田思源

1鐵皮石斛的概述及其藥用價(jià)值

鐵皮石斛,為石斛屬珍稀瀕危藥用植物,俗稱鐵皮楓斗,又稱黑節(jié)草,屬于蘭科附生蘭類,是一種珍稀的藥用植物和和名貴的室內(nèi)觀賞植物。野生的鐵皮石斛大多分布在東亞、東南亞及澳大利亞等國家和地區(qū)。在我國主要分布于秦嶺、淮河以南的云南、廣西、貴州、浙江等地的山區(qū)[1]。鐵皮石斛的種子極小、無胚乳,自然條件下需要與某些真菌共生才能萌發(fā),很難用實(shí)生苗栽培;而傳統(tǒng)的分株、扦插等方式的繁殖率極低,加上人為的過度采挖和破壞生境,其資源已瀕臨滅絕,被國家列為重點(diǎn)保護(hù)的藥用植物之一。鑒于鐵皮石斛在我國栽培的地域局限性,規(guī)?；_發(fā)石斛活性物質(zhì)急需要開辟新的途徑。而鐵皮石斛組培以其繁殖規(guī)模大、速度快為優(yōu)勢(shì)是生產(chǎn)有效物質(zhì)的一種有前途的途徑和手段,是解決其資源緊缺問題的有效途徑。因此對(duì)鐵皮石斛組織培養(yǎng)及其工藝條件的深入研究就具有了非常重要的意義,它不僅具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益,同時(shí)也具有顯著的生態(tài)效益。

2多種條件對(duì)鐵皮石斛組織培養(yǎng)的影響

2.1 不同添加物對(duì)鐵皮石斛外植體的影響

香蕉、蘋果、椰子等水果中含有多種天然植物激素及豐富的無機(jī)鹽離子,對(duì)鐵皮石斛幼芽增殖有明顯的促進(jìn)作用。在組織培養(yǎng)中添加香蕉泥、蘋果汁、椰子汁可以豐富石斛快繁時(shí)所需要的多種激素。從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中得出香蕉泥效果最好。劉驊[2]等研究表明,基本培養(yǎng)基以B5或1/2MS,選用10％的香蕉水提物,NAA 2mg/L是鐵皮石斛試管苗壯苗的適宜培養(yǎng)基。馬治國等對(duì)鐵皮石斛原球莖分化適宜培養(yǎng)基研究也得出相似結(jié)論。

2.2 不同溫度對(duì)鐵皮石斛外植體生長的影響

不同溫度對(duì)鐵皮石斛外植體的生長有十分明顯的影響。在溫度為25℃比20℃、30℃和35℃更有利于外植體的出芽率和生長勢(shì)的提高。20℃時(shí),石斛出芽率也是較高的。但是30℃之后,出芽率急劇下降,35℃時(shí)石斛出芽受到完全抑制,出芽率為零。探究原因,是因?yàn)檫^高的溫度破壞了石斛細(xì)胞的代謝體系。更準(zhǔn)確地說,高溫破壞了代謝體系中各種各樣的酶及其一些活性物質(zhì),使得代謝無法正常進(jìn)行,使得鐵皮石斛外植體長勢(shì)欠佳或者根本不出芽。因而培養(yǎng)石斛外植體時(shí),溫度的選擇非常重要。

2.3 不同pH對(duì)石斛外植體生長的影響

不同pH對(duì)石斛外植體的生長也有明顯的影響。在pH為5.8的培養(yǎng)基中,外植體出芽率最高,pH5.5次之,pH6.4出芽率最小。在pH為5.8比5.2、5.5和6.1更有利于外植體的出芽率和生長勢(shì)的提高。

2.4 不同的激素配比對(duì)石斛外植體生長的影響

物激素是植物組織培養(yǎng)中不可缺少的成分,適量的加入適宜的植物激素的種類和濃度,是誘導(dǎo)培養(yǎng)物發(fā)生一定的生理變化和形態(tài)變化的最主要的因素。前人研究結(jié)果表明,激素配比對(duì)于鐵皮石斛原球莖的誘導(dǎo)、增殖、分化及生根壯苗均有重要的影響。生長素和細(xì)胞分裂素相互配合能調(diào)節(jié)細(xì)胞的分裂與分化,控制器官的分化,生長素高時(shí)可誘導(dǎo)根的形成,細(xì)胞分裂素高時(shí)可促進(jìn)芽的分化。當(dāng)IAA0.1mg/ml,6-BA0.5mg/ml各兩滴時(shí),石斛出芽率最高,長勢(shì)最佳。IAA、6-BA濃度過大時(shí),石斛生長會(huì)受到抑制,出芽率很低。

2.5 不同的香蕉泥添加量對(duì)石斛外植體生長的影響

在第一個(gè)影響條件中比較了不同有機(jī)添加物對(duì)石斛組織培養(yǎng)的影響,并得出香蕉泥是最佳的添加物的結(jié)論。為了更進(jìn)一步提高鐵皮石斛外植體的出芽率,我們研究了香蕉泥的最佳添加質(zhì)量。從實(shí)驗(yàn)中得出,每毫升培養(yǎng)基中添加150g香蕉泥更有利于外植體的出芽率和生長勢(shì)的提高。添加的香蕉泥的量在100g～200g范圍內(nèi)都有較高的出芽率,而繼續(xù)增大香蕉泥添加量,不能夠提高出芽率,反而使得出芽率下降。培養(yǎng)鐵皮石斛外植體時(shí)應(yīng)注意確定添加物的添加量,對(duì)培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化,以達(dá)到最佳培養(yǎng)條件。

3 組培苗的移栽

石斛外植體在增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng),一段時(shí)間后,選取生長狀況一致的幼芽接種到生根培養(yǎng)基上,將幼苗分瓶于生根瓶中;當(dāng)組培苗生長到4cm或更長時(shí),打開培養(yǎng)瓶蓋置于自然光下煉苗3d。然后取出生根苗,小心洗去基部培養(yǎng)基,用0.1%滅菌靈消毒,以防栽培后的石斛根腐爛。將幼苗栽種于分裝著椰糠、干苔蘚的基質(zhì)中,遮蔭環(huán)境下,每天潔水噴霧保濕1次,以防幼根干燥。10d后看到有新葉生長和莖節(jié)明顯變粗,生長40d后,獲得了十分健壯的快繁幼苗。若不及時(shí)移栽,使得石斛苗長期在培養(yǎng)瓶中生長,會(huì)因營養(yǎng)耗盡而枯黃甚至死亡。

4組培苗移栽

當(dāng)組培苗移栽到基質(zhì)上,盡量選取比較透氣的材料。據(jù)此,可適當(dāng)選取粗纖維類的椰糠和干苔蘚作為基質(zhì)[3]。但考慮到苗小、根少,如基質(zhì)間隙太大不利于鐵皮石斛糼苗固定和吸收水肥,可用干苔蘚包裹住生根小苗栽種,遮蔭環(huán)境下,每天潔水噴霧保濕1次,既可肥水又不影響透氣,適合石斛的生長習(xí)性,利于快速育苗,促進(jìn)壯根生長。移栽后,植株成活率達(dá)90%以上,為后續(xù)進(jìn)一步移栽地面做好了前期準(zhǔn)備。

綜上所述:當(dāng)培養(yǎng)基是1/2 MS固體培養(yǎng)基;采用激素0.1mg/mL IAA、0.5mg/mL 6-BA;溫度為25°C;pH為5.8;添加物為香蕉泥,其濃度為150g/L;石斛外植體的出芽率和生長勢(shì)最高,染菌和褐變的幾率也最低,外植體生長情況最佳。

參考文獻(xiàn)

[1] 邵華,張玲琪,李俊梅.鐵皮石斛研究進(jìn)展.中草藥,2004,35(1):109～111

[2] 劉驊,張治國,趙立紅,等.迭鞘石斛的種子萌發(fā)和試管苗形成[J].現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),1989,6(5):8～9．

[3] 陳瑞蕊,林先貴,施亞琴.藥用石斛及其組織培養(yǎng)技術(shù)研究概要[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2002,(5):65～66．