馬 驛，陳均玉，陳欽旭，陳秀眉，彭金菊，李 健，馮寶順，盧國(guó)棟

（廣東海洋大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，廣東 湛江 524088）

禽霍亂又稱禽巴氏桿菌病（Pasteurellosis）、禽出血性敗血癥，是由多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida）引起的禽類的接觸性傳染病。該病在大多數(shù)國(guó)家都有分布，強(qiáng)毒株能使不同年齡的雞感染，發(fā)病率高達(dá)100%，死亡率達(dá)60%以上，是需重點(diǎn)防制的家禽疫病之一［1－3］。目前，治療細(xì)菌性疾病的最常用藥物是抗生素和合成抗菌藥，但具有產(chǎn)生耐藥性、導(dǎo)致藥物殘留等缺點(diǎn)。我國(guó)傳統(tǒng)中藥除可克服前述缺點(diǎn)外，還可增強(qiáng)動(dòng)物免疫力，因此，使用中藥或中藥的有效活性成分，以取代部分高殘留藥物的研究尤為重要［4－6］。長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐及藥理研究表明，中西藥物科學(xué)合理的配伍應(yīng)用能提高療效，降低藥物毒副作用，但中藥的化學(xué)成分和藥理作用十分復(fù)雜，中西藥聯(lián)合使用不當(dāng)，會(huì)降低療效，增加副作用或引起藥源性疾病，嚴(yán)重的甚至危及動(dòng)物生命，需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)觀察中西藥聯(lián)合用藥是否有效。本試驗(yàn)選取體外抑菌效果較好的五倍子、恩諾沙星，以及五倍子與恩諾沙星組成的復(fù)方，通過(guò)給人工感染多殺性巴氏桿菌的雞飼喂含藥飼料后，觀察藥物對(duì)其防治效果，為采用中西藥結(jié)合防治畜禽疾病提供理論依據(jù)和參考。

1 材料與方法

1.1 材料 中藥材五倍子，購(gòu)自湛江市藥材市場(chǎng)。恩諾沙星，含量98.5%，批號(hào)：110131291，浙江國(guó)邦藥業(yè)有限公司。禽巴氏桿菌（C48-3）標(biāo)準(zhǔn)菌株，由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供。40日齡雞公母各半，體重0.8～1.1 kg，試驗(yàn)前在籠中飼養(yǎng)7 d。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)分組 試驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照組、陽(yáng)性感染對(duì)照組、不同藥物試驗(yàn)組，每組24羽雞。Ⅰ組為不感染細(xì)菌陰性對(duì)照組；Ⅱ組為感染細(xì)菌陽(yáng)性對(duì)照組；Ⅲ組為中藥組，飼料中添加五倍子，按雞的體重計(jì)算，預(yù)防組和治療組的每天用藥量均3.125 g／kg（筆者經(jīng)測(cè)定得知：五倍子對(duì)多殺性巴氏桿菌的MIC為3.125 mg／m L［7］）；Ⅳ組為西藥組，飼料中添加恩諾沙星，按雞的體重計(jì)算，預(yù)防組和治療組的每天用藥量分別為5 mg／kg、10 mg／kg（恩諾沙星用量參照陳杖榴編獸醫(yī)藥理學(xué)［8］）；Ⅴ組為中西藥結(jié)合組，飼料中添加五倍子和恩諾沙星，預(yù)防組的每天用藥量按體重計(jì)算，為五倍子3.125 g／kg、恩諾沙星5 mg／kg，治療組的每天用藥量為五倍子3.125 g／kg、恩諾沙星10 mg／kg。

1.2.2 飼料配制及投喂方法 將五倍子加工成粉末狀，粉末加水煮沸30 min后，將藥渣藥水與飼料混合拌勻，恩諾沙星藥粉與飼料混合拌勻。

1.2.3 多殺性巴氏桿菌菌液的制備及人工感染試驗(yàn) 將多殺性巴氏桿菌接種于1%豬血清營(yíng)養(yǎng)肉湯中，37℃恒溫培養(yǎng)8～12 h，采用平板計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)，用肉湯稀釋至所需濃度。通過(guò)預(yù)試驗(yàn)篩選能引起雞死亡的多殺性巴氏桿菌的數(shù)量，每羽皮下注射濃度為104CFU／m L的細(xì)菌混懸液0.1 m L，陰性對(duì)照組每羽皮下注射生理鹽水0.1 m L。治療試驗(yàn)：攻毒當(dāng)天投喂添加藥物的飼料，連續(xù)給藥5 d，停藥后觀察10 d；預(yù)防試驗(yàn)：連續(xù)投喂添加藥物的飼料5 d后注射細(xì)菌，自攻毒之日開(kāi)始連續(xù)觀察10 d。統(tǒng)計(jì)各組死亡雞數(shù)量，按常規(guī)檢驗(yàn)方法剖檢死雞，分離體液及組織中細(xì)菌鏡檢，確定死亡原因。

1.2.4 防治效果評(píng)價(jià) 用保護(hù)率進(jìn)行評(píng)價(jià)，保護(hù)率（%）＝（陽(yáng)性感染對(duì)照組的死亡數(shù)一藥物試驗(yàn)組死亡數(shù)）／陽(yáng)性感染對(duì)照組的死亡數(shù)×100。

2 結(jié)果

2.1 病死雞的剖檢結(jié)果及細(xì)菌形態(tài)特征 雞攻毒后食欲減退，精神沉郁，兩翅下垂，羽毛松亂。呼吸困難，口鼻有黏液性、漿液性分泌物流出。體溫升高，雞冠、肉髯暗紅色或青紫色，排灰白或黃綠色稀糞。攻毒20 h后開(kāi)始出現(xiàn)死亡，第2天至第5天死亡數(shù)較多，第8天后未見(jiàn)死亡。剖檢病死雞可見(jiàn)鼻腔內(nèi)有黏液，皮下組織、腹腔脂肪、腸系膜有大小不等的出血點(diǎn)，胸腔、腹腔和氣囊有纖維素性灰白色滲出物，腸黏膜充血，有出血性病灶，十二指腸最嚴(yán)重。心外膜上有很多出血點(diǎn)，心包內(nèi)有淡黃色液體，并混有纖維素。肺充血、水腫，脾臟腫大，肝臟腫大、質(zhì)變脆，表面布滿針尖大小的白色壞死點(diǎn)。分離體液及組織中細(xì)菌進(jìn)行培養(yǎng)鑒定，在鮮血培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，長(zhǎng)成淡灰白色、閃光的露珠狀小菌落，且無(wú)溶血現(xiàn)象。鏡檢為革蘭陰性、兩端鈍圓、兩極濃染，以單個(gè)和成雙排列為主的球桿狀或短桿狀細(xì)菌，與試驗(yàn)前感染的多殺性巴氏桿菌的形態(tài)特征相同。

2.2 不同藥物對(duì)雞巴氏桿菌病的治療效果 治療試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1，攻毒后陽(yáng)性對(duì)照組雞死亡18羽，存活率僅為25%。投喂藥物組的雞死亡率與陽(yáng)性對(duì)照組比較有所降低；五倍子、恩諾沙星，以及五倍子與恩諾沙星聯(lián)合對(duì)雞的保護(hù)率分別為0%、33.33%和11.11%，恩諾沙星組的保護(hù)率最高，對(duì)雞巴氏桿菌病有一定的治療效果。

表1 不同藥物對(duì)雞巴氏桿菌病的治療效果

2.3 不同藥物對(duì)雞巴氏桿菌病的預(yù)防效果 預(yù)防試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，攻毒后陽(yáng)性對(duì)照組雞死亡20羽，存活率僅為16.67%。投喂藥物組的雞死亡率與陽(yáng)性對(duì)照組比較均降低，其中恩諾沙星組差異顯著（P＜0.05），投喂藥物組的存活率均高于陽(yáng)性對(duì)照組，五倍子、恩諾沙星，以及五倍子與恩諾沙星聯(lián)合對(duì)雞的的保護(hù)率分別為40%、70%和40%，恩諾沙星組的保護(hù)率最高，對(duì)雞巴氏桿菌病的預(yù)防效果較好。

表2 不同藥物對(duì)雞巴氏桿菌病的預(yù)防效果

3 討論

3.1 中西藥結(jié)合對(duì)雞巴氏桿菌病的防治效果 通過(guò)試驗(yàn)表明，五倍子的體外抑菌效果較好，對(duì)多殺性巴氏桿菌的 MIC為3.125 mg／m L，恩諾沙星對(duì)巴氏桿菌的MIC為1μg／m L，中西藥聯(lián)合對(duì)巴氏桿菌的體外抑制增強(qiáng)，五倍子與恩諾沙星聯(lián)合的MIC為0.391 mg／m L （0.25μg／m L），即五倍子用量為單藥的1／8，恩諾沙星用量為單藥的1／4便能抑制巴氏桿菌［7］。將五倍子按照3.125 g／kg·d拌料給雞飼喂后，對(duì)雞巴氏桿菌病治療和預(yù)防的保護(hù)率分別為0%和40%；恩諾沙星對(duì)雞巴氏桿菌病的治療及預(yù)防效果較好，保護(hù)率分別為33.33%和70%；五倍子與恩諾沙星聯(lián)合對(duì)雞巴氏桿菌病的治療及預(yù)防效果不理想，保護(hù)率分別為11.11%和40%。盡管中西藥聯(lián)合體外抑菌效果顯著，對(duì)動(dòng)物疾病的防治效果不一定明顯，這可能與人工感染多殺性巴氏桿菌的雞發(fā)病過(guò)快，不及充分發(fā)揮藥物的作用有一定關(guān)系。中藥、中藥復(fù)方，以及中西藥聯(lián)合的藥用效果是不能僅僅以藥物的MIC和MBC來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)，中藥的MIC和MBC測(cè)定結(jié)果對(duì)指導(dǎo)臨床用藥劑量有一定的參考價(jià)值，但體外抗菌試驗(yàn)只能說(shuō)明所試中藥與細(xì)菌直接接觸所產(chǎn)生的影響，而對(duì)被細(xì)菌感染患病的動(dòng)物的治療效果，還須進(jìn)行動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)才能證實(shí)。另外，天然中藥對(duì)動(dòng)物還具有一定的營(yíng)養(yǎng)和整體調(diào)節(jié)作用，以及中藥對(duì)動(dòng)物機(jī)體免疫機(jī)能的影響等，都是評(píng)價(jià)中藥防治效果的重要指標(biāo)［9］。

3.2 中西藥結(jié)合在畜禽疾病防治中的作用 抗菌藥對(duì)于多種細(xì)菌傳染性疾病有良好的療效，收效快、作用強(qiáng)、使用方便，對(duì)危急病癥更顯優(yōu)越性，但抗菌藥具有毒副作用，易繼發(fā)雙重感染，使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性或造成藥物殘留危害人體健康。西藥注重袪除病邪，消除病因；中藥強(qiáng)調(diào)整體，重在提高機(jī)體的抗病能力，調(diào)整、平衡機(jī)體的各種功能，應(yīng)用安全可靠，中西藥相互取長(zhǎng)補(bǔ)短，提高臨床療效，其效果已得到普遍認(rèn)可［5－6，10］。中西藥聯(lián)合對(duì)禽巴氏桿菌病的治療和預(yù)防效果較好，周勇用氯霉素與自擬“清瘟散”、“蒼苓散”結(jié)合，對(duì)鵝巴氏桿菌病療效顯著［2］。裴立峰采用雙氟沙星、氧氟沙星和增效磺胺等口服，或注射鏈霉素等，結(jié)合使用中藥復(fù)方，對(duì)禽霍亂的治愈率達(dá)91.5%［3］。由黃連、黃柏等中藥和鹽酸環(huán)丙沙星組成的中西藥復(fù)方制劑（炎瘟清片），對(duì)肉鴿巴氏桿菌病的治愈率達(dá)到96.6%［11］。這充分證明中西藥聯(lián)合標(biāo)本兼治的優(yōu)越性，體現(xiàn)了中醫(yī)所說(shuō)“藥有個(gè)性之特長(zhǎng)，方有合群之妙用”的精妙之處。但無(wú)論是單味藥還是聯(lián)合用藥，其抑菌的具體成分、作用方式和機(jī)理如何，仍需要今后作進(jìn)一步的深入研究。

［1］曾振靈，劉建新，陳杖榴，等.三種獸用氟喹諾酮類藥物對(duì)人工誘發(fā)雞霍亂的療效比較［J］.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，21（2）：82-84.

［2］周勇.中西藥結(jié)合治療鵝巴氏桿菌病［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2006，25（4）：43-44.

［3］裴立峰.中西醫(yī)結(jié)合治療禽霍亂［J］.養(yǎng)殖技術(shù)顧問(wèn)，2010，4：70.

［4］曾春蘭，鐘振國(guó).中藥抗菌作用的研究進(jìn)展［J］.廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，9（1）：51-53.

［5］方俊，盧向陽(yáng)，邱業(yè)先，等.中草藥飼料添加劑的研究進(jìn)展、制約因素及對(duì)策［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2004，31（9）：6-8.

［6］溫偉，呂金良，高振偉，等.淺談現(xiàn)代中獸藥的發(fā)展前景［J］.四川畜牧獸醫(yī)，2009，12：10-12.

［7］馬驛，陳欽旭，陳秀眉，等.鵝巴氏桿菌病病原分離鑒定及中西藥聯(lián)合抑菌試驗(yàn)［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2011，30（2）：46-48.

［8］陳杖榴.獸醫(yī)藥理學(xué)［M］.3版.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2009.

［9］周邦靖.常用中藥的抗菌作用及其測(cè)定方法［M］.重慶：教學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社重慶分社，1987.

［10］逯春玲，張書(shū)超.談中西藥聯(lián)用的作用機(jī)制［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，7（12）：192-193.

［11］李軍成，路彩霞，馮國(guó)庭.炎瘟清對(duì)肉鴿巴氏桿菌病的治療［J］.科技信息：學(xué)術(shù)版，2008，36：386.