李忠權(quán)，黃右軍，楊炳壯，陳明棠，鄭 威

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 水牛研究所，廣西 南寧530001)

我國(guó)是沼澤型水牛(役用水牛) 飼養(yǎng)大國(guó)，但良種極少。摩拉、尼里/ 拉菲(簡(jiǎn)稱尼里) 水牛屬河流型乳用水牛品種，原產(chǎn)地在印度和巴基斯坦，是當(dāng)?shù)刈詈玫娜榕Ｆ贩N，被世界上許多國(guó)家引進(jìn)以改良本地牛。挖掘良種水牛繁殖潛力，加快良種繁殖，能夠提高種源供應(yīng)能力，對(duì)促進(jìn)我國(guó)水牛品種改良和水牛奶業(yè)開(kāi)發(fā)具有重大意義。本研究旨在通過(guò)以摩拉、尼里水牛凍精與本地水牛卵母細(xì)胞進(jìn)行體外受精生產(chǎn)的胚胎移植到本地母水牛、摩拉、尼里母水牛，探討水牛體外胚胎質(zhì)量、安全性、移植方法以及移植效果，推動(dòng)試管水牛技術(shù)應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 水牛體外胚胎生產(chǎn)

在當(dāng)?shù)赝涝讏?chǎng)收集本地水牛卵巢，保存于盛有25 ～35 ℃生理鹽水的保溫瓶中，6 h內(nèi)運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室，采集卵母細(xì)胞。精液為廣西畜禽品種改良站生產(chǎn)的摩拉、尼里水牛細(xì)管凍精。按黃右軍等水牛卵母細(xì)胞體外受精與早期胚胎發(fā)育的研究［1］方法生產(chǎn)的新鮮全胚135 枚、雙半胚65 枚。

按張秀芳等水牛體外受精胚胎的玻璃化冷凍［2］方法進(jìn)行水牛胚胎冷凍與解凍。冷凍全胚56 枚、雙半胚10 枚。

1.2 受體母牛

從農(nóng)村購(gòu)進(jìn)7 ～10 歲本地水牛27 頭，本所水牛種畜場(chǎng)提供6 ～10 歲摩拉和尼里水牛31 頭，共計(jì)58 頭。所有水牛按常規(guī)奶牛舍飼飼養(yǎng)。

1.3 移胚器械

為法國(guó)IMV 卡蘇公司生產(chǎn)。

1.4 方法

將鮮胚和凍胚分別移入本地水牛和摩拉、尼里水牛等不同受體。具體方法: 胚胎移植的時(shí)間為受體母牛出現(xiàn)站立發(fā)情后第4～6 天進(jìn)行移植。胚胎移植的部位: 移胚槍頭部通過(guò)子宮頸，進(jìn)入黃體側(cè)子宮角，達(dá)到子宮大彎部位。移植胚胎的數(shù)目和胚齡: 每頭受體牛每次移植鮮胚(凍胚) 2 枚，胚齡為6 ～8 d的早期囊胚、囊胚、擴(kuò)展囊胚。

2 結(jié)果與分析

2.1 胚胎移植的受胎率

本研究利用水牛體外雜種胚胎移植受體母牛106 頭次，其中鮮胚移植81 頭次，受胎36 頭次，受胎率44.4%; 凍胚移植25 頭次，受胎8 頭次，受胎率32%，詳見(jiàn)表1。

表1 水牛體外胚胎移植受胎率

從表1 看出，受體為本地母牛移植受胎率，鮮胚為38.0%(19/50) ，凍胚為20.0 %(3/15) ，均顯著低于受體為摩拉和尼里母牛的54.8%(17/31) 和50.0%(5/10) 。

2.2 不同移胚時(shí)間受胎結(jié)果

表2 不同移胚時(shí)間受胎結(jié)果

從表2 可以看出，移胚結(jié)果，鮮胚的受胎率分別是: 4 d為53.1%(17/32) ，5 d為37.0%(10/27) ，6 d為52.9%(9/17) 。而凍胚在3 d的時(shí)候移植為0，因?yàn)樵诖藭r(shí)，胚胎的發(fā)育還處在8 ～16 細(xì)胞左右，根據(jù)黃右軍［1］報(bào)道，在4 ～8 d的體外胚胎與發(fā)情母牛子宮環(huán)境同期化有關(guān)。

2.3 鮮胚移植受體母牛的繁殖狀況

表3 鮮胚移植受體母牛繁殖狀況

從表3 可以看出，本地母牛的繁殖率和育成率為70.0%(14/20) 和100%(14/14) ;摩拉、尼里水牛的繁殖率和育成率為86.9%(20/23) 和100%(20/20) 。本地母牛繁殖率低于摩拉和尼里水牛。究其原因?yàn)楸镜啬概Ｒ靶陨写?，在懷孕初期奔跑以及部分母牛懷雙胎，又未能滿足其雙胎發(fā)育對(duì)營(yíng)養(yǎng)的供給而造成流產(chǎn)。19 頭受胎本地母牛中有6 頭流產(chǎn)，流產(chǎn)率為31.6%，其中有3 頭為流產(chǎn)雙胎。17 頭本所長(zhǎng)期飼養(yǎng)的摩拉和尼里水牛，無(wú)論懷雙胎或單胎，均未發(fā)生流產(chǎn)，流產(chǎn)率為0，其原因?yàn)槟湍崂锼＝?jīng)過(guò)長(zhǎng)期的圈養(yǎng)馴化，野性得到了改變，懷孕初期奔跑減少。另外，摩拉和尼里水牛個(gè)體比本地水牛個(gè)體壯大，能承受雙胎對(duì)子宮和腹腔的壓力。

2.4 不同水牛后代的發(fā)育情況

本地水牛與胚胎移植摩雜、尼雜一代水牛從初生至12月齡體尺比較。從表4 和表5可以看出，利用摩拉水牛和尼里水牛的凍精分別和本地水牛卵母細(xì)胞進(jìn)行體外受精成胚，并行胚胎移植后，其后代在保持母牛原有優(yōu)勢(shì)的基礎(chǔ)上，生長(zhǎng)發(fā)育速度顯著地高于本地同齡牛，與文獻(xiàn)［5］報(bào)道相似。表4表明，摩雜一代公、母牛周歲的平均體重為264.2 kg和238.96 kg; 尼雜一代公、母周歲的平均體重為256.18 kg和239.97 kg，均較本地公、母牛周歲的平均體重172.93 kg和157.76 kg有顯著提高。表5 表明，摩雜一代公、母牛和尼雜一代公、母牛在初生、6月齡和12月齡3 個(gè)時(shí)期的體高、體斜長(zhǎng)、胸圍和管圍都比本地水牛在這3 個(gè)時(shí)期有顯著提高。經(jīng)顯著性分析，尼雜1 代公、母牛和本地公、母牛之間，初生、6月齡和12月齡3 個(gè)時(shí)期的體高差異、體斜長(zhǎng)差異、胸圍差異和管圍差異都極為顯著(P ＜0.01) 。利用摩拉水牛和尼里水牛的凍精改良本地水牛，有非常顯著的改良效果，與文獻(xiàn)［5］報(bào)道相符。

表4 本地水牛與胚胎移植摩雜、里雜1 代水牛初生至12月齡體重比較

表5 本地水牛與胚胎移植摩雜、里雜一代水牛從初生至12月齡體尺比較 /cm

3 討論

我國(guó)引進(jìn)摩拉和尼里水牛并進(jìn)行水牛雜交試驗(yàn)，取得一定的成效［3，4］。但是，利用本地母牛的卵母細(xì)胞與摩拉和尼里水牛凍精進(jìn)行體外受精成胚，行胚胎移植術(shù)并成功生產(chǎn)試管水牛的報(bào)道甚少。本研究應(yīng)用本地母牛的卵母細(xì)胞與摩拉和尼里水牛凍精進(jìn)行體外受精成胚，并進(jìn)行移植，成效顯著。

3.1 摩拉、尼里水牛雜交的改良效果顯著

利用摩拉水牛和尼里水牛凍精分別與本地水牛卵母細(xì)胞進(jìn)行體外受精成胚進(jìn)行移植，結(jié)果表明，雜交水牛生長(zhǎng)速度明顯優(yōu)于本地水牛。本地水牛完全可以利用摩拉水牛和尼里水牛進(jìn)行改良。

3.2 轉(zhuǎn)變飼養(yǎng)方式，加強(qiáng)改良牛的培育

從表4 和表5 的結(jié)果可以看出，雜交水牛生長(zhǎng)發(fā)育比本地水牛好，但是由于其飼養(yǎng)管理水平較純種摩拉水牛和尼里水牛低，雜交水牛的遺傳性能尚未得到充分發(fā)揮。因此，必需轉(zhuǎn)變犢牛、成牛的飼養(yǎng)方法，采用科學(xué)的飼養(yǎng)管理技術(shù)，加強(qiáng)雜交牛的早期培育技術(shù)，充分發(fā)揮其生產(chǎn)潛力［6］。

3.3 雜交改良的經(jīng)濟(jì)效益

摩拉水牛、尼里水牛雜交改良后代和本地水牛在同等的飼養(yǎng)管理?xiàng)l件下，摩拉水牛雜交后代可多增重20.36 ～56.45 kg、尼里水牛雜交改良后代可多增重19.45 ～50.66 kg，可縮短飼養(yǎng)周期，提高出欄率。水牛飼養(yǎng)成本低，發(fā)病率低，其產(chǎn)品綠色環(huán)保; 水牛奶營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高而且沒(méi)有腥膻味，風(fēng)味宜人，消費(fèi)者十分喜愛(ài)，水牛奶在市場(chǎng)上供不應(yīng)求。水牛奶酪深受歐美消費(fèi)者的歡迎，價(jià)格較高，經(jīng)濟(jì)效益十分顯著［6］。

3.4 加強(qiáng)遺傳資源的保護(hù)

雜交水牛具有耐粗飼性能好，抗病力強(qiáng)，母性好，生活能力強(qiáng)，利用年限長(zhǎng)、性情溫順和性成熟較早的特性，是十分寶貴的遺傳資源［7］。

胚胎移植研究方興未艾，技術(shù)漸趨完善，在奶水牛的育種工作中，日益顯示出其意義和生命力。它是畜牧業(yè)繼人工授精之后又一次新的技術(shù)革命，胚胎移植技術(shù)將成為水牛品種改良的一個(gè)有力的手段。

［1］黃右軍，黃芬香，張秀芳，等.水牛卵母細(xì)胞體外受精與早期胚胎發(fā)育的研究［J］.中國(guó)畜牧雜志，2002，38(4) : 10-12.

［2］張秀芳，黃右軍，李忠權(quán)，等.水牛體外受精胚胎的玻璃化冷凍［J］.草食家畜，2003，(1) : 23-25.

［3］廖英才，馬啟文，刀榮祥，等.摩拉水牛凍精改良本地水牛試驗(yàn)研究［J］.中國(guó)草食動(dòng)物，2006，26(5) : 34-36.

［4］趙家才，何華川，王春蘭，等.摩拉水牛改良云南本地水牛的效果研究［J］.中國(guó)牛業(yè)科學(xué)，2007，33(1) : 4-7.

［5］唐呈祥.摩拉水牛改良本地水牛增重效果的調(diào)查［J］.草業(yè)與畜牧2007，7: 49.

［6］趙開(kāi)典，趙家民，王鵬武，等.世界水牛奶業(yè)的開(kāi)發(fā)動(dòng)態(tài)及其對(duì)我們的啟示［J］.黃牛雜志，2004，30(5) : 76-80.

［7］章純熙.中國(guó)水牛業(yè)科技發(fā)展特點(diǎn)和趨向［M］.畜牧獸醫(yī)事業(yè)的發(fā)展和人類的健康-21 世紀(jì)畜牧獸醫(yī)生產(chǎn)和科學(xué)技術(shù)論壇會(huì)文集，1999: 67-79.