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        淫羊藿對(duì)記憶障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

        2012-03-01 11:01:54王麗娟王慶妍謝梅彬
        關(guān)鍵詞:東莨菪堿拉西生理鹽水

        王麗娟,王慶妍,王 勇,黎 蓉,謝梅彬

        淫羊藿為小檗科多年生草本淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim、箭 葉 淫 羊 藿 Epimedium Sagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim)等干燥地上部分。淫羊藿性味辛、甘、溫,有補(bǔ)腎陽(yáng)、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕等功效,主要含有黃酮類物質(zhì),是安神、健腦、補(bǔ)腎以及治療風(fēng)濕及腦疾病的首選藥材[1-2]。文獻(xiàn)報(bào)道,補(bǔ)陽(yáng)藥鹿茸、右歸丸能顯著增強(qiáng)小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能,對(duì)藥物引起的學(xué)習(xí)記憶障礙有改善作用[3-4]。補(bǔ)陽(yáng)藥淫羊藿具有抗衰老作用[5],而對(duì)學(xué)習(xí)記憶功能的影響未見(jiàn)報(bào)道。

        本實(shí)驗(yàn)以東莨菪堿和乙醇制作學(xué)習(xí)記憶獲得障礙和記憶再現(xiàn)障礙模型,通過(guò)避暗法和迷津法研究炙淫羊藿提取物對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用。

        1 材料

        1.1 動(dòng)物

        昆明種小鼠,體重17g~23g,雌雄兼用,由天津市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(合格證號(hào)為SCXK(津)2005-0001)。

        1.2 主要藥品與試劑

        炙淫羊藿飲片產(chǎn)地河南,購(gòu)于天津老百姓大藥房;吡拉西坦由天津金世制藥有限公司生產(chǎn)(批號(hào)20071027);氫溴酸東莨菪堿由上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn)(批號(hào)061101);無(wú)水乙醇由天津市華東試劑廠生產(chǎn)(批號(hào) 20061124)。

        1.3 主要儀器

        MG-2型迷津刺激器(張家港市生物醫(yī)學(xué)儀器廠),ZH-500型小鼠避暗儀(安徽淮北正華生物儀器有限公司),RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海市亞榮生化儀器廠)。

        2 方法

        2.1 淫羊藿提取物的制備

        將炙淫羊藿生藥干燥后粉碎、稱重,分別加10倍量70%乙醇回流提取3次,每次40min,溫度40℃[6]。合并3次提取液,抽濾并濃縮至0.25g·ml-1并保存于冰箱。使用時(shí)用蒸餾水稀釋至所需濃度。

        2.2 小鼠記憶獲得障礙模型制作及學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)試方法

        2.2.1 迷津法 選健康成年小鼠60只,體重19.8g±2.0g,雌雄各半,隨機(jī)分成5組,每組12只。1組為生理鹽水組,2組為模型組,3組為吡拉西坦組(0.5g·kg-1),4 組為淫羊藿高劑量組(5.0g·kg-1),5 組為淫羊藿低劑量組(3.5g·kg-1)。各組均灌胃給藥,容量為 10ml·kg-1,1組及 2組給等容量生理鹽水,每日1次,連續(xù)14d,于第13天給藥后1h開(kāi)始訓(xùn)練。訓(xùn)練前10min 1組腹腔注射等容量生理鹽水,其余各組小鼠均腹腔注射氫溴酸東莨菪堿(1.5mg·kg-1)。訓(xùn)練時(shí)先將小鼠放于起步區(qū)適應(yīng)2min,然后通電(40V),動(dòng)物受到電擊后直接逃至安全區(qū)為正確反應(yīng),逃至電擊區(qū)為錯(cuò)誤反應(yīng)。如此訓(xùn)練15次,記錄正確反應(yīng)與錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)。24h后進(jìn)行測(cè)試,觀察指標(biāo)及方法同訓(xùn)練時(shí)[7-8]。結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(珋x±s)表示,通過(guò)t檢驗(yàn)比較2組間差異的顯著性。

        2.2.2 避暗法 選健康成年小鼠60只,體重20.0g±1.7g,雌雄各半,隨機(jī)分成5組,分組方法及給藥方法同2.2.1。于第13天給藥后1h開(kāi)始訓(xùn)練,訓(xùn)練前10min 1組腹腔注射生理鹽水,其余各組均腹腔注射氫溴酸東莨菪堿(1.5mg·kg-1)。訓(xùn)練時(shí)先將小鼠放入避暗箱明室內(nèi),小鼠進(jìn)入暗室受到電擊(40V)后逃至明室,此后會(huì)再次進(jìn)入暗室。適應(yīng)3min后將小鼠背向暗室放入明室同時(shí)記時(shí),小鼠進(jìn)入暗室受到電擊視為錯(cuò)誤反應(yīng)。訓(xùn)練5min,記錄小鼠自放入明室至首次進(jìn)入暗室的時(shí)間(潛伏期)、5min內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)及累加遭受電擊的時(shí)間(錯(cuò)誤反應(yīng)時(shí)間)作為學(xué)習(xí)成績(jī)。24h后重新測(cè)試,將小鼠背向暗室放入明室同時(shí)記時(shí),余方法同訓(xùn)練,記錄小鼠首次進(jìn)入暗室的潛伏期、5min內(nèi)錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)及累加遭受電擊的時(shí)間作為記憶成績(jī)[7]。結(jié)果以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差(珋x±s)表示,通過(guò)t檢驗(yàn)比較2組間差異的顯著性。

        2.3 小鼠記憶再現(xiàn)障礙模型制作及學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)試方法

        2.3.1 迷津法 選健康成年小鼠70只,體重20.2g±1.6g,雌雄各半,隨機(jī)分成5組。分組方法及給藥方法同2.2.1。于第13天給藥后1h開(kāi)始訓(xùn)練,24h后進(jìn)行測(cè)試。測(cè)試前15min 1組灌胃生理鹽水,其余各組小鼠均灌胃35%乙醇,容量為10ml·kg-1,造成動(dòng)物記憶再現(xiàn)障礙。測(cè)試方法及數(shù)據(jù)處理方法同2.2.1。

        2.3.2 避暗法 選健康成年小鼠70只,體重20.0g±1.6g,雌雄各半,隨機(jī)分成5組,分組方法及給藥方法同2.2.1。于第13天給藥后1h開(kāi)始訓(xùn)練,訓(xùn)練方法及觀察指標(biāo)同2.2.2,24h后進(jìn)行測(cè)試。測(cè)試前15min 1組灌胃生理鹽水,其余各組小鼠均灌胃35%乙醇,容量為10ml·kg-1,造成動(dòng)物記憶再現(xiàn)障礙,測(cè)試方法及數(shù)據(jù)處理方法同2.2.2。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(珋x±s)表示,通過(guò)t檢驗(yàn)比較2組間差異的顯著性。記憶能力。

        表1 迷津法觀察淫羊藿對(duì)東莨菪堿所致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用(珔x±s,n=12)

        3 結(jié)果

        3.1 淫羊藿對(duì)東莨菪堿致記憶獲得障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

        3.1.1 迷津法 表1顯示,用東莨菪堿致小鼠記憶獲得障礙,采用迷津法訓(xùn)練和測(cè)試小鼠的學(xué)習(xí)

        結(jié)果顯示,東莨菪堿能使小鼠(模型組)的學(xué)習(xí)成績(jī)和記憶成績(jī)明顯降低,與生理鹽水組比較,差異非常顯著(P<0.01)。淫羊藿和吡拉西坦能明顯減少小鼠錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù),改善小鼠由東莨菪堿所致的學(xué)習(xí)及記憶獲得障礙,與模型組比較,差異極顯著(P <0.01)。

        3.1.2 避暗法 表2顯示,用東莨菪堿致小鼠記憶獲得障礙,采用避暗法訓(xùn)練和測(cè)試小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。

        表2 避暗法觀察淫羊藿對(duì)東莨菪堿所致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用(珔x±s,n=12)

        結(jié)果顯示,模型組小鼠的學(xué)習(xí)記憶成績(jī)較生理鹽水組明顯降低(P<0.01),即潛伏期明顯縮短,錯(cuò)誤次數(shù)明顯增多,累加電擊時(shí)間明顯延長(zhǎng);測(cè)試成績(jī)略好于訓(xùn)練成績(jī),但與生理鹽水組比較,各項(xiàng)指標(biāo)差異仍非常顯著(P<0.01)。而淫羊藿和吡拉西坦能明顯延長(zhǎng)小鼠的潛伏期,減少錯(cuò)誤反應(yīng)的次數(shù),縮短累加電擊時(shí)間,與模型組比較各指標(biāo)差異顯著(均P<0.05)。

        學(xué)習(xí)記憶能力的影響(珔x ± s,n=14)

        3.2 淫羊藿對(duì)乙醇所致記憶再現(xiàn)障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

        3.2.1 迷津法 表3顯示,采用迷津法觀察淫羊藿對(duì)乙醇所致的記憶再現(xiàn)障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。

        結(jié)果顯示,35%乙醇能增加小鼠測(cè)試時(shí)錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)。吡拉西坦和淫羊藿均能減輕這種損傷,使學(xué)習(xí)能力有所增強(qiáng),記憶再現(xiàn)障礙得到改善。

        3.2.2 避暗法 表4顯示,采用避暗法觀察淫羊藿對(duì)乙醇所致記憶再現(xiàn)障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。

        結(jié)果顯示,模型組小鼠測(cè)試時(shí)的潛伏期明顯縮短(P<0.01),觸電時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.01),錯(cuò)誤次數(shù)明顯增加(P<0.01)。淫羊藿能明顯延長(zhǎng)小鼠進(jìn)入暗室的潛伏期,減少錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù),縮短遭受電擊的時(shí)間,測(cè)試時(shí)表現(xiàn)更明顯(與模型組比較,均 P<0.05),且作用略優(yōu)于吡拉西坦。

        表4 淫羊藿對(duì)乙醇所致記憶再現(xiàn)障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響(珔x±s,n=14)

        4 討論

        學(xué)習(xí)和記憶是兩個(gè)相互聯(lián)系的神經(jīng)活動(dòng)過(guò)程,是人類認(rèn)識(shí)和感知世界的主要手段。許多疾病,尤其是神經(jīng)系統(tǒng)的病變可導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶功能減退。改善學(xué)習(xí)記憶功能對(duì)于延緩衰老,提高記憶衰退患者的生活質(zhì)量,減輕家庭和社會(huì)的負(fù)擔(dān)無(wú)疑將起到積極的作用。

        學(xué)習(xí)和記憶是一個(gè)極其復(fù)雜的生理生化過(guò)程,其影響因素很多。首先,中樞遞質(zhì)與學(xué)習(xí)記憶活動(dòng)有關(guān),擬膽堿藥可加強(qiáng)記憶活動(dòng),而抗膽堿藥東莨菪堿則能使學(xué)習(xí)記憶功能減退。其次,中樞神經(jīng)系統(tǒng)的基本功能——興奮與抑制是影響學(xué)習(xí)記憶的一個(gè)重要因素。中樞的過(guò)度抑制會(huì)使學(xué)習(xí)記憶能力下降,高濃度乙醇會(huì)作用于大腦及小腦,抑制中樞產(chǎn)生近記憶力喪失、時(shí)空定向力障礙、共濟(jì)失調(diào)等[7]。

        該實(shí)驗(yàn)采用東莨菪堿和乙醇分別造成小鼠學(xué)習(xí)記憶獲得障礙和記憶再現(xiàn)障礙,增加動(dòng)物的錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)及延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間。吡拉西坦是促思維記憶藥,常用于腦血管疾病和神經(jīng)外科手術(shù)后等。實(shí)驗(yàn)中比較了淫羊藿與吡拉西坦對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。結(jié)果表明,淫羊藿對(duì)東莨菪堿及乙醇所致的學(xué)習(xí)及記憶障礙均有明顯的改善作用,其效果與吡拉西坦相近或略佳。淫羊藿改善學(xué)習(xí)記憶能力的作用可能與其活血化瘀和改善腦組織的血液供給有關(guān),其確切作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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