趙云霞 龔曉萌 崔芳芹 劉德純 承澤農(nóng) (蚌埠醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，安徽 蚌埠 233030)

乳腺癌中PTEN、Rb、C-myc的異常表達(dá)及其臨床意義

趙云霞 龔曉萌1崔芳芹 劉德純1承澤農(nóng)1(蚌埠醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，安徽 蚌埠 233030)

目的探討PTEN、Rb、C-myc蛋白異常表達(dá)在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及其臨床意義。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法檢測150例乳腺癌和30例乳腺良性增生性病變組織中PTEN、Rb、C-myc蛋白的表達(dá);結(jié)合臨床病理指標(biāo)進(jìn)行分析。結(jié)果乳腺癌組織中PTEN、Rb、C-myc蛋白表達(dá)與良性增生性病變組織有顯著差異(P＜0.05)。PTEN蛋白的失表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、雌激素受體(ER)失表達(dá)有關(guān)(P＜0.05)。Rb蛋白在乳腺癌Ⅲ級中失表達(dá)率較高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。C-myc蛋白的過表達(dá)與組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理類型有關(guān)(P＜0.05)。PTEN蛋白失表達(dá)與Rb蛋白失表達(dá)呈正相關(guān)，與C-myc過表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。結(jié)論P(yáng)TEN、Rb、C-myc共同參與了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，對乳腺癌的預(yù)后判斷有重要的參考價值。

乳腺癌;乳腺良性增生性病變;PTEN;Rb;C-myc

乳腺癌相關(guān)基因在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用尚不明確，本研究旨在探討PTEN、Rb和C-myc在乳腺癌中的表達(dá)狀況，并與其他較為確定的預(yù)后指標(biāo)相比較，結(jié)合臨床病理資料進(jìn)行分析評價，為腫瘤的預(yù)后判斷和防治提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對象 標(biāo)本來源于蚌埠醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室及蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科，2004年至2006年手術(shù)切除乳腺組織存檔蠟塊標(biāo)本，其中乳腺癌組織標(biāo)本150例，所有患者均接受手術(shù)治療，術(shù)前未接受過化療、內(nèi)分泌或放射治療，經(jīng)病理確診，且外檢已做過雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)檢測。年齡30～80歲，平均年齡47.45歲(中位數(shù)49歲)，＜50歲者81例，≥50歲者69例。浸潤性導(dǎo)管癌(非特殊性)121例，浸潤性小葉癌14例，導(dǎo)管原位癌13例，髓樣癌2例。將浸潤性導(dǎo)管癌121例按照WHO提供的方法進(jìn)行分級，其中Ⅰ級16例;Ⅱ級84例;Ⅲ級21例。按長徑計(jì)算，最小者0.8 cm，最大者15 cm。按TNM分類、腫瘤大小分為三組，T1期腫瘤最大直

徑≤2.0 cm者57例;T2期腫瘤直徑為2.0～5.0 cm者82例;T3期腫瘤最大直徑＞5.0 cm者11例。本組病例中含有腋窩淋巴結(jié)清掃的病例95例，其中有58例發(fā)生轉(zhuǎn)移，未轉(zhuǎn)移者37例。ER、PR檢測結(jié)果以免疫組織化學(xué)(SP法)結(jié)果為準(zhǔn)。ER陽性61例;PR陽性54例。標(biāo)本用10%甲醛固定，石蠟包埋，常規(guī)制片。選擇乳腺良性增生性病變標(biāo)本作為對照。

1.2 方法和試劑 采用免疫組織化學(xué)S-P法，分別PTEN、Rb和C-myc標(biāo)記。鼠抗人PTEN單克隆抗體(克隆號:17A)，鼠抗人Rb單克隆抗體(克隆系:1F8)，鼠抗人C-myc單克隆抗體(克隆系:9E/11)(均為即用型)及相關(guān)試劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。嚴(yán)格按照免疫組織化學(xué)SP實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行，用已知陽性切片作陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷 PTEN蛋白陽性表達(dá)定位于腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)，Rb蛋白陽性表達(dá)定位于腫瘤細(xì)胞的胞核，C-myc蛋白陽性表達(dá)定位于腫瘤細(xì)胞的胞核和胞質(zhì)，以胞質(zhì)或胞核出現(xiàn)明顯的黃色或棕黃色顆粒視為陽性著色。判定標(biāo)準(zhǔn):以染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞比例評定陽性表達(dá)。細(xì)胞胞質(zhì)或胞核出現(xiàn)定位明確、染色明顯的棕黃/棕褐色顆粒為陽性細(xì)胞，其比例＞10%為陽性病例。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，采用χ2檢驗(yàn)、Fisher精確檢驗(yàn)和相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 PTEN、Rb、C-myc蛋白在乳腺癌與乳腺良性增生性病變組織中的表達(dá) PTEN蛋白在乳腺癌中失表達(dá)率為65.2%，高于對照組的13.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Rb蛋白在乳腺癌中陰性表達(dá)率為71例(47.3%)，明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。C-myc在乳腺癌中陽性表達(dá)率為56.7%，與對照組的陽性表達(dá)率(16.7%)有顯著差異(P＜0.05)。見圖1。

圖1 乳腺癌中PTEN、Rb、C-myc陽性表達(dá)比較(SP，×400)

2.2 乳腺癌中PTEN、Rb、C-myc蛋白表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 PTEN蛋白表達(dá)缺失與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER表達(dá)相關(guān)(P＜0.05)。Rb蛋白表達(dá)與各臨床病理指標(biāo)均不具有相關(guān)性(P＞0.05)，只是在組織學(xué)分級中其表達(dá)缺失率隨分級增高而增高。C-myc蛋白表達(dá)與乳腺癌組織學(xué)分級、組織學(xué)類型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有明顯關(guān)系(P＜0.05)。見表1。(r=0.18，P＜0.05)。因此，PTEN蛋白失表達(dá)與Rb蛋白失表達(dá)呈正相關(guān)，與C-myc過表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。

表1 PTEN、Rb、C-m yc蛋白陽性表達(dá)與乳腺癌臨床病理的關(guān)系(n)

2.3 乳腺癌中PTEN、Rb和C-myc蛋白表達(dá)的相關(guān)性 在PTEN蛋白表達(dá)陽性病例中Rb蛋白表達(dá)陽性率為63.4%，高于PTEN蛋白表達(dá)陰性病例中Rb蛋白的陽性表達(dá)率45.9%(r=0.19，P＜0.05);PTEN蛋白表達(dá)陽性病例中，C-myc蛋白陽性表達(dá)率為44.2%，低于PTEN蛋白表達(dá)陰性病例中的62.2%

3 討論

PTEN通過其磷酸酶活性調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，從而調(diào)控細(xì)胞周期，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞生長。當(dāng)PTEN基因發(fā)生突變后，其異常產(chǎn)物不具有上述功能，而失去了對細(xì)胞生長的負(fù)調(diào)控作用。Sano等〔1〕首先運(yùn)用卡-邁兩氏存活點(diǎn)檢測發(fā)現(xiàn)PTEN蛋白表達(dá)高低與病人的病理分級及預(yù)后有關(guān)。病人預(yù)后越差，惡性程度越高，PTEN蛋白表達(dá)水平越低。本研究提示PTEN基因突變使腫瘤更具有侵襲和轉(zhuǎn)移能力，更容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。腫瘤ER陽性表達(dá)是乳腺癌對激素治療敏感，預(yù)后較好的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)。PTEN蛋白失表達(dá)時往往伴有ER表達(dá)缺失，提示PTEN基因改變是乳腺癌預(yù)后較差的指標(biāo)，與相關(guān)報道〔2〕相符合。因此，我們認(rèn)為PTEN在乳腺癌發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用，它是乳腺癌預(yù)后差的重要指標(biāo)之一。聯(lián)合檢測PTEN與其他預(yù)后指標(biāo)，對預(yù)測乳腺癌預(yù)后更有指導(dǎo)意義。

Rb基因是最早被克隆的腫瘤抑制基因，也是細(xì)胞周期中校驗(yàn)點(diǎn)的關(guān)鍵因子〔3〕。如果Rb基因失活，則Rb蛋白的表達(dá)就會出現(xiàn)異常，細(xì)胞就可能持續(xù)地處于增殖期，并可能由此惡變。國內(nèi)外關(guān)于Rb與乳腺癌關(guān)系的研究罕有報道。研究顯示，乳腺癌中Rb蛋白的表達(dá)下調(diào)或失表達(dá)率為17% ～46%〔4〕。本實(shí)驗(yàn)提示Rb基因的改變在高級別乳腺癌發(fā)展中具有重要作用，或在低級別乳腺癌向高級別乳腺癌過渡中發(fā)揮其作用，與Dublin〔4〕結(jié)果一致，但需要更大樣本的研究證實(shí)。

C-myc基因是發(fā)現(xiàn)較早的原癌基因之一。其編碼蛋白具有轉(zhuǎn)錄因子活性，有促進(jìn)細(xì)胞增殖、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、抑制細(xì)胞分化、參與細(xì)胞凋亡的作用。關(guān)于C-myc與臨床病理指標(biāo)關(guān)系的報道很少且差異較大，但均提示C-myc基因擴(kuò)增在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中具有重要的作用〔5，6〕。本研究顯示，P62 C-myc的表達(dá)與乳腺癌分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理類型相關(guān)。組織學(xué)分級高低、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、腫瘤是否浸潤是腫瘤惡性程度及預(yù)后的判斷指標(biāo)。由此我們認(rèn)為C-myc過表達(dá)與乳腺癌預(yù)后不良密切相關(guān)，且P62C-myc表達(dá)不受ER及PR狀況的影響，提示P62C-myc蛋白表達(dá)可能是乳腺癌重要的獨(dú)立預(yù)后標(biāo)記因子。

本研究還發(fā)現(xiàn)PTEN的表達(dá)分別與Rb和C-myc具有相關(guān)關(guān)系，提示三者在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中存在某種內(nèi)在關(guān)聯(lián)，PTEN與Rb對細(xì)胞周期同起負(fù)調(diào)控作用，乳腺癌中二者失活具有協(xié)同作用，共同促進(jìn)腫瘤發(fā)展，PTEN的失活同樣使C-myc發(fā)生基因擴(kuò)增的可能性加大，乳腺癌的患病概率增加。具體機(jī)制還需進(jìn)一步深入研究。

1 Sano T，Lin H，Chen X，etal.Differential expression ofMMAC1/PTEN in glioblastoma multiforme:relationship to localization and prognosis〔J〕.Cancer Res，1999;59(8):1820-24.

2 Yuan HZ.The gene expression of the tumor suppressor PTEN in the breast cancer organizes〔J〕.JPrac Cancer，2002;17(1):37-9.

3 Yamasaki L.Role of the Rb tumor suppressor in cancer〔J〕.Cancer Treat Res，2003;115(6):209-39.

4 Dublin EA，Patel NK，Gillet CE，etal.Retinoblastoma and p16 proteins in mammary carcinoma:their relationship to cyclinD1 and histopathological parameters〔J〕.Cancer，1998;79(1):71-5.

5 Deming SL，Nass SJ，Dickson RB，et al.C-myc amplification in breast cancer:a meta-analysis of its occurrence and prognostic relevance〔J〕.Cancer，2000;83(12):1688-95.

6 Rummukainen JK，Salminen T，Lundin J，et al.Amplification of c-myc oncogene by chromogenic and fluorescence in situ hybridization in archival breast cancer tissue array samples〔J〕.Lab Invest，2001;81(11):1545-51.

Aberrant expression of PTEN，Rb and C-myc in breast cancer and its clinical significance

ZHAO Yun-Xia，GONG Xiao-M eng，CUIFang-Qin，et al.
Department of Physiopathology，Bengbu M edical College，Bengbu 233030，Anhui，China

ObjectiveTo investigate the roles of aberrant expressions of PTEN，Rb and C-myc in developmentof breast cancer and its clinical significance.MethodsImmunohistochemical(S-Pmethod)was used for detecting proteins of PTEN，Rb and C-myc in 150 cases of breast cancer and 30 cases of benign proliferative lesions.The outcomewas analyzed togetherwith their relation to clinical pathological parameters.ResultsThere were significant differences in expressions of PTEN，Rb and C-myc proteins between breast cancer and benign proliferative lesions(P＜0.05).Loss of expression of PTEN protein was related with lymph nodesmetastasis and the loss of expression of ER(P＜0.05).The loss of expression rate of Rb protein was higher in breast cancer gradeⅢ，but there was no statistical difference(P＞0.05).Overexpression of C-myc protein was related with histological grade，lymph nodemetastasis and pathological type(P ＜0.05).There was a positive correlation between PTEN and Rb，a negative correlation between PTEN and C-myc(P＜0.05).ConclusionsPTEN，Rb and C-myc co-participate in the development of breast cancer.They have important reference value to judge the prognosis of breast cancer.

Breast cancer;Breast benign proliferative lesion;PTEN;Rb;C-myc

R737.9

A

1005-9202(2012)12-2531-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.12.041

安徽省教育廳高校青年教師基金項(xiàng)目(2007 jq1133)

1 蚌埠醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室

趙云霞(1977-)，女，碩士，講師，主要從事腫瘤病理研究。

〔2011-07-25收稿 2011-09-16修回〕

(編輯 曹夢園)