浸提液阻礙了幼苗根系生長(zhǎng),這與田旭平等[19]報(bào)道的圓柏[Sabina chinensis(L.)Ant.]果實(shí)水浸提液對(duì)植物種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)影響的研究結(jié)果相類似。但在乙醚浸提液處理下的白菜幼苗主根長(zhǎng)度并沒(méi)有出現(xiàn)“低促高抑”的濃度效應(yīng),而是隨著濃度的降低,抑制作用也隨之減弱。在5種溶劑浸提液的處理中,乙醚浸提液的處理對(duì)白菜幼苗的主根長(zhǎng)度抑制作用最強(qiáng),其平均主根長(zhǎng)度比對(duì)照降低了0.94 cm。

        3小結(jié)與討論

        擎天樹(shù)種子不同溶劑浸提液處理對(duì)白菜種子的發(fā)芽和幼苗高度生長(zhǎng)均表現(xiàn)為抑制作用,抑制效應(yīng)隨著浸提液濃度的升高而逐漸增強(qiáng),說(shuō)明擎天樹(shù)種子中存在著活性較強(qiáng)的內(nèi)源抑制物質(zhì)。采用不同溶劑對(duì)擎天樹(shù)種子進(jìn)行提取,生物測(cè)定結(jié)果顯示其抑制活性不同,其中以乙醚浸提液的抑制活性最強(qiáng),其他溶劑的浸提液對(duì)白菜種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)也表現(xiàn)出不同程度地抑制作用,抑制強(qiáng)弱依次為乙醚、水、乙醇、甲醇、丙酮,表明擎天樹(shù)種子內(nèi)存在的抑制物質(zhì)很可能非單一物質(zhì),而是由極性不同的物質(zhì)所組成的,說(shuō)明擎天樹(shù)種子中的抑制物質(zhì)成分是復(fù)雜多樣的。

        目前,從種子不同部位分離出的與萌發(fā)和生長(zhǎng)有關(guān)的抑制物質(zhì)有脫落酸、醛類、酚類、有機(jī)酸、亞胺、生物堿、香豆素等[20],至于擎天樹(shù)種子中存在哪些種類的抑制物質(zhì)未見(jiàn)有研究報(bào)道。有學(xué)者研究了桃葉衛(wèi)矛(Euonymus bungeanus Maxim.)[12]、栝樓(Trichosanthes kirilowii Maxim.)[13]、南方紅豆杉(Taxus chinensis var. mairei Cheng et L.K Fu)[14]、遼東榿木(Alnus sibirica Fisch. ex Turcz.)[15]、返魂草(Aster tataricus L. f)[16]等植物種子不同溶劑的浸提液對(duì)不同作物種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)的影響,認(rèn)為引起植物種子休眠的主要原因之一是植物種子中含有多種類型的抑制物質(zhì)造成的。筆者以極易發(fā)芽、沒(méi)有休眠期、且具胎萌現(xiàn)象的擎天樹(shù)種子浸提液進(jìn)行試驗(yàn)的研究結(jié)果表明,擎天樹(shù)種子不同溶劑的浸提液對(duì)受試白菜種子的萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)均可產(chǎn)生抑制影響,可以推斷擎天樹(shù)種子浸提液中含有的某些化學(xué)成分能夠抑制其他植物(作物)種子發(fā)芽。在對(duì)龍眼和荔枝[11]、夏櫟(Quercus robur L.)[21]等頑拗性種子植物在幼年發(fā)育過(guò)程中ABA含量及敏感性變化的研究中發(fā)現(xiàn),種子在發(fā)育過(guò)程中ABA含量先上升,達(dá)到高峰后迅速下降,種子生理成熟特別是果實(shí)采收時(shí)則可降低到最低水平;同時(shí),隨著種子的發(fā)育成熟,種子及其胚軸對(duì)外源ABA的敏感性也在不斷下降。王潔等[10]比較了紅樹(shù)植物木欖的不同繁殖器官如花蕾、種子、幼胚軸、成熟胚軸中ABA和GA3含量的變化,發(fā)現(xiàn)成熟種子和幼胚軸中的ABA含量較低,而GA3含量較高,推測(cè)這可能是影響紅樹(shù)植物胎生現(xiàn)象普遍發(fā)生的重要原因之一。本試驗(yàn)中擎天樹(shù)種子雖有胎萌現(xiàn)象,但從其提取液進(jìn)行的生物測(cè)定結(jié)果看,并不表現(xiàn)出有利于促進(jìn)白菜種子萌發(fā)與生長(zhǎng)的現(xiàn)象,反而顯示其種子內(nèi)有對(duì)受試種子的萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制影響的物質(zhì)存在。種子胎萌是一個(gè)比較復(fù)雜的過(guò)程,它不僅與種子的遺傳特性和休眠程度有關(guān),而且還受外界環(huán)境條件影響[22]。有研究發(fā)現(xiàn),種子休眠與種子中缺乏ABA、或者是雖然ABA含量正常但種胚對(duì)ABA不敏感、敏感性降低有關(guān)[11,23],本試驗(yàn)的結(jié)果說(shuō)明了擎天樹(shù)種子可能并不缺乏抑制種子發(fā)芽的內(nèi)源物質(zhì)成分,這些成分也許在擎天樹(shù)種子內(nèi)含量正常,但由于其種胚對(duì)這些內(nèi)源抑制成分不敏感、或者是敏感性降低,從而造成擎天樹(shù)種子出現(xiàn)胎萌現(xiàn)象。本研究只對(duì)擎天樹(shù)種子的不同溶劑浸提液進(jìn)行了生物測(cè)定,初步探究了擎天樹(shù)種子內(nèi)抑制物質(zhì)的基本特性,但要確定這些內(nèi)源成分的組成及其含量,揭示擎天樹(shù)種子胎萌現(xiàn)象的實(shí)質(zhì),尚需對(duì)抑制物質(zhì)做進(jìn)一步的提取與分離研究。

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        收稿日期:2011-12-16

        基金項(xiàng)目:廣西壯族自治區(qū)“十一五”林業(yè)科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(桂林科字2010-19);廣西壯族自治區(qū)研究生教育創(chuàng)新計(jì)劃資助項(xiàng)目(105931003041)

        作者簡(jiǎn)介:梁機(jī)(1961-),男,廣西平南人, 副教授,博士,主要從事林木遺傳育種教學(xué)與研究工作,(電話)13507868127(電子信箱)

        liangjimail@163.com。

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