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人乳頭狀瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是一種高度特異性的嗜上皮性病毒，屬雙鏈閉環(huán)的小DNA病毒，它由蛋白衣殼這層外衣和被包裹著的核心構(gòu)成。我國(guó)是食管癌高發(fā)區(qū)，食管癌居我國(guó)癌癥死因的第四位，食管癌的發(fā)生發(fā)展和許多因素有關(guān)系，近年來(lái)HPV感染和食管癌的發(fā)生之間關(guān)系的研究越來(lái)越受到重視。本文通過(guò)免疫組化SP法檢測(cè)HPV和P53在60例食管癌及其癌旁組織中的表達(dá)情況，來(lái)探討HPV感染在食管癌和癌旁組織中的不同及與P53表達(dá)的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 選擇2009年9月至2011年9月河北省衡水市第二人民醫(yī)院病理科存檔食管癌石蠟標(biāo)本60例，常規(guī)4%中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm切片，采用福州邁新生物有限公司的金·多聚賴(lài)氨酸粘附玻片行免疫組化。60例食管癌均為鱗狀細(xì)胞癌，其中有17例發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

1.2 主要試劑 (1)鼠抗人人乳頭狀瘤病毒(廣譜)單克隆抗體，克隆號(hào)BPV-1/1H8+CAMVIR，由上海太陽(yáng)生物技術(shù)有限公司提供;(2)鼠抗人P53蛋白免疫組化單克隆抗體，克隆號(hào)DO-7，由福州邁新生物有限公司提供。

1.3 免疫組化實(shí)驗(yàn) 主要步驟:(1)石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化;(2)檸檬酸鹽抗原修復(fù)液高溫修復(fù);(3)滴加過(guò)氧化物酶阻斷劑;(4)滴加正常非免疫動(dòng)物血清;(5)滴加第一抗體;(6)滴加生物素標(biāo)記的第二抗體;(7)滴加鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶試劑;(8)DAB顯色劑顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹(shù)膠封固。免疫組化均設(shè)有陽(yáng)性對(duì)照(圖1)，結(jié)果判讀采用雙盲法，由兩位中級(jí)以上職稱(chēng)的病理醫(yī)師閱片。

1.4 結(jié)果判斷 HPV和P53陽(yáng)性者細(xì)胞核內(nèi)有棕黃色顆粒沉著，胞質(zhì)胞核同時(shí)著色，僅胞質(zhì)著色或胞質(zhì)、胞核均不著色則判斷為陰性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，兩樣本率比較采用四格表χ2檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 食管癌和癌旁正常上皮中HPV的感染情況 60例食管癌中HPV陽(yáng)性的12例(20.0%)，癌旁正常鱗狀上皮中HPV陽(yáng)性的3例(5.0%)，食管癌和癌旁正常組織陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HPV細(xì)胞核呈棕黃色為陽(yáng)性(圖2～4)。

2.2 食管癌組織中P53的表達(dá)與分布 P53為細(xì)胞核著色(圖5)，60例食管癌中有陽(yáng)性41例(68.3%)，癌旁正常鱗狀上皮基本上不表達(dá)，僅在基底層可出現(xiàn)部分陽(yáng)性(正常鱗狀上皮基底層亦可部分陽(yáng)性)，癌旁不典型增生的鱗狀上皮可呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)(圖6)。

圖1 HPV對(duì)照(外陰 女21歲)(免疫組化×200)

圖2 HPV染色癌組織浸潤(rùn)肌層(免疫組化×100)

圖3 HPV染色癌組織內(nèi)見(jiàn)殘存食管腺(免疫組化 ×100)

圖4 HPV染色 癌細(xì)胞核著色且見(jiàn)角化珠(免疫組化×200)

圖5 P53染色 癌細(xì)胞核著色且見(jiàn)角化珠(免疫組化×200)

圖6 P53染色癌周不典型增生鱗狀上皮陽(yáng)性(免疫組化×100)

2.3 HPV感染和P53表達(dá)之間的關(guān)系 運(yùn)用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，食管癌中HPV感染和P53表達(dá)有一定的相關(guān)性(rs=0.5097，P=0.0000)。見(jiàn)表1。

表1 食管癌中HPV感染與P53表達(dá)之間的關(guān)系 例

3 討論

99%的宮頸癌合并HPV感染［1］。宮頸癌發(fā)病的主要病因就是持續(xù)性的高危型的HPV感染，HPV的E6、E7蛋白是病毒的主要致癌蛋白，它們與細(xì)胞的轉(zhuǎn)化和致癌性有密切關(guān)系，持續(xù)感染高危型的HPV16/18以后，E6、E7蛋白能改變調(diào)控宮頸上皮的正常周期的信號(hào)途徑，使細(xì)胞周期失控而發(fā)生永生化［2］。而HPV感染與食管癌發(fā)生的關(guān)系遠(yuǎn)不如其與宮頸癌關(guān)系那么明確。食管癌的發(fā)生與HPV感染有關(guān)最早是由Syrjanen等［3］于1982年提出來(lái)的，隨后許多學(xué)者也做了相關(guān)的研究，但結(jié)論不一。HPV的檢出率與食管癌的關(guān)系因不同的地區(qū)，不同的標(biāo)本來(lái)源以及不同的檢測(cè)方法而有所差異［4，5］。本文應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)出的食管癌中HPV感染的陽(yáng)性率為 20.0%。

P53蛋白具有特異性的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用，是細(xì)胞生長(zhǎng)周期的負(fù)調(diào)節(jié)因子，它與細(xì)胞周期的調(diào)控、細(xì)胞分化、DNA修復(fù)及細(xì)胞的凋亡有關(guān)。P53基因的突變與人類(lèi)50.0%的腫瘤發(fā)生有關(guān)，它是迄今發(fā)現(xiàn)與人類(lèi)腫瘤相關(guān)性最高的基因［6，7］。本文中突變型P53(免疫組化方法只能檢測(cè)到較穩(wěn)定的突變型的P53蛋白，野生型的P53半衰期短，不易檢測(cè))在食管癌中高表達(dá)(68.3%)，而在癌旁正常鱗狀上皮基本上不表達(dá)，僅在基底層可出現(xiàn)部分陽(yáng)性，癌旁不典型增生的鱗狀上皮可呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)。該結(jié)果說(shuō)明了突變型P53蛋白在食管癌的發(fā)生發(fā)展中可能起了很重要的作用。而文中HPV和P53蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)，則可能說(shuō)明了HPV通過(guò)上調(diào)突變型的P53而起到了致癌的作用。

目前，在世界范圍內(nèi)HPV與食管癌的關(guān)系尚存在一定的爭(zhēng)議，但是不斷完善的新的HPV檢測(cè)技術(shù)推動(dòng)了對(duì)食管癌病因?qū)W的研究。本文的結(jié)果初步顯示了HPV感染與食管癌的發(fā)生有一定的關(guān)系，但最終確定HPV和食管癌的關(guān)系還需要大量的研究工作。進(jìn)一步認(rèn)識(shí)食管癌的發(fā)病機(jī)制及HPV的生物學(xué)特性可以為最終預(yù)防和治療HPV引起的食管癌提供強(qiáng)有力的理論指導(dǎo)。

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