李雅楠

血清甘油三酯測定的臨床應用

李雅楠

目前國內(nèi)大醫(yī)院多已采用酶法，由于酶試劑價格高，少數(shù)基層單位仍在應用化學法。血清TG水平可用于高脂蛋白血癥的分類了解機體內(nèi)TG代謝狀況、早期識別動脈粥樣硬化的危險性、高甘油三酯血癥診斷、代謝綜合征的診斷和降脂藥治療后的監(jiān)測指標等。

甘油三酯;化學方法;酶法

全身98%以上的甘油三酯則是貯存在脂肪組織中，甘油三酯的主要生理功能是氧化供能。甘油三酯是CHD的一個獨立危險因子。血清中甘油三酯的含量隨年齡增長而有上升的趨勢，尤其是體重超過標準的中年以上的人往往偏高。進食脂肪后，血清中甘油三酯上升，并可出現(xiàn)渾濁，顯示乳糜微粒增多?，F(xiàn)對臨床甘油三酯的臨床測定方法進行分析。

1 血清甘油三酯(TG)測定分類

1.1 化學法 用有機溶劑抽提標本中的TG，去除抽提液中的磷脂等干擾物后，用堿水解(皂化)TG，以過碘酸氧化甘油生成甲醛，然后用顯色反應測定甲醛。這類方法中比較最準確的是用氯仿抽提，硅鎂型吸附劑(如Flo-risil)吸附磷脂、皂化及氧化后用變色酸顯色法。此法雖有抽提完全、去除磷脂與甘油、及變色酸顯色靈敏度很高而且呈色穩(wěn)定等優(yōu)點，但因操作步驟繁多不適于日常工作中應用［1］。

1.2 酶法 早期是化學法結合酶法，80年代普及全酶法。用單一試劑的甘油磷酸氧化酶(GPO)法，指示反應同TC測定，QP用PAP試劑的Trinder反應。此法具有酶法的簡速、微量、精密度高的優(yōu)點，而且反應特異，易于達到終點，線性范圍寬，試劑較穩(wěn)定等多種特點。目前國內(nèi)外試劑盒大都采用此法。

2 方法

2.1 變色酸顯色法

2.1.1 試劑 抽提二氯甲烷(HPLC級，乙醇或甲醇為保存劑);生理鹽水(0.9%W/V NaCl);硅酸:用去離子水洗3次，去除細顆粒，然后用甲醇洗2次，用布氏漏斗過濾，空氣干燥。用煎放入65℃干燥箱至少72h，貯存在干燥器內(nèi)。

2.1.2 皂化(TG水解成甘油及酸化) 0.25%KOH乙醇液:①制備5%KOH水溶液100m l;②5%KOH 5m l用無水乙醇(USP)稀釋至l00m l，臨用當天配制，用超聲波去氣泡。0.1mol/L H2SO4:濃H2SO46.0ml用蒸餾水稀釋至1L。

2.1.3 自動分析儀用的試劑(氧化、還原、顯色) 過碘酸鈉，溶1.34窯NaIO4于IL蒸餾水中［2］。亞砷酸鈉，溶11.25g NaOH于約100ml蒸餾水中，未冷卻前加125g As2O3(Baker或Fisher分析試劑)，最后用蒸餾水稀釋成250m l。

2.2 酶法

2.2.1 試劑 甘油三酯液體穩(wěn)定酶試劑組成，GOODs緩沖液(pH 7．2)50mmol/L;脂蛋白脂酶 ≥4000U/L;甘油激酶≥40U/L;磷酸甘油氧化酶≥500U/L;過氧化物酶≥2000U/L;ATP 2.0mmol/L;硫酸鎂 15mmol/L;4-AAP 0.4mmol/L;4-氯酚4.0mmol/L。

2.2.2 準確稱取三油酸甘油酯 (平均相對分子質(zhì)量:885．4)200mg加 TritonX-1005ml，用蒸餾水定容至100m l，分裝后，4℃保存，切勿冰凍保存。

2.2.3 取3支試管混勻后，37℃水浴5min，用分光光度計于500nm波長處以空白管調(diào)零，測各管的吸光度。

3 臨床意義

血清TG受生活習慣、飲食和年齡等多種因素影響，在個體內(nèi)及個體間的波動較大。由于TG的半衰期短(5～15min)，進食高脂、高糖和高熱量飲食后，TG可明顯增高，且以乳糜微粒的形式存在，后者會使血漿變得渾濁，甚至呈乳糜樣。因此，必須在禁食12～16h后靜脈采集標本，以排除和減少飲食的影響［3］。甘油三酯增高:高TG血癥也有原發(fā)的與繼發(fā)的兩類。前者多有遺傳因素，其中包括家族性高TG血癥與家族性混合型高脂(蛋白)血癥等。繼發(fā)的見于糖尿病、糖原累積病、甲狀腺功能不足、腎病綜合征、妊娠、口服避孕藥、酗酒等，但不易分辨原發(fā)或繼發(fā)。

4 討論

正常人血清TG濃度平均約0．11mmoL/L，對于變動幅度較大的TG來說，由此引起的誤差是可以忽略的，但有些標本中TG明顯增高，以致影響對TG水平的判斷。如TG高而血清不混濁者應排除高 TG的可能。酶法測定TG時，脂蛋白脂酶(LPL)除能水解TG外，還能水解甘油一酯和甘油二酯(血清中后兩者約占總TG的3%)，亦被計算在TG中，實際上測定的是總甘油酯。酶法測定TG反應達終點時間37℃不應超過5min。試劑空白吸光度A500nm≤0．05。酶法測定TG干擾因素與膽固醇測定類同。膽紅素＞100μmol/L或抗壞血酸＞170μmol/L出現(xiàn)負干擾。血紅蛋白的干擾是復雜的。其本身的紅色會引起正干擾。溶血后，紅細胞中的磷酸酶可水解磷酸甘油產(chǎn)生負干擾。當Hb＜l g/L時反映為負干擾，＞1g/L反映出正干擾，但Hb≤2g/L時干擾不顯著，明顯溶血標本不宜做TG測定。

［1］ 吳德祥．微波法快速檢測甲種胎兒球蛋白．陜西醫(yī)學檢驗，1993，8(4):224.

［2］ 梅永煥．用DG3022型酶標儀甘油三酯酶法測定．臨檢雜志，1989，7(4):223.

［3］ 錢士勻．臨床生物化學和生物化學檢驗實驗指導．第2版．北京:人民衛(wèi)生出版社，2003:205.

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