胡黎明，曾 玲，申建梅，賓淑英，陸永躍，林進(jìn)添*

(1.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院農(nóng)學(xué)院，廣州 510225;2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)昆蟲生態(tài)研究室，廣州 510642)

桔小實(shí)蠅Bactrocera dorsalis(Hendel)，屬雙翅目Diptera害蟲，其在國(guó)內(nèi)分布廣泛、寄主范圍廣，可危害40多科250多種水果和蔬菜 (梁廣勤等，1993;鄧志聲，2001;李志紅等，2001;肖樞等，2001;梁廣勤等，2003)。桔小實(shí)蠅主要的危害方式是其雌蟲將卵產(chǎn)于果皮下，孵化后的幼蟲蛀食果肉，造成爛果、落果，為害相當(dāng)嚴(yán)重 (林進(jìn)添等，2004;許瑞德，2009)。目前對(duì)桔小實(shí)蠅的防治主要采取化學(xué)防治為主，但由于化學(xué)農(nóng)藥的頻繁使用，某些地區(qū)桔小實(shí)蠅已對(duì)有機(jī)磷殺蟲劑、擬除蟲菊酯和阿維菌素等農(nóng)藥產(chǎn)生了嚴(yán)重的抗藥性 (Hsu and Feng，2000;章玉蘋等，2007)，使其防治更加困難。誘殺桔小實(shí)蠅是一種安全有效的防治措施，但目前主要使用的甲基丁香酚引誘劑卻不能引誘雌蟲 (施偉等，2003)，這仍將無法控制桔小實(shí)蠅雌蟲的產(chǎn)卵。由桔小實(shí)蠅的危害習(xí)性可知，產(chǎn)卵是桔小實(shí)蠅危害果蔬的主要切入點(diǎn)，有效控制其產(chǎn)卵將是可持續(xù)治理桔小實(shí)蠅危害的重要措施。因此，尋找桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵驅(qū)避劑顯得尤為重要。

非寄主植物精油對(duì)昆蟲有產(chǎn)卵驅(qū)避作用，它們可以阻止昆蟲在植物上產(chǎn)卵，從而使植物免遭為害 (張茂新等，2003;黎卓維等，2007)。研究表明，香茅精油對(duì)多種昆蟲具有較強(qiáng)的驅(qū)避效果(徐漢虹和趙善歡，1994;鐘平生，2005;宋湛謙等，2006)，因此本文在室內(nèi)測(cè)定了香茅精油對(duì)桔小實(shí)蠅雌蟲的產(chǎn)卵驅(qū)避作用，并利用氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用 (GC－MS)技術(shù)對(duì)香茅精油的化學(xué)成份進(jìn)行分析，為篩選對(duì)桔小實(shí)蠅雌蟲產(chǎn)卵具有驅(qū)避活性的揮發(fā)性物質(zhì)，開發(fā)桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵驅(qū)避劑提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試蟲源:桔小實(shí)蠅幼蟲采自廣州市楊桃公園，室內(nèi)人工飼料飼養(yǎng)。飼養(yǎng)條件為:溫度25±2℃，相對(duì)濕度60±10%，光周期L∶D=14 h∶10 h。本試驗(yàn)挑選腹部隆起的產(chǎn)卵期雌蟲作為供試蟲源。

香茅精油:試驗(yàn)用香茅精油購(gòu)自廣州國(guó)威芳香科技有限公司，純度95%。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 不同濃度香茅精油對(duì)桔小實(shí)蠅的產(chǎn)卵驅(qū)避作用

用丙酮將香茅精油稀釋至1000、2000、4000、8000和10000 μg/mL等5個(gè)不同質(zhì)量濃度。取1個(gè)成熟、表面光滑的芒果在上述不同質(zhì)量濃度的香茅精油溶液中浸泡5 s后取出，晾干供試，對(duì)照為丙酮處理。分別將對(duì)照和精油處理的芒果懸掛在50 cm×40 cm×50 cm養(yǎng)蟲籠的對(duì)角線位置，放入桔小實(shí)蠅雌、雄蟲各20頭，蜜糖水補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)，設(shè)3個(gè)重復(fù)。24 h后取出果實(shí)，調(diào)查統(tǒng)計(jì)著卵量。試驗(yàn)在溫度25±2℃、光周期14L∶10D、相對(duì)濕度75% ～90%的室內(nèi)條件下進(jìn)行。

1.2.2 香茅精油化學(xué)成分分析

精油成份分析在美國(guó) Thermo Finnigan公司GC—MSTM氣質(zhì)聯(lián)用儀 (型號(hào):TRACE GC—2000)上進(jìn)行。利用計(jì)算機(jī)標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫(kù) (NIST)并輔助以人工識(shí)別確定化合物，以質(zhì)譜離子峰面積百分?jǐn)?shù)表示各成分的相對(duì)含量。

色譜條件:DB－5石英毛細(xì)管柱 (柱長(zhǎng)30 m，內(nèi)徑0.25 mm，膜厚0.25 μm);載氣為He，進(jìn)樣口溫度220℃。柱溫采用程序升溫，初始溫度60℃，保留5 min，然后以5℃/min升溫至120℃，保持5 min，再以5℃/min升溫至200℃，保留5 min;

質(zhì)譜條件:接口溫度220℃，電離方式EI，電子能量70 eV，檢測(cè)器電壓350 V，掃描質(zhì)量范圍35～335 amu。

分析方法:精油樣品未經(jīng)稀釋直接進(jìn)樣，進(jìn)樣量0.2 μL，采取分流進(jìn)樣，分流比為1∶30，流速1 mL/min。

1.2.3 產(chǎn)卵驅(qū)避效果的評(píng)價(jià)方法及數(shù)據(jù)分析

采用產(chǎn)卵驅(qū)避率評(píng)價(jià)香茅精油對(duì)桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵的驅(qū)避作用。計(jì)算公式為:產(chǎn)卵忌避率 (%)=［(C－T)/(C+T)］×100%。式中，C為對(duì)照組卵量，T為處理組卵量。所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用Excel統(tǒng)計(jì)，并采用DPS 8.0軟件進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 香茅精油對(duì)桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵的影響

香茅精油產(chǎn)卵驅(qū)避測(cè)定結(jié)果表明 (表1)，不同濃度的香茅精油處理后，桔小實(shí)蠅雌蟲的產(chǎn)卵量均顯著低于對(duì)照，表明香茅精油對(duì)桔小實(shí)蠅具有顯著的產(chǎn)卵驅(qū)避活性。且隨著香茅精油濃度的不斷提高，雌蟲產(chǎn)卵量逐漸減少，產(chǎn)卵驅(qū)避率逐漸升高，當(dāng)精油濃度為1000 μg/mL時(shí)產(chǎn)卵驅(qū)避率最低，為6.52%;而當(dāng)濃度為10000 μg/mL時(shí)產(chǎn)卵驅(qū)避率最高，為70.06%。

表1 不同濃度香茅精油對(duì)桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵的影響Table1 Influence of different concentration of essential oils on oviposition of Bactrocera dorsalis

2.2 香茅精油的化學(xué)成分分析

應(yīng)用GC－MS對(duì)香茅精油化學(xué)成份進(jìn)行了檢測(cè)。采用相應(yīng)質(zhì)譜圖計(jì)算機(jī)檢索的方法進(jìn)行檢索，并用面積歸一法計(jì)算其相對(duì)含量，將相對(duì)含量大于0.6%的物質(zhì)列于表2。

烯萜類物質(zhì)約占所列物質(zhì)的65.91%，其中香葉醇含量最高，為11.68%，香茅醇次之，含量為8.45%;香茅醛占15%;烯萜類物質(zhì)約占所列物質(zhì)的 30.23%，其中3－蒈烯含量最高，為16.71%，檸檬烯次之，含量為3.26%。從中可以看出含量大于5%的主要化學(xué)物質(zhì)分別為3－蒈烯(16.71%)，香茅醛 (15%)，香葉醇 (11.68%)，香茅醇 (8.45%)等4種物質(zhì)。

表2 香茅精油揮發(fā)性化學(xué)物質(zhì)及其相對(duì)含量Table 2 Volatile chemicals from Cymbopogon nardus and their relative contents

3 結(jié)論與討論

桔小實(shí)蠅主要通過雌蟲將卵產(chǎn)于寄主成熟果實(shí)中，幼蟲在果實(shí)內(nèi)取食、危害。桔小實(shí)蠅的產(chǎn)卵習(xí)性導(dǎo)致了藥劑防治上的困難。因此，控制桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵便成為防治其危害的重要措施。本試驗(yàn)測(cè)定了香茅精油對(duì)桔小實(shí)蠅的產(chǎn)卵驅(qū)避活性，結(jié)果表明隨著精油濃度的遞增，對(duì)桔小實(shí)蠅的產(chǎn)卵驅(qū)避作用也逐步增強(qiáng)，測(cè)試結(jié)果與王玉贊等(2009)的研究結(jié)果一致。香茅精油對(duì)桔小實(shí)蠅的雌蟲具有一定的產(chǎn)卵驅(qū)避作用，說明香茅精油的揮發(fā)性物質(zhì)中可能有驅(qū)避桔小實(shí)蠅雌蟲產(chǎn)卵的特異性化學(xué)物質(zhì)。但不同來源的精油，其主要化學(xué)成分具有一定的差異。例如，董曉敏等 (2009)采用水蒸氣蒸餾法對(duì)廣西的香茅精油分成分分析表明，其主要成分為月桂烯 (15.65%)、橙花醛(31.97%)和檸檬醛 (37.40);而陳集雙等(2000)從非洲引種到杭州的香茅葉水蒸氣蒸餾提取物中主要成分為β－香葉烯 (14.16%)、香葉醛 (35.75%)、橙花醛 (28.70%)。本研究對(duì)香茅精油的分析結(jié)果表明，其中主要成分為3－蒈烯(16.71%)、香茅醇、香茅醛 (15.0%)、香葉醇(11.68%)等成分，香茅精油主要成分之間差異可能是來自于提取方法的不同或取樣品種、取樣時(shí)間不同造成。不同精油來源，其主要成分具有較大的差異，因此對(duì)香茅精油中的單個(gè)成分進(jìn)行產(chǎn)卵趨避活性測(cè)定顯得尤為重要。確定這些化合物對(duì)桔小實(shí)蠅雌蟲具有產(chǎn)卵驅(qū)避活性，將對(duì)開發(fā)新型驅(qū)避劑具有顯著的實(shí)踐意義。本試驗(yàn)從香茅精油中鑒定出的主要化合物中部分物質(zhì)或其類似物質(zhì)已報(bào)道對(duì)昆蟲具有驅(qū)避作用。比如香茅醛、香茅醇和香葉醇為驅(qū)蚊劑主要成分，具有較強(qiáng)驅(qū)蚊效果 (曲金柱等，2005;杜永均等，2007)。苗振旺等 (2004)研究發(fā)現(xiàn)檸檬烯對(duì)紅脂大小蠹Dendroctomus valens具有顯著的驅(qū)避作用。因此，筆者推測(cè)這些物質(zhì)可能是香茅精油驅(qū)避桔小實(shí)蠅雌蟲產(chǎn)卵的主要物質(zhì)。有關(guān)這些化合物單體或混合物對(duì)桔小實(shí)蠅雌蟲的產(chǎn)卵驅(qū)避活性尚在研究中，本文將后續(xù)報(bào)道。

本試驗(yàn)通過初步測(cè)定香茅精油對(duì)桔小實(shí)蠅雌蟲產(chǎn)卵的驅(qū)避活性，并進(jìn)一步通過GC－MS分析香茅精油的化學(xué)成分，以期能設(shè)計(jì)開發(fā)桔小實(shí)蠅產(chǎn)卵驅(qū)避劑來干擾該蟲的產(chǎn)卵行為，這將對(duì)桔小實(shí)蠅的控制具有重要的指導(dǎo)意義。

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