王茜

(四川省彭州市人民醫(yī)院檢驗科，四川 彭州 611930)

國家醫(yī)學(xué)實驗室認(rèn)可委員會及美國病理學(xué)家協(xié)會(CAP)要求，實驗室在引入新的檢測系統(tǒng)時，必須對檢測系統(tǒng)的分析性能進行評價。因此本研究對我院新購置的SYSMEX公司的CA-1500全自動血凝儀進行了較全面的性能評價。該儀器在進行不同凝血項目檢測時，有凝固法、發(fā)色底物法、免疫比濁法等原理。故在對此進行評價時，覆蓋了應(yīng)用不同的分析原理進行檢測的項目。在應(yīng)用凝固法的分析項目中，除了評價其測定凝血常規(guī)項目血漿凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、纖維蛋白原(FIB)含量、凝血酶時間(TT)等的分析性能外，還以凝血因子FⅧ活性作為代表對其它測定凝血因子的性能進行了評價。又分別以抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)及D-二聚體(D-dimer)為代表，評價了該儀器在應(yīng)用發(fā)色底物法及免疫比濁法等原理時的分析性能。

1 材料與方法

1.1 試劑 由DADE BEHRING公司生產(chǎn)。包括正常水平定值質(zhì)控物(Control Plasma N)，批號: 502796;異常水平定值質(zhì)控(Control Plasma P)，批號:512622;標(biāo)準(zhǔn)人類血漿(SHP)，批號:502504;DDimer定標(biāo)血漿(D-Dimer Standard Plasma)，批號: 535815;PT測定試劑:(Thtomborel S)，批號: 545148;APTT測定試劑(ACTIN)，批號:537154; Cacl2，批號:536887;FIB測定試劑:Thrombin Reagent，批號:540261;TT測定試劑:Test Thrombin和配套緩沖液，批號:544256;D-Dimer PLUS和配套緩沖液，批號:37261;測定試劑Antithrombin III(A)，批號:37216。

1.2 檢測方法 應(yīng)用CA-1500全自動血凝儀進行PT、APTT、FIB、TT及血漿凝血因子測定。原理為凝固法(散射光比濁法加百分比終點法)，即將血液凝固過程中的混濁度變化轉(zhuǎn)換成散射光的變化后進行檢測;進行AT-Ⅲ測定的原理為發(fā)色底物法;進行DDimer、vWF測定的原理為免疫比濁法。

1.3 分析性能的評價

1.3.1 精密度 根據(jù)NCCLS EP15-A文件要求，用二個水平的質(zhì)控血漿分別進行批內(nèi)和日間重復(fù)性試驗，重復(fù)測定20次以及每天測定1次，連續(xù)測定20天。分別計算批內(nèi)和日間的均值()、標(biāo)準(zhǔn)差(SD)和變異系數(shù)(CV)［1，2］。

1.3.2 準(zhǔn)確度 使用兩個水平的定值質(zhì)控品分別測定各項目，測得結(jié)果必須符合試劑廠家提供的定值范圍。

1.3.3 線性評價 根據(jù)NCCLS EP6-P要求，選取一份接近預(yù)期上限的高值樣本(H)，分別按100%、80%、60%、40%、20%的比例進行稀釋，每個稀釋度重復(fù)測定3次，計算均值(偏離應(yīng)小于10%)，將測定均值與理論值作比較，計算y=ax+b，驗證線性范圍［2］。要求:α值在1±0.05范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù) r≥0.99。

1.3.4 檢測下限 連續(xù)測定蒸餾水樣本(0水平) 10次，計算CV。

1.3.5 攜帶污染率 ①異常樣本對正常樣本的污染:將正常樣本置樣本架1和3位置，異常樣本置于2位置，每個樣本分別測定3次，記錄結(jié)果:N1、N2、N3、A1、A2、A3、N4、N5、N6。異常樣本對正常樣本的污染率(K1)=［N4-Mean(N1，N2，N3)］/Mean (N1，N2，N3)。②正常樣本對異常樣本的污染:將異常樣本置樣本架1和3位置，正常樣本置于2位置，每個樣本分別測定3次，記錄結(jié)果:A1、A2、A3、N1、N2、N3、A4、A5、A6。正常樣本對異常樣本的污染率(K2)=［A4-Mean(A1，A2，A3)］/Mean(A1，A2，A3)。

1.3.6 干擾試驗 將干擾物質(zhì)(血紅蛋白、甘油三酯和直接膽紅素)加入正?；虍惓Ｑ獫{中作為實驗樣本，而將標(biāo)本稀釋液(OVB)加入正?；虍惓Ｑ獫{中作為對照樣本。所有樣本均重復(fù)測定兩次，兩次測定結(jié)果偏差在10%以內(nèi)的數(shù)據(jù)可以用于計算影響度(%)=(實驗樣本檢測值均值-對照樣本檢測值均值)/對照樣本檢測值均值×100。

2 結(jié)果

2.1 精密度 各項檢測的批內(nèi)精密度均小于1/ 4TEa，日間精密度均小于1/3TEa。符合美國臨床實驗室改進修改法案'88(CLIA'88)可接受范圍，結(jié)果見表1。

表1 CA-1500全自動血凝儀精密度評價結(jié)果

2.2 準(zhǔn)確度 實驗的各項檢測的準(zhǔn)確度均符合 CLIA'88可接受范圍，結(jié)果見表2。

表2 CA-1500全自動血凝儀準(zhǔn)確度

2.3 線性評價 FIB、FⅧ:C、AT-Ⅲ、D-Dimer的線性范圍分別在(0.60～5.96)g/L、22.5%～225.4%、15. 9%～158.8%及(241～2405)μg/L，線性良好，符合CLIA'88可接受范圍，結(jié)果見表3及圖1。

表3 CA-1500全自動血凝儀的線性

圖1 CA-1500全自動血凝儀的線性評價a:FIB;b:FⅧ:C;c:AT-Ⅲ;d:D-Dimer

2.4 變異系數(shù)及檢測下限 FIB、FⅧ:C、AT-Ⅲ、DDimer的 CV 分 別 為 6.45%、6.79%、0.44%、4.04%，均小于20%，以上項目的檢測下限均為0，符合CLIA'88可接受范圍。

2.5 攜帶污染率 PT、APTT、FIB、FⅧ:C、AT-Ⅲ的k1均小于儀器標(biāo)定的范圍10%。PT、APTT、FIB、FⅧ:C、AT-Ⅲ的k2均小于儀器標(biāo)定的范圍10%。異常樣本對正常樣本的污染及正常樣本對異常樣本的污染結(jié)果見表4。

表4 CA-1500全自動血凝儀的攜帶污染率

2.6 干擾試驗 結(jié)果見表5～表7。在血紅蛋白濃度小于6.0 g/L、甘油三酯濃度小于5.640 mmol/L或直接膽紅素濃度小于374.0 μmol/L時，對PT、APTT、FIB三項測定的干擾均小于 10%，符合CLIA'88可接受范圍

表5 血紅蛋白對CA-1500全自動血凝儀測定結(jié)果的干擾

表6 甘油三酯對CA-1500全自動血凝儀測定結(jié)果的干擾

表7 直接膽紅素對CA-1500全自動血凝儀測定結(jié)果的干擾

2 討論

本研究中，PT、APTT、TT、Fib、FⅧ:C、AT-Ⅲ及D-dimer檢測的批內(nèi)和日間精密度均滿足CLIA'88要求，即批內(nèi)精密度小于1/4TEa，而日間精密度小于1/3TEa。受質(zhì)控品的限制，未進行異常水平TT的日間精密度評價，而異常水平TT的批內(nèi)精密度評價選用的樣本為混合血漿，而非質(zhì)控品。

由于受凝血檢測缺乏參考血漿的限制，無法用參考血漿評價本儀器的準(zhǔn)確度。而PT、APTT和TT等項目是對時間進行測定，也無法應(yīng)用回收試驗來評價儀器的準(zhǔn)確度。故本研究中選擇定值質(zhì)控品來評價其準(zhǔn)確度，只能反映本儀器的檢測結(jié)果是否符合在SYSMEX CA系列儀器上使用DADE BEHRING試劑進行檢測的要求。

因PT、APTT、TT等項目的測定結(jié)果為時間，不能進行線性評價。本研究僅對FIB、FⅧ:C、AT-Ⅲ、D-Dimer做了線性評價。FIB、FⅧ:C、AT-Ⅲ、D-Dimer分別在(0.60～5.96)g/L，22.5% ～225.4%、15.9%～158.8%及(241～2405)μg/L的線性良好。同時，因該儀器具有自動稀釋功能，在進行FIB的檢測時，可以增加或減少稀釋倍數(shù)，因此可認(rèn)為FIB的線性范圍可達到0.3～11.92 g/L，覆蓋了有臨床意義的濃度范圍。

因為高濃度樣本對低濃度樣本的污染更大，所以很多研究在分析攜帶污染率時，只分析高值標(biāo)本對低值標(biāo)本的污染。而考慮到凝血檢測異常可能是因為參與凝血物質(zhì)濃度低或者抗凝物質(zhì)的存在，本研究設(shè)計了兩個方面的污染率，即異常標(biāo)本對正常標(biāo)本的污染和正常標(biāo)本對異常標(biāo)本的污染。

本研究中，在血紅蛋白濃度小于6.0 g/L、甘油三酯濃度小于5.640mmol/L或直接膽紅素濃度小于374μmol/L時，對PT、APTT、FIB的干擾均小于10%。可認(rèn)為這些濃度的干擾物質(zhì)對測定結(jié)果無影響，該儀器具有一定的抗干擾能力。但本儀器測定時采用的是散射光比濁法，由于方法學(xué)本身的局限性，更高濃度的干擾物存在時，會對結(jié)果有較大影響。對于嚴(yán)重溶血標(biāo)本，除了考慮血紅蛋白對測定結(jié)果影響之外，還應(yīng)考慮到凝血因子的激活或消耗對結(jié)果的影響，應(yīng)重新采血;直接膽紅素濃度大于374μmol/L的標(biāo)本在我院臨床標(biāo)本中所占比例＜0.1%，其抗直接膽紅素干擾的能力可滿足臨床需求;甘油三酯濃度大于5.640 mmol/L的標(biāo)本在我院臨床標(biāo)本中所占比例約為1%，對高甘油三酯標(biāo)本應(yīng)采用高速離心后分離血漿的方法，以期消除干擾。

綜上所述，SYSMEX公司的CA-1500全自動血凝儀具備良好的分析性能，符合臨床要求，可以應(yīng)用于患者標(biāo)本的檢測。

［1］National committee for clinical laboratory standards.Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices:Tentative guideline［S］.2nd edition.Document EP 52A.Wayne，Pa NCCLS，1999.

［2］Clinical laboratory improvements amendments of 1988 final rule.Laboratory requirements［J］.Federal Register Februaty，1992，57: 7002-7288.

［3］National committee for clinical laboratory standards.Evaluation of the linearity of quantitative analytical methods:Proposed guideline［S］.Document EP 6-P.Wayne，Pa NCCLS，1986.