于 洋 姜 濤 姜立剛 劉立峰，3 (北華大學(xué)校醫(yī)院，吉林 吉林 303)

長期大量飲酒對人體各個系統(tǒng)的危害較嚴(yán)重，如神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、造血系統(tǒng)，而且酒精中毒對人們的精神健康及心理健康也有很大的傷害。目前在臨床上診斷酒精中毒的方法均局限在依靠臨床表現(xiàn)及心理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，缺乏實驗室檢查標(biāo)準(zhǔn)。ET-1主要由血管內(nèi)皮細胞分泌，是一種最強有力的縮血管物質(zhì)，在血管相關(guān)性疾病，如高血壓、冠心病、肺動脈高壓癥、急性缺血性卒中等疾病當(dāng)中研究較多。本研究探討酒精中毒患者血清中ET-1含量的變化及其臨床診斷意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病例組 北華大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科門診就診的慢性酒精中毒患者40例，年齡28～68〔平均(48.2±18.6)〕歲，飲酒年限5～35年，所有患者每日飲酒量均超過40 g。診斷均符合酒精所致精神障礙，參照中國精神障礙分類與診斷標(biāo)準(zhǔn)(CCMD-3)。把酒精中毒患者按飲酒年限分為飲酒20年以下組(包括20年)和飲酒20年以上組，按有無高血壓分為高血壓組、無高血壓組。所有酒精中毒患者均無急性心肌梗死、心力衰竭、缺血性卒中、出血性卒中等病史。

1.1.2 對照組 20例，年齡26～60〔平均(45.6±14.7)〕歲，為同一時期體檢者，平時不飲酒或偶爾飲少量酒。無任何器質(zhì)性疾病。

1.1.3 主要試劑及儀器 人ET-1 ELISA試劑盒，武漢華美生物工程有限公司提供。超低溫冰箱 MPF-2AJ;微量移液器 (吉爾森 1 000 μl、200 μl、100 μl、20 μl);渦力攪拌器 M37610-26;全自動酶標(biāo)儀 MK2;高速離心機 B320A;電熱恒溫培養(yǎng)箱MCO-15A。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集及保存 取患者及健康者靜脈血5 ml，在室溫放置2～4 h后，用高速離心機以1 000 r/min離心20 min，取上清液后放置于-70℃超低溫冰箱中保存。所有患者在未進行任何治療的情況下采血。

1.2.2 方法及結(jié)果判定 將血清標(biāo)本解凍至室溫。實驗前20 min從冰箱中取出試劑盒，以平衡至室溫。提前配置好所有試劑，配制標(biāo)準(zhǔn)品的時候采用倍比稀釋法。加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00 μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品(100、50、25、12.5、6.2、3.2 pg/ml)或待測樣品100 μl，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，在37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱反應(yīng)120 min。棄去液體，甩干，不洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液100 μl(取1 μl生物素標(biāo)記抗體加99 μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液，輕輕混勻，在使用前1 h內(nèi)配制)，在37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱溫育60 min。然后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1～2 min，200 μl/每孔，甩干。每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同生物素標(biāo)記抗體工作液)100 μl，在37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱溫育60 min。然后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1～2 min，200 μl/每孔，甩干。依序每孔加底物溶液90 μl，在37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱避光顯色(30 min內(nèi)，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3～4孔有明顯的梯度藍色，后3～4孔顯色不明顯，即可終止)。依序每孔加終止溶液50 μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。按照終止液的加入順序?qū)⒌孜镆杭尤?。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。用酶標(biāo)儀在450 nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后15 min以內(nèi)進行檢測。用Curve Exert 1.3軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將濃度作為X軸(對數(shù)軸)，OD值作為Y軸(線性軸)。根據(jù)樣品OD值，在曲線圖上查出相應(yīng)ET-1含量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件，數(shù)據(jù)資料以s表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)。

2 結(jié)果

2.1 酒精中毒組與正常對照組血清ET-1水平比較 慢性酒精中毒患者血清ET-1水平明顯高于正常對照組〔(19.43±5.22)pg/ml vs(8.97 ±2.98)pg/ml〕(P ＜0.01)。

2.2 三組血清ET-1水平比較 酒精中毒合并高血壓組與酒精中毒無高血壓組相比 ET-1水平有明顯差異〔(22.43±4.28)pg/ml vs(16.43±4.32)pg/ml〕，有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.01);酒精中毒合并高血壓組與酒精中毒無高血壓組均明顯高于正常對照組。

2.3 飲酒20年以上組及以下組與正常組ET-1水平比較 慢性酒精中毒飲酒20年以下組與飲酒20年以上組ET-1水平無明顯差異〔(19.95±4.08)pg/ml vs(18.71±6.24)pg/ml〕(P＞0.05)。

3 討論

ET-1主要由內(nèi)皮細胞分泌，但血管平滑肌細胞、巨噬細胞、白細胞、心肌細胞、成纖維細胞等也可以分泌ET-1〔1，2〕。在腎臟，腎小管內(nèi)皮細胞、腎小球系膜細胞、足細胞都可以分泌ET-1〔3，4〕。ET還廣泛分布于神經(jīng)細胞內(nèi)。在腦內(nèi)，ET 主要集中于下丘腦、紋狀體、大腦皮質(zhì)及側(cè)腦室中〔5〕。血管內(nèi)皮損傷或受刺激后ET-1產(chǎn)生及釋放增加〔6〕，故ET-1可作為判斷血管內(nèi)皮損傷的一個重要指標(biāo)。但在酒精中毒方面，特別是在酒精中毒患者中的研究較少。

3.1 酒精與高血壓 酒精是否與高血壓有關(guān)，是否增加高血壓的危險性，對于這個問題曾經(jīng)有不一致的看法。很多學(xué)者認為少量飲酒可減少心血管疾病的危險性，這一結(jié)論也可能是從酒精可舒張血管這個角度考慮的。WHO指南指出對人體有害的量是男性每天40 g酒精，女性25 g。大量飲酒可增加高血壓發(fā)生的幾率，這一說法已被很多研究證實〔7〕。一項研究表明如果每日攝取40 g以上酒精，那么每10 g酒精會升高10 mmHg的血壓，而且少量飲酒(少于12 g/d)也影響血壓〔8〕。這也反駁了酒精是舒血管物質(zhì)的理論。目前飲酒已成為高血壓的危險因素之一。引起高血壓的機制很多，大量飲酒引起血壓升高及增加高血壓發(fā)生幾率的主要原因可能為如下：(1)酒精增加交感神經(jīng)系統(tǒng)的活性，這徹底清除了酒精是舒血管物質(zhì)的學(xué)說。這也是酒精中毒引起高血壓的最主要的因素。(2)乙醇對血管的直接損傷可導(dǎo)致血管內(nèi)縮血管物質(zhì)及舒血管物質(zhì)的平衡打破。(3)酒精中毒可引起鎂(Mg2+)的降低，研究結(jié)果表明，細胞Mg2+水平低下，降低Ca2+-ATP酶活性，減少肌漿網(wǎng)對Ca2+的重吸收，繼而引起Ca2+負荷加重，血管平滑肌張力升高，而使血壓升高。(4)酒精可增加腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的活性。(5)大量乙醇及其代謝產(chǎn)物可直接作用于胰島B細胞，抑制胰島素分泌從而增加胰島素抵抗〔9〕。胰島素抵抗可引起體內(nèi)鈉潴留，也可能是引起高血壓的一個因素。此外可能還有其他機制參與酒精引起血壓增高的過程，但是目前大量飲酒引起高血壓已經(jīng)得到證實，繼續(xù)研究其機制的意義在于進一步進行有效的臨床治療。

3.2 酒精與腦血管疾病

3.2.1 酒精與缺血性腦卒中 酒精在缺血性腦卒中方面的作用研究結(jié)果不一致的原因可能是在于飲酒量及酒精飲料種類的不同。西方人較喜歡喝香檳、葡萄酒、啤酒等，東方人特別是韓國、日本、俄羅斯人都比較喜歡喝烈性酒。研究表明適量飲用葡萄酒可降低心臟病及缺血性腦卒中的發(fā)生，少量或中等量的飲酒可減少缺血性腦卒中的發(fā)生，而大量飲酒則成為缺血性腦卒中的一種危險因素〔10〕。國內(nèi)研究表明〔11〕飲酒量在60 g/d以上者發(fā)生缺血性腦卒中的危險是不飲酒者的1.96倍。飲酒量在0～15 g/d者，發(fā)生缺血性腦卒中事件的危險略有下降，然而并無統(tǒng)計學(xué)意義。說明小量飲酒雖然并不增加缺血性腦卒中發(fā)生的危險，但這并不能說明小量飲酒能減少缺血性腦卒中危險。因此即使少量飲酒可引起發(fā)生缺血性腦卒中事件的危險下降，但也不能作為一種治療手段用在缺血性腦卒中。盡早戒酒才是治療的關(guān)鍵。大量飲酒導(dǎo)致發(fā)生缺血性腦卒中的危險性增加的原因分析如下：(1)大量飲酒可導(dǎo)致高血壓，而高血壓是缺血性腦卒中的獨立危險因素之一。(2)大量飲酒可導(dǎo)致心律失常，其中心房纖顫是引起腦栓塞的最常見的原因。(3)大量飲酒可誘發(fā)血小板聚集和血栓素B2(TXB2)的成及前列腺素E2(PGE2)的形成，從而成為腦梗死的重要危險因素。(4)大量飲酒可使纖維蛋白溶解活性降低，纖維蛋白自發(fā)溶解時間明顯延長，增加紅細胞壓積，減低紅細胞柔韌性，使紅細胞聚集性顯著增強，導(dǎo)致微循環(huán)通路阻力普遍增加，降低腦血流。(5)大量飲酒可導(dǎo)致肥胖、血脂異?！?2〕。這些均是導(dǎo)致缺血性腦卒中的危險因素。

3.2.2 酒精與出血性腦卒中 大量飲酒不僅增加缺血性組中的危險性而且也增加出血性腦卒中的危險性。酒精在缺血性腦卒中的影響是通過長期飲酒的慢性過程。而出血性腦卒中的報道多關(guān)于一次大量飲酒后，即急性酒精中毒。與非急性酒精中毒后腦出血相比急性酒精中毒合并高血壓的腦出血患者意識障礙程度重、出血量大，故病情重、預(yù)后差，可見這種急性酒精中毒后腦出血不完全是一次大量飲酒后造成的，而是長期飲酒造成機體損害的前提下又一次性大量飲酒造成的。大量飲酒增加出血性腦卒中危險的原因：(1)飲酒后乙醇作用于腦中突觸后膜苯二氮-γ-氨基丁酸受體，從而抑制了γ-氨基丁酸對腦的抑制作用，引起中樞興奮，這種興奮可引起情緒激動，血壓升高，誘發(fā)腦出血;(2)長期大量飲酒可導(dǎo)致肝功能損害，進而引起凝血功能異常;(3)酒精可直接抑制血小板生成與成熟，使其壽命縮短，由正常(8.5±0.2)d縮短為3.8 d〔13〕。

本研究結(jié)果顯示慢性酒精中毒患者血清ET-1水平明顯高于正常對照組。ET-1可能與酒精中毒有關(guān)，并且對其診斷可能有意義。這一結(jié)果與一些動物實驗研究結(jié)果一致。有研究發(fā)現(xiàn)長期酒精灌胃的大鼠血漿內(nèi)皮素含量明顯高于正常大鼠;也有研究采用灌胃法給予家兔含乙醇50%的白酒8 ml·kg-1·d-1)，灌胃4～6個月時家兔血漿ET-1逐漸升高;一些體外研究也表明酒精與ET-1有密切關(guān)系;在內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基中加入低至高濃度的乙醇，可明顯減少經(jīng)過氧化氫損傷的內(nèi)皮細胞分泌ET，然而在乙醇作用24 h后，對照組和低至中濃度組均比2 h ET明顯減少，只有高濃度乙醇組ET反而顯著增高，考慮此時過氧化氫已揮發(fā)，僅剩下乙醇對內(nèi)皮細胞的作用，提示長期高濃度乙醇對內(nèi)皮細胞有明顯損害作用。這與國外的體外實驗結(jié)果也一致〔14〕。酒精可引起ET-1升高的原因分析如下：(1)ET-1是血管內(nèi)皮損傷的標(biāo)志，任何引起血管內(nèi)皮損傷因素均可導(dǎo)致ET-1升高。(2)酒精中毒可導(dǎo)致血管內(nèi)皮損害，酒精中毒引起的氧自由基增加和機體清除氧自由基的能力下降可能是其原因。有研究通過用電子顯微鏡觀察吸入酒精14 d的大鼠海綿體的組織學(xué)變化，得出酒精可導(dǎo)致內(nèi)皮細胞損傷的結(jié)論。酒精導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷的機制尚未完全明確，但是可能與余下幾個原因有關(guān)。(1)乙醇或其代謝產(chǎn)物直接對血管內(nèi)皮產(chǎn)生刺激作用。(2)酒精導(dǎo)致內(nèi)皮細胞的凋亡。研究發(fā)現(xiàn)長期過量飲酒能夠?qū)е卵趸?抗氧化系統(tǒng)失衡，氧自由基增加且其病理性反應(yīng)加劇，進而能夠引起血管內(nèi)皮細胞凋亡〔15〕。

本研究表明酒精中毒合并高血壓組與酒精中毒無高血壓組相比有明顯的差異，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。這一結(jié)論說明ET參與了酒精中毒引起高血壓的發(fā)病過程。ET是一種最強有力的縮血管物質(zhì)。曾有多項研究報道在高血壓患者中有ET升高。有研究〔16〕把原發(fā)性高血壓患者按級別分為三個組，高血壓1級、2級、3級。測定ET值，結(jié)果顯示高血壓1級患者組與正常組無明顯差異，2級組與3級組則明顯高于對照組。雖然也有學(xué)者有不同的意見，但是本研究結(jié)果也是在有高血壓與無高血壓患者血清中ET-1有明顯的差異。長期大量飲酒后可損傷內(nèi)皮細胞，引起ET-1升高，ET-1可引起高血壓。而酒精中毒患者長期處在這樣高血壓狀態(tài)時進一步的損傷血管內(nèi)皮，因此可增加心腦血管疾病發(fā)生的危險。

本研究表明慢性酒精中毒飲酒20年以下組與飲酒20年以上組血清ET-1無明顯差異。但是有些研究表明飲酒年限與酒精對機體的損害程度有關(guān)〔17〕。隨著飲酒年限的增加，酒精中毒患者對酒精的耐受性增加，因此飲酒量也會增加。可見最終關(guān)鍵還是飲酒量。適量飲酒可降低心腦血管疾病的危險性，但是長期大量飲酒可增加心腦血管疾病的危險性。故問題關(guān)鍵在于減少每日飲酒量，盡早戒酒，減少酒精對機體的危害。

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