魯 杰 (天津市第五中心醫(yī)院耳鼻喉科，天津 300450)

喉鱗狀細(xì)胞癌患者癌組織Kindlin-2與整合素β表達(dá)的關(guān)系

魯 杰 (天津市第五中心醫(yī)院耳鼻喉科，天津 300450)

目的觀察喉鱗狀細(xì)胞癌組織中Kindlin-2與整合素β蛋白的表達(dá)及其臨床意義，以指導(dǎo)預(yù)后判斷及臨床治療。方法收集85例喉鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本為觀察組，60例正常喉黏膜為對(duì)照組，應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)兩組Kindlin-2與整合素β蛋白表達(dá)。結(jié)果喉鱗狀細(xì)胞癌Kindlin-2與整合素β表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于正常喉黏膜組織，Kindlin-2與整合素β表達(dá)與TNM分期、Ki67表達(dá)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，喉鱗狀細(xì)胞癌Kindlin-2與整合素β表達(dá)與患者生存密切相關(guān)。結(jié)論Kindlin-2與整合素β在喉鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，聯(lián)合檢測(cè)Kindlin-2與整合素β可能與喉鱗狀細(xì)胞癌預(yù)后密切相關(guān)。

喉鱗狀細(xì)胞癌;Kindlin-2;整合素β;免疫組織化學(xué);生存分析

喉鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生與發(fā)展是多因素綜合作用的結(jié)果。相關(guān)研究表明細(xì)胞黏附對(duì)腫瘤進(jìn)展有重要作用。Kindlin-2是紐蛋白(黏著斑蛋白)家族重要成員，在腫瘤中高表達(dá)〔1〕。整合素β是黏附分子，通過(guò)介導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白、細(xì)胞之間的黏附和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，在腫瘤進(jìn)展中起重要作用〔2〕。本實(shí)驗(yàn)探討喉鱗狀細(xì)胞癌組織中Kindlin-2與整合素β表達(dá)的關(guān)系，關(guān)注其對(duì)判斷預(yù)后的價(jià)值，以期為腫瘤生物學(xué)行為研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 2005年1月至2007年2月我院存檔的喉鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本蠟塊為觀察組，納入均符合WHO關(guān)于喉鱗狀細(xì)胞癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)病理主任醫(yī)師再次確診。均排除術(shù)前放、化療患者，共85例，男49例，女36例，年齡47～79(平均59.0)歲，臨床隨訪資料完整。同時(shí)選取同期病理證實(shí)為正常喉黏膜組織60例為對(duì)照組，男33例，女27例，年齡48～78(平均59.2)歲。兩組一般臨床特征無(wú)明顯差別，具有可比性。

1.2 Kindlin-2與整合素β檢測(cè) 應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)SP法，Kindlin-2與整合素β試劑的濃縮液均購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)公司，按不同配比預(yù)實(shí)驗(yàn)，選擇最佳顯色比例。具體步驟:石蠟切片脫蠟至水后，3%H2O2去離子水孵育10 min;抗原修復(fù)后分別滴加Kindlin-2或整合素β蛋白，4℃過(guò)夜，PBS沖洗3次;滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫孵育20 min，PBS沖洗3次;滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素，室溫孵育20～30 min，PBS沖洗3次;DAB顯色;自來(lái)水充分沖洗、復(fù)染、脫水、透明、封片。操作全過(guò)程由同一病理技師完成，以避免人為誤差，嚴(yán)格質(zhì)控。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) Kindlin-2與整合素β蛋白陽(yáng)性染色主要位于細(xì)胞質(zhì)，以細(xì)胞質(zhì)有棕黃色顆粒為陽(yáng)性，在每張切片中均仔細(xì)選擇10個(gè)腫瘤區(qū)的高倍鏡視野，根據(jù)染色部位和染色細(xì)胞所占百分比進(jìn)行綜合評(píng)分。不著色0分，著色淡者1分，著色深者2分;著色細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞百分率＜5%為0分，5% ～25%1分，26% ～50%2分，＞50%3分。將每張觀察的切片著色強(qiáng)度得分和著色細(xì)胞百分率得分相乘，為其最后得分。0～1分陰性(－)，≥2分陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行定性資料的χ2檢驗(yàn)，并進(jìn)行生存分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組Kindlin-2與整合素β表達(dá) 觀察組Kindlin-2〔50(58.8%)〕與整合素β表達(dá)陽(yáng)性率〔55(64.7%)〕明顯高于對(duì)照組〔16(26.7%)、19(31.7%)〕(χ2=14.666 1，P=0.000 1;χ2=15.346 1，P ＜0.000 1)。

2.2 觀察組中不同臨床特征中Kindlin-2與整合素β表達(dá)觀察組Kindlin-2與整合素β表達(dá)與TNM分期、Ki67表達(dá)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。見表1。

表1 觀察組不同臨床病理特征患者Kindlin-2與整合素β表達(dá)〔n(%)〕

2.3 喉鱗狀細(xì)胞癌組織中Kindlin-2和整合素β表達(dá)與生存的關(guān)系 隨訪6～60個(gè)月，經(jīng)生存分析顯示，喉鱗狀細(xì)胞癌中Kindlin-2(χ2=12.21，P=0.001 2)和整合素 β 表達(dá)(χ2=14.11，P＜0.000 1)與預(yù)后相關(guān)，即Kindlin-2與整合素β蛋白表達(dá)陽(yáng)性組患者預(yù)后差。

3 討論

喉鱗狀細(xì)胞癌是頭頸部最常見的惡性腫瘤之一，鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞無(wú)限制地惡性增殖、大量新生血管形成和向周圍侵襲性生長(zhǎng)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是其主要的惡性生物學(xué)行為。近來(lái)人們關(guān)注基因和蛋白表達(dá)對(duì)喉鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的影響，發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞黏附問(wèn)題是影響腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的重要因素〔3〕，與其相關(guān)的有整合素家族〔4〕。整合素是一類由α、β二個(gè)亞基組成的跨膜糖蛋白，每個(gè)亞單位都有細(xì)胞外片段，跨膜片段和細(xì)胞內(nèi)片段，胞外段介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間黏附，還可介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞間黏附。整合素β1可以構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)的絕大多數(shù)受體，是細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間不可缺少的黏附因子。Kindlin屬紐蛋白家族，均與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞遷移、黏附及增殖有關(guān)，其中以Kindlin-2功能最廣泛，其可能與整合素β1具有內(nèi)在的共同作用位點(diǎn)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示腫瘤發(fā)生過(guò)程中，Kindlin-2與整合素β在腫瘤進(jìn)展中具有重要促進(jìn)作用。由于Ki67表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期均與患者預(yù)后相關(guān)，因此聯(lián)合檢測(cè)二者對(duì)患者預(yù)后判斷可能有重要價(jià)值，生存分析結(jié)論直接證實(shí)了此觀點(diǎn)。Kindlin-2作為胞內(nèi)接頭蛋白，影響整合素β胞內(nèi)段，從深層次調(diào)節(jié)整合素活性。Kindlin-2還可促進(jìn)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞分化和進(jìn)展，促進(jìn)上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化。Kindlin-2還可以通過(guò)黏附分子作為中間分子，促進(jìn)腫瘤血管生成〔5〕。但是有研究也顯示Kindlin作用于整合素的過(guò)程也不是很穩(wěn)定〔6〕，因此有時(shí)表現(xiàn)出的相關(guān)性并不是十分密切，其主要受細(xì)胞內(nèi)Kindlin表達(dá)水平及活化態(tài)表達(dá)量的影響。

1 Shen Z，Ye Y，Dong L，et al.Kindlin-2:a novel adhesion protein related to tumor invasion，lymph nodemetastasis，and patient outcome in gastric cancer〔J〕.Am JSurg，2012;203(2):222-9.

2 Sin S，Bonin F，Petit V，et al.Role of the focal adhesion protein kindlin-1 in breast cancer growth and lung metastasis〔J〕.J Natl Cancer Inst，2011;103(17):1323-37.

3 劉愛東，劉士生，許志萍，等.E-Cadherin在胃癌中的表達(dá)及意義〔J〕.廣東醫(yī)學(xué)，2007;28(11):1806-7.

4 黃建松，陶嵐嵐，周玉蘭，等.Kindlin與整合素的活化〔J〕.中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào)，2010;32(4):649-55.

5 Gong X，An Z，Wang Y，et al.Kindlin-2 controls sensitivity of prostate cancer cells to cisplatin-induced cell death〔J〕.Cancer Lett，2010;299(1):54-62.

6 Meves A，Stremmel C，Gottschalk K，et al.The Kindlin protein family:new members to the club of focaladhesion proteins〔J〕.Trends Cell Biol，2009;19(10):504-13.

R739.65

A

1005-9202(2012)12-2492-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.12.021

魯 杰(1976-)，女，主治醫(yī)師，主要從事耳鼻喉疾病研究。

〔2011-12-19收稿 2012-03-22修回〕

(編輯 袁左鳴/張 慧)