許潑實 周瑞錦 趙 靜 (河南省人民醫(yī)院檢驗科，河南 鄭州 450003)

microRNA在老年前列腺癌患者組織和血清中表達的變化及其相關性

許潑實 周瑞錦1趙 靜 (河南省人民醫(yī)院檢驗科，河南 鄭州 450003)

目的探討microRNA(miRNAs)在老年前列腺癌患者組織和血清中的表達及其相關性。方法選取2008年1月至2009年1月該院收治的100例老年前列腺癌患者為研究對象，利用熒光定量技術系統(tǒng)分析所有患者組織和血清中miRNA(miR-143、let-7a、let-7b、miR-141、miR-202、miR-210)表達的差異和相關性。結(jié)果miRNA中l(wèi)et-7a、let-7b和miR-143在前列腺癌組織中含量低于癌旁正常組織(P＜0.05);而miR-141、miR-202和miR-210在前列腺癌組織中含量高于癌旁組織(P＜0.05)。miRNA中l(wèi)et-7a、let-7b和miR-143在前列腺癌組織中表達水平隨分化程度降低而降低(P＜0.05);而miR-141、miR-202和miR-210在前列腺癌組織的表達水平隨分化程度降低而升高(P＜0.05)。miRNA在前列腺癌患者血清中的含量低于在癌組織中的表達，但變化趨勢一致。miRNA在前列腺癌患者癌組織和血清中表達具有顯著的相關性，相關系數(shù)為R2=0.843(P＜0.05)。結(jié)論miRNA在前列腺癌患者血清中的含量低于在癌組織中的表達，但變化趨勢一致，可反映前列腺癌組織的病理特點，可作為前列腺癌早期診斷治療的生物學標記物。

microRNA;老年人前列腺癌;血清;分子標記物

有研究報道，microRNA(miRNAs)是前列腺癌早期診斷及預后評估的重要分子標記物〔1〕。目前對miRNA在老年前列腺癌患者中表達的試驗主要集中于腫瘤組織樣本中，而以血清作為樣本的研究較少。本文擬比較miRNA在老年前列腺癌患者組織和血清中表達的差異和相關性，以期為miRNA的早期診斷及方便取材提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2008年1月至2009年1月我院收治的100例老年前列腺癌患者為研究對象，并選取同時期我院體檢中心12例相同年齡段的男性健康體檢者為對照。病例組患者年齡65～82歲，平均(73.4±2.1)歲;對照組患者年齡62～78歲，平均(69.4±1.8)歲。病例組患者手術前未經(jīng)放療、化療或內(nèi)分泌治療，術后均獲得完整的臨床及病理資料。病例組所有患者術后病理診斷組織學類型均為腺癌;根據(jù)WHO(2004年)前列腺惡性腫瘤組織學分級標準分級:高分化3例，中分化42例，低分化55例。組織檢查以患者手術標本的癌旁正常組織為對照，血清檢查以健康體檢者為對照。病例組和對照組年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

1.2 檢測方法 采用基于DNA染料法的熒光定量PCR技術檢測患者前列腺組織和血清中miRNA(miR-143、let-7a、let-7b、miR-141、miR-202、miR-210)的表達〔2〕。

將定量的組織或血清RNA樣本5μl，70°C變性5 min，冰上放置3 min，再依次加入 RNase抑制劑、dNTP混合物、MMuLV緩沖液以及M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶，之后分別加入miRNA(miR-143、let-7a、let-7b、miR-141、miR-202、miR-210)特異性莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物，混勻后離心進行PCR反應。在95℃條件下反應15 s，60℃條件下反應1 min，按照此提交進行40個循環(huán)。設立重復實驗(每個樣本重復3次)和陰性對照實驗(不加模板cDNA，以水代替)。

1.3 主要試劑 動物組織RNA提取試劑盒和總RNA提取試劑盒購自Norgen公司。反轉(zhuǎn)錄試劑及特異性莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物購自廣州市銳博生物科技有限公司。熒光定量PCR檢測試劑盒購自羅氏應用科學部。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用統(tǒng)計學軟件SPSS17.0進行數(shù)據(jù)處理，計量數(shù)據(jù)以±s表示，進行t檢驗和方差分析，應用Pearson相關系數(shù)分析。

2 結(jié)果

2.1 miRNA在前列腺癌組織中的表達 miRNA中l(wèi)et-7a、let-7b和miR-143在前列腺癌組織中含量低于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);而miR-141、miR-202和miR-210在前列腺癌組織中高表達，含量高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 前列腺癌組織中miRNA表達與組織學分級的相關性

miRNA中l(wèi)et-7a、let-7b和miR-143在前列腺癌組織中表達隨分化程度降低而降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);而miR-141、miR-202和miR-210在前列腺癌組織的表達隨分化程度降低而升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表2。

2.3 前列腺癌患者與健康體檢者血清中miRNA含量的比較miRNA中l(wèi)et-7a、let-7b和miR-143在前列腺癌患者血清中含量低于健康體檢者，比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);而

miR-141、miR-202和miR-183在前列腺癌患者血清中含量高于健康體檢者，比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表3。

2.4 前列腺癌患者血清中miRNA表達與組織學分級的相關性 miRNA中l(wèi)et-7a、let-7b和miR-143在前列腺癌患者血清中的含量隨分化程度降低而降低，差異有統(tǒng)計學意義 (P＜0.05);而miR-141、miR-202和miR-183在前列腺癌患者血清中的含量隨分化程度降低而升高，差異有統(tǒng)計學意義 (P＜0.05)。見表4。

表1 m iRNA在前列腺癌組織中的表達(±s，fmol/L，n=100)

表1 m iRNA在前列腺癌組織中的表達(±s，fmol/L，n=100)

與癌旁組織比較:1)P＜0.05

組別 let-7a let-7b miR-141 miR-143 miR-202 miR-210癌組織 1 121.5±110.31) 1 015.3±104.91) 2 036.3±261.51) 1 275.3±149.21) 2 316.7±214.61) 2 237.2±267.11)6.2±281.3 1 004.5±139.8 1 132.5±147.2癌旁組織 1 921.2±213.1 2 106.4±341.7 1 391.2±121.4 2 14

表2 前列腺癌組織中m iRNA表達與組織學分級的相關性(±s，fmol/L)

表2 前列腺癌組織中m iRNA表達與組織學分級的相關性(±s，fmol/L)

組別 n let-7a let-7b miR-141 miR-143 miR-202 miR-210高分化 3 1 351.1±210.3 1 235.3±124.5 1 425.8±138.4 1 325.3±249.2 1 329.3±127.1 1 027.4±121.3中分化 42 1 121.4±131.4 1 036.4±111.7 1 791.5±171.2 1 126.2±181.3 1 704.5±147.8 1 532.5±177.2低分化 55 1 439.4±100.2 991.2±106.8 2 235.3±221.5 1 024.6±112.7 2 456.7±224.6 2 133.2±217.1

表3 m iRNA在前列腺癌患者與健康體檢者血清中含量比較(±s，fmol/L)

表3 m iRNA在前列腺癌患者與健康體檢者血清中含量比較(±s，fmol/L)

與健康對照組比較:1)P＜0.05

組別 n let-7a let-7b miR-141 miR-143 miR-202 miR-210病例組 100 1 061.5±112.31) 955.3±104.91) 1 936.3±241.51) 1 065.3±149.21) 2 116.7±209.61) 2 137.2±217.11)健康對照組 12 1 524.2±212.1 1 436.4±241.7 1 191.2±121.4 1 946.2±251.3 984.5±139.8 932.5±127.2

表4 前列腺癌患者血清中m iRNA表達與組織學分級的相關性(±s，fmol/L)

表4 前列腺癌患者血清中m iRNA表達與組織學分級的相關性(±s，fmol/L)

組別 n let-7a let-7b miR-141 miR-143 miR-202 miR-210高分化 3 1 131.1±176.3 1 131.3±114.5 1 125.8±128.4 1 125.3±142.2 1 129.3±117.1 1 007.4±131.3中分化 42 1 021.4±121.4 998.4±101.7 1 391.5±141.2 1 016.2±119.3 1 504.5±137.8 1 432.5±147.2低分化 55 929.4±99.2 971.2±96.8 2 075.3±161.5 994.6±92.7 2 256.7±214.6 2 033.2±187.1

2.5 miRNA在前列腺癌患者腫瘤組織和血清中表達的相關性分析 上述結(jié)果顯示，miRNA在前列腺癌患者血清中的含量低于在癌組織中的表達，但變化趨勢一致。應用Pearson相關系數(shù)發(fā)現(xiàn)，miRNA在前列腺癌患者癌組織和血清中的表達具有顯著的相關性，相關系數(shù)為R2=0.843(P＜0.05)。

3 討論

miRNAs是一類內(nèi)生、小分子非編碼的調(diào)控RNAs，在血清和血漿中與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，具有異常高的穩(wěn)定性〔3〕，這為循環(huán)miRNAs作為生物標記物進行檢測提供了可能。已發(fā)現(xiàn)腫瘤患者的循環(huán)核酸中存在源自腫瘤的miRNAs分子，且具有組織特異性〔4〕，不同的腫瘤有不同的miRNAs表達譜，提示循環(huán)miRNAs分子可能成為無創(chuàng)診斷癌癥的一個有效方法，一個理想的基于血液的腫瘤標志物。

目前的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)數(shù)十種在前列腺癌中異常表達或具有特異性的miRNAs，而且在早期與晚期、激素依賴與非依賴前列腺癌組織中有不同的表達譜〔5〕。在腫瘤中特異性高表達的miRNAs稱為“癌基因”，而較良性增生或正常組織降低的miRNAs稱為“抑癌基因”。前列腺癌相關癌基因有miR-184、202、210、296、370、498、503 等，前列腺癌相關抑癌基因有 let-7a、7b，miR-16、23 a、23 b、26 a、125 a、125 b、141、143、145、221、222等〔6〕。筆者通過眾多文獻篩選出與前列腺癌密切相關的6個miRNA作為研究對象，檢測它們在前列腺癌患者癌組織和血清中的含量，探討把檢測血清miRNA含量作為前列腺癌患者早期診治指標的可行性。

外周靜脈血血清中miRNA的含量能否代表具有特異性的癌組織中miRNA的表達目前尚未達成共識〔7〕。前列腺癌患者血清中miRNA含量較組織中低，但具有較高穩(wěn)定性，取材方便，有利于早期診斷。有研究報道，miRNA的表達與前列腺癌組織分化程度具有一定相關性〔8〕。本資料結(jié)果說明miRNA表達水平可提示前列腺癌的分化程度，而且miRNA在血清中的表達水平可反映前列腺癌的病理特點，進而證明血清miRNA含量檢測可作為前列腺癌的生物學指標，為乳腺癌早期篩查和診斷提供依據(jù)。筆者通過設計反轉(zhuǎn)錄莖環(huán)引物和特異性的PCR引物，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄和cDNA擴增，經(jīng)熒光定量PCR技術檢測miRNA表達，分析miRNA的特異性表達。比傳統(tǒng)的蛋白分子標記方法更加有效。

綜上所述，miRNA在前列腺癌患者血清中的含量低于在癌組織中的表達，但變化趨勢一致，可作為前列腺癌早期診斷治療的生物學標記物。

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R737

A

1005-9202(2012)12-2482-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.12.016

1 河南省人民醫(yī)院泌尿外科

許潑實(1969-)，男，碩士，副主任技師，主要從事免疫檢驗醫(yī)學研究。

〔2011-09-10收稿 2011-10-30修回〕

(編輯 徐 杰)