柴明青 許菲菲 朱俏玲

HPLC法分析注射用阿洛西林鈉中的高聚物

柴明青 許菲菲 朱俏玲

應(yīng)用Sephadex G-10色譜柱，以磷酸鹽緩沖液為流動相，設(shè)置UV檢測器波長為254nm，建立注射用阿洛西林鈉中高聚物分析的高效液相色譜法。高聚物濃度在0.006～4mg/L內(nèi)呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9999。該方法操作簡單、檢出限低、準(zhǔn)確度高。

HPLC;注射用阿洛西林鈉;高聚物

抗生素是臨床用量最大和較易發(fā)生不良反應(yīng)的藥物。其中最常見的一類不良反應(yīng)就是過敏反應(yīng)。注射用阿洛西林鈉為無菌凍干粉針劑，因其抗菌譜廣、抗菌活力強(qiáng)而在臨床上廣泛使用。多年來的研究證明［1，2］，在β-內(nèi)酰胺類抗生素所致的速發(fā)型過敏反應(yīng)中，藥物分子本身只是半抗原，藥物中存在的高分子聚合物才是引發(fā)速發(fā)型過敏反應(yīng)的真正過敏原，因此嚴(yán)格控制抗生素中高分子聚合物的含量有著重要的意義。

目前國內(nèi)外對β-內(nèi)酰胺類抗生素中高聚物的分析研究主要有離子交換色譜法、反相高效液相色譜法、凝膠過濾色譜法。離子交換色譜法分離時間長，操作繁瑣。反相高效液相色譜法因不易確定高聚物的準(zhǔn)確位置而難以準(zhǔn)確測定含量。凝膠色譜法因標(biāo)準(zhǔn)品很難完全同質(zhì)而難以推廣。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑 Agilent1100型高效液相色譜儀，上海安捷倫儀器有限公司。藍(lán)色葡聚糖2000，西安沃爾森生物技術(shù)有限公司。磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉，分析純，上海國藥試劑有限公司。水為蒸餾水。

1.2 溶液的制備

1.2.1 藍(lán)色葡聚糖2000溶液 精密稱取10mg藍(lán)色葡聚糖2000，置10m l容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。

1.2.2 供試品溶液 精密稱取10mg阿洛西林鈉，置5ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。

1.2.3 對照品溶液 精密稱取10mg阿洛西林鈉對照品，置10ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。

1.3 檢測條件的確定

1.3.1 色譜柱 根據(jù)β-內(nèi)酰胺類抗生素和其高分子雜質(zhì)分子量的特點選用Sephadex G-10作為高分子雜質(zhì)分離色譜系統(tǒng)的凝膠介質(zhì)，色譜柱內(nèi)徑為1cm，長為30cm的玻璃柱作為色譜柱。

1.3.2 流動相 分別選用pH7.0的0.1mol/L、0.05mol/L和0.025mol/L磷酸鹽緩沖液分別作為流動相，結(jié)果0.05mol/L磷酸鹽緩沖液作為流動相時，檢測靈敏度較0.1mol/L和0.025mol/L磷酸鹽緩沖液大，故選用pH7.0的0.05mol/L磷酸鹽緩沖液作為流動相。

1.3.3 分離度試驗 稱取阿洛西林鈉約400mg置10m l量瓶中，用0.04mg/m l的藍(lán)葡溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣100μl，用流動相進(jìn)行測定，記錄色譜圖進(jìn)行分析，得高聚物峰的含量為0.229%，計算分離度為3.6。

1.3.4 理論板數(shù)與拖尾因子 應(yīng)用上述的色譜條件進(jìn)行試驗，理論板數(shù)為792、773，拖尾因子為1.37、1.16。理論板數(shù)及拖尾因子均符合要求。

2 結(jié)果

2.1 線性及檢測限 按1.2.3分別配制成0.006-4mg/L的對照品溶液進(jìn)行分析，溶液濃度與測得的峰面積呈良好的線性關(guān)系，回歸方程 Y=0.0095X+0.0143，相關(guān)系數(shù) r=0.9999。將對照品溶液進(jìn)行稀釋，阿洛西林鈉中高聚物的檢測限(S/N=3)為0.9μg/m l。

2.2 阿洛西林對照溶液F值測定的重復(fù)性 參照阿洛西林對照溶液測定方法測定，F(xiàn)值為阿洛西林對照溶液濃度(mg/m l)與峰面積的比值，重復(fù)測定F值，日內(nèi)RSD在1.2% ～4.4%之間;日間平均F值為104.2618×10-3，RSD為2.8%(n=3)。

2.3 樣品取樣量與聚合物測定結(jié)果的相關(guān)性考察 分別稱取為約200mg，300mg和400mg樣品置3個10ml量瓶中，按樣品測定方法測定，結(jié)果表明，供試品溶液在20.48mg/ml～39.22mg/ml范圍內(nèi)，溶液濃度與聚合物峰面積呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=1。

2.4 重現(xiàn)性 每隔一周對同一批樣品進(jìn)行分析，得結(jié)果見表1。

表1 重現(xiàn)性試驗結(jié)果

2.5 不同廠家和公司不同時期生產(chǎn)的注射用阿洛西林鈉同時期檢測聚合物結(jié)果，測試結(jié)果見圖1。

圖1 不同廠家和公司不同時期生產(chǎn)的注射用阿洛西林鈉同時期檢測聚合物結(jié)果

3 小結(jié)

HPLC法分析注射用阿洛西林鈉中的高聚物，該方法測試滿足中國藥典對高聚物檢測的有關(guān)要求，該方法快速簡單、靈敏度高、準(zhǔn)確度高，可用于注射用阿洛西林鈉的質(zhì)量控制。

［1］ JING SH，HU C Q．Advacement of allergic responses on β-lactam antibiotics．Chin JNew Drugs，1994，3(4):38-41．

［2］ ZHANG J，ZHU JP．Sephadex chromatographic system for determination of polymer in piperacillin sodium/tazobactam sodium for injection．Chin JMod App;Pharm，2010，27(5):452-454．

Determ ination of high polymers in azlocillin sodium for injection by HPLC

CHAIMing-qing，XU Fei-fei，ZHU Qiao-ling．Kang’enbei Biopharmaceutical Co Ltd in Jinhua，Jinhua 322000，China

A Sephadex G-10colum was used with the phosphate buffer solution and the UV detection wavelength was 254nm．Develop HPLC testmethod for the determination of high polymers in azlocillin sodium for injection．The calibration curve was linear in the range of 0.006～4mg/L．Themethod is simple and reliable．

HPLC;Azlocillin sodium for injection;High polymers

322000浙江金華康恩貝生物制藥有限公司(柴明青);義烏出入境檢驗檢疫局(許菲菲 朱俏玲)

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