魏 巍 韓 捷

(余姚市人民醫(yī)院風濕科，浙江 余姚 315400)

CD4+CD25+調節(jié)性 T 細胞(regulatory T cell，Tregs)是一類存在于動物和人類體內的具有抑制功能的天然Tregs，以調節(jié)自身T細胞反應為主要功能，在防止自身免疫性疾病的發(fā)生、維持自身免疫耐受等方面發(fā)揮著不可替代的作用〔1〕。類風濕關節(jié)炎(RA)是一種以關節(jié)局部病變?yōu)橹鞯淖陨砻庖咝约膊。琓細胞功能紊亂是其發(fā)病的重要因素之一〔2〕。在RA慢性滑膜炎的發(fā)生過程中存在CD4+CD25+Tregs改變，而該類細胞的下降可能與趨化因子受體有關。趨化因子受體是一類具有化學趨化作用的細胞因子。在RA中，趨化因子受體主要由滑膜的巨噬細胞產生，可對中性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞等產生趨化作用;此外，趨化因子受體還與RA血管炎發(fā)生有關。CD4+CD25+Tregs上趨化因子受體表達與RA的相關性已引起廣泛關注。以下就CD4+CD25+Tregs上趨化因子受體表達研究進展及其與RA關系作一綜述。

1 CD4+CD25+Tregs特性

早在20世紀70年代有人描述了具有抑制活性的T細胞亞群并將其命名為抑制性T細胞，但當時這群細胞和其分泌的細胞因子由于缺乏讓人信服的證據(jù)而被擱置。1995年，日本學者Sakaguchi1做了一個創(chuàng)新性研究，將占小鼠外周CD4+T細胞5%～10%的CD4+CD25+T細胞去除后產生各種自身免疫病，而將CD4+CD25+T細胞和CD4單陽性T細胞共同過繼轉移，則能預防自身免疫病發(fā)生〔3〕。這一現(xiàn)象引起了人們對CD4+CD25+Tregs的廣泛興趣。有研究發(fā)現(xiàn)，外周初始T細胞在一定條件下也可以向CD4+CD25+Tregs轉化，如抗原可以通過與T細胞受體(TCR)的相互作用，誘導叉頭翼狀轉錄因子(Foxp3)表達，使其向 CD4+CD25+Tregs轉化〔4〕。根據(jù) CD4+CD25+Tregs來源的不同將其分為固有性和適應性CD4+CD25+Tregs。固有CD4+CD25+Tregs主要是指那些在胸腺發(fā)育成熟后進入外周淋巴組織的CD4+CD25+Tregs，在預防病理性自身免疫反應方面起作用，T細胞在胸腺分化過程中選擇的特殊細胞亞群逃避了克隆清除，發(fā)生胸腺逃逸。適應性CD4+CD25+Tregs是由成熟T細胞在外周淋巴組織中接觸特異性抗原或免疫抑制因子的作用下活化而形成的。

CD4+CD25+Tregs的免疫抑制作用主要是抑制自身反應性T細胞以維持自身免疫平衡。因此，可以認為CD4+CD25+Tregs是一類特定亞群CD4+細胞，屬于“職業(yè)抑制性T細胞”。CD4+CD25+Tregs具有抗原特異性，可被多克隆激活劑和自身抗原激活，一旦被激活其抑制活性是非特異性的，不再需要抗原，也不需要通過T細胞受體(TCR)重新活化。且這種免疫抑制沒有主要組織相容性復合體(MHC)限制性，能抑制同種同型或同種異型T細胞增殖。這些結果提示CD4+CD25+Tregs在免疫性疾病方面發(fā)揮重要作用〔5〕。CD4+CD25+Tregs在調節(jié)免疫反應和耐受間平衡，維持機體穩(wěn)定中起十分重要的作用。CD4+CD25+Tregs在不同種屬呈進化保守性，人與小鼠及大鼠CD4+CD25+Tregs不僅有類似表型和分布，且均具有在體外抑制T細胞增殖和(或)維持自身免疫耐受的作用〔5～7〕。

2 趨化因子受體與CD4+CD25+Tregs

趨化因子受體是一類具有趨化作用的分泌型小分子蛋白(8～10 kD)，通過與靶細胞膜相應的趨化因子受體結合發(fā)揮作用。根據(jù)多肽鏈一級結構中N末端CY殘基和其他氨基酸的排列位置趨化因子受體超家族可以分為4個亞類，即CXC類、CC類、C類、CX3C類。趨化因子受體受體也相應地分為CXCR、CCR、CR及CX3CR四型。趨化因子受體與受體結合后在調節(jié)淋巴細胞定向移動、細胞生長、發(fā)育、分化、凋亡、歸巢、免疫應答及調節(jié)作用等眾多生理、病理過程中起了非常重要的作用〔8，9〕。趨化因子受體與相應受體結合可以趨化淋巴細胞聚集特定的組織，導致靶細胞受損。趨化因子受體可能調節(jié)CD4+CD25+Tregs分化發(fā)育和功能維持。趨化因子受體在CD4+CD25+Tregs上的表達與其活化有關，以及誘導活化影響CD4+CD25+Tregs趨化特性。趨化因子受體在CD4+CD25+Tregs組成性表達是該細胞發(fā)揮功能的前提，對維持機體的自穩(wěn)狀態(tài)具有重要意義〔10〕。CD4+CD25+Tregs特征表達 CCR5、CCR3、CCR4、CCR8、CCR6等趨化因子受體，CCR5趨化炎癥細胞到達病變組織，并分泌多種趨化因子受體以募集更多淋巴細胞，引起炎癥反應;CCR3、CCR4、CCR8募集淋巴細胞進入損傷組織，參與炎癥反應。CCR6對樹突細胞在機體內的運行起主要作用與其血管翳形成有關。在ConA刺激后Tregs數(shù)量明顯增加，其表面趨化因子受體表達增高，其細胞上受體表達增高導致趨化作用去增強〔11〕。研究者們利用轉基因技術選擇性敲除對CD4+CD25+Tregs起主要趨化作用的趨化因子受體如CCR4、CCR6，CCR7等，可見 CD4+CD25+Tregs的數(shù)量明顯減少。Tregs上趨化因子受體表達研究主要集中在腫瘤的研究，研究者們利用轉基因技術選擇性敲除對Tregs起主要趨化作用的趨化因子受體如CCR4、CCR6，可見腫瘤部位Tregs數(shù)量明顯減少。提示敲除趨化因子受體可以改變Tregs進入腫瘤微環(huán)境中的能力〔12〕。在霍奇金淋巴瘤中高表達CCL17和CCL22，可優(yōu)先趨化表達趨化因子受體CCR4的Th2細胞和Tregs，從而產生抑制腫瘤的免疫環(huán)境〔13〕。乳腺腫瘤患者中也可見大量Tregs浸潤，其主要原因是Tregs表達大量CCR4，從而遷移至CCR4配體處，通過募集作用聚集在腫瘤局部〔14〕。胃腸道腫瘤患者中可局部表達CCL17和CCL22，與Tregs呈正相關，提示腫瘤局部大量Tregs浸潤與CCL17、CCL22表達增加有關〔15〕。在惡性胸腔積液和腫瘤性腦膜炎患者的腦脊液中CCL22水平均較外周血升高，且CD4+CD25+T淋巴細胞表面CCR4受體表達上調，與 CCR4/CCL22趨化通路密切相關〔16，17〕。哮喘患者肺泡灌洗液中Tregs明顯減少，通過研究發(fā)現(xiàn)，在哮喘炎癥局部，缺乏趨化因子受體產生，從而導致Tregs無法趨化至氣道發(fā)揮作用，CCR4/CCL22趨化信號通路功能異常導致Tregs趨化活性減弱參與哮喘發(fā)病〔18〕。系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者與健康對照組相比Tregs和CCR4(+)Tregs(+)明顯下降。CCR4(+)Tregs(+)與C(3)水平呈正相關。Tregs(+)對CCL17和CCL22趨化活性明顯降低。雖然趨化因子受體在CD4+CD25+Tregs發(fā)生發(fā)育和功能發(fā)揮等方面所起的作用還有待研究，但充分表明趨化因子受體是控制Tregs數(shù)量的關鍵因素。

3 RA患者CD4+CD25+Tregs上趨化因子受體變化

RA是一種以多關節(jié)炎為主要表現(xiàn)的自身免疫病，其主要發(fā)病機制是T細胞介導的免疫反應異?！?9〕。在RA慢性滑膜炎的發(fā)生過程中，大量炎性細胞(包括Th1淋巴細胞、中性粒細胞和單核細胞等)從外周血遷移、聚集在關節(jié)滑膜組織，并產生多種炎性介質，包括各類細胞因子、基質降解酶等，從而造成滑膜組織破壞;趨化因子受體在炎性細胞遷移、浸潤過程中則起重要作用。此外，趨化因子受體還與RA血管炎發(fā)生有關。CXC亞族趨化性細胞因子如 IL28/CXCL8、NAP22/CXCL7、ENA278/CX2、CL5促進血管生成，而CC亞族MCP21/CCL2也可以介導血管生成〔20〕。

在RA患者外周血CD4+CD25+Tregs研究中提示CD4+CD25+Tregs數(shù)量顯著下降。尤其在疾病活動期，CD4+CD25+Tregs數(shù)量明顯下降，提示CD4+CD25+Tregs數(shù)量減少可能是RA自身免疫反應亢進不能控制的原因之一。Lawson等〔21〕發(fā)現(xiàn)未經治療的早期RA患者，其外周血CD4+CD25+Tregs數(shù)量較正常人下降，而治療后病情控制良好的患者，CD4+CD25+Tregs與正常人相比則無明顯差別，說明RA病程及治療情況對CD4+CD25+Tregs確實存在影響。吳鳳霞等〔22〕發(fā)現(xiàn)RA活動期患者外周血CD4+CD25+Tregs數(shù)量低于健康志愿者，活動期患者Tregs占CD4+T淋巴細胞的百分比為(2.75±1.01)%，明顯低于健康志愿者(4.18±0.89)%，提示活動期 RA患者CD4+CD25+Tregs數(shù)量明顯下降。

對于趨化因子受體參與RA發(fā)病機制的研究已有多篇報道，朱平等〔23〕發(fā)現(xiàn)RA患者滑液中重組人巨噬細胞炎性蛋白-1β(MIP-1β)顯著升高，認為 MIP-1β是趨化表達 CCR5的 Thl細胞向關節(jié)內移動的重要原因;Haringman等〔24〕臨床試驗證實，口服CCR1阻滯劑，可以改善RA病情。調節(jié)性趨化性細胞因子可能在RA炎癥性滑膜炎的起病、發(fā)展及持續(xù)階段均起著重要作用，但是目前這方面的研究不多。楊娉婷等〔25〕結果表明RA患者外周血CD4+CCR4+T細胞百分數(shù)明顯增高，說明CCR4在外周血CD4+T細胞定向遷移至病變關節(jié)過程中可能發(fā)揮重要作用。Kenneth等〔26〕在通過用流式細胞儀方法研究22例RA患者CD4+Tregs上CCR6功能中發(fā)現(xiàn)，RA患者關節(jié)液及外周血CD4+Tregs上CCR6表達均高于健康對照組，考慮與RA早期的炎癥反應有關。

RA中Tregs上趨化因子受體的研究很少，僅Jiao等〔27〕通過用流式細胞儀方法研究11例活動性RA患者發(fā)現(xiàn)RA患者滑液中 CD4+CD25+Tregs表達 CCR4表達下降，在滑液中CD4+CD25+Tregs上CCR4表達下降，原因可能受各種炎性細胞因子影響而表達活性下降。目前尚未見對Tregs上其他趨化因子受體及受體研究的報道，故深入研究RA患者Tregs上趨化因子受體的變化及意義，將有助于闡明RA發(fā)病機制，并為應用以趨化因子受體為靶點的RA的治療提供理論依據(jù)。

綜上，趨化因子受體在RA患者CD4+CD25+Tregs減少中所起重要作用，CD4+CD25+Tregs數(shù)量減少導致與靶細胞直接接觸從而影響B(tài)細胞、殺傷性T細胞及NK等細胞活性，造成抗體生成減少、部分細胞因子水平下降等免疫功能障礙，其數(shù)量或功能異常均可能與RA疾病發(fā)生有密切關聯(lián)，但其對RA具體致病機制有待深入研究。

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