翟 斌 張婷婷

（天年藥業(yè)有限公司?哈爾濱 154800）

HPLC法測(cè)定芪葛降糖膠囊中葛根素含量

翟 斌 張婷婷*

（天年藥業(yè)有限公司?哈爾濱 154800）

目的：建立測(cè)定芪葛降糖膠囊中葛根素含量的方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜條件：色譜柱：大連依利特Hypersil ODS2（5μm，5mm×150mm）；流動(dòng)相：甲醇－水（23:77）；流速：1 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm。結(jié)果：建立的含量測(cè)定方法準(zhǔn)確簡(jiǎn)便，重復(fù)性好。

芪葛降糖膠囊 葛根素 高效液相色譜法

* 哈藥集團(tuán)中藥有限公司·黑龍江 150078

芪葛降糖膠囊是由黃芪、天花粉、葛根等藥味組成，具有滋腎養(yǎng)陰，益氣生津之功效。臨床用于治療多飲、多尿、消瘦、體倦無(wú)力、尿糖及血糖升高之氣陰兩虛型消渴癥。該處方中葛根為君藥，采用高效液相色譜法測(cè)定降糖膠囊中葛根素的含量，作為降糖膠囊的質(zhì)量控制指標(biāo)之一。

1 儀器和試藥

1.1 儀 器

島津SCL-10A高效液相色譜儀，島津SPD-10A紫外檢測(cè)器，浙大智達(dá)N2000工作站，昆山KQ-300DB型超聲儀。

1.2 藥 品

葛根素（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110752-200209），芪葛降糖膠囊自制。

1.3 試 劑

甲醇為色譜純（迪馬公司），乙醇為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：大連依利特Hypersil ODS2（5μm，5mm×150mm）；流動(dòng)相：甲醇－水（23∶77）；流速：1 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm。

2.2 對(duì)照品溶液的配制

精密稱取葛根素對(duì)照品，加入30%乙醇制成每1ml含0.6mg葛根素的溶液，作為對(duì)照品溶液，進(jìn)樣10μl。

2.3 空白試驗(yàn)

按處方去掉葛根配制成陰性樣品，按方法2.4對(duì)樣品進(jìn)行處理，測(cè)定結(jié)果表明在葛根素出峰位置上未見(jiàn)有吸收峰。

2.4 供試品溶液的配制與測(cè)定

精密稱取樣品0.5039g、0.4927g、0.5105g置于具塞錐形瓶中，分別精密加入30%乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40KHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用30%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，進(jìn)樣10μl。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取干燥至恒重的葛根素對(duì)照品10 mg，置50ml容量瓶中，加入適量的30%乙醇超聲振蕩使其溶解，加30%乙醇稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液1、2、3、4、5ml于10ml容量瓶中，用30%乙醇稀釋至刻度，再分別注入高效液相色譜儀各10μl，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=421295.5X-3329.5，r=0.9996，線性范圍0.2－1.0μg，峰面積RSD=1.20%。

2.6 精密度試驗(yàn)

取線性關(guān)系項(xiàng)下0.6mg/ml的葛根素對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣六次，峰面積RSD=0.91%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)下樣品進(jìn)行五次平行試驗(yàn)，分別進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得葛根素的含量為2.3751 mg/粒，RSD=0.14%。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，室溫下放置，在配制后的0、2、4、6、8、24依次測(cè)定，結(jié)果在24小時(shí)內(nèi)的RSD=0.94%。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的同批樣品6份，研細(xì)，精密稱定，分別精密加入葛根素對(duì)照品適量，按供試品制備方法處理，測(cè)定葛根素含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.10 樣品含量的測(cè)定

取三批樣品，按上述方法制備成供試品溶液，每批測(cè)定3次，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1

表2

3 討 論

（1）在進(jìn)行溶劑選擇時(shí)，比較了50%乙醇、30%乙醇，結(jié)果以后者的葛根素提取完全，且分離較好。比較了回流和超聲處理兩種提取方法，結(jié)果表明超聲的提取較完全，且簡(jiǎn)便易行。比較了20、30、40、50、60分鐘不同超聲處理時(shí)間對(duì)提取效果的影響，結(jié)果30分鐘即可提取完全，所以確定超聲處理30分鐘。

（2）色譜條件篩選時(shí)，在流動(dòng)相中曾選擇加入磷酸，試驗(yàn)結(jié)果表明采用甲醇－水系統(tǒng)，葛根素的峰形對(duì)稱，保留時(shí)間適中，分離效果好。

[1] 中國(guó)藥典.一部[S].2010.273.

[2] 林少華，赫玉芳，南敏倫，等.高效液相色譜法測(cè)定降脂減肥顆粒中葛根素含量. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥[J]. 2006,17（2）,205.

（2012-05-18 收稿）