于學(xué)江 張博靜 于江

曲美他嗪對(duì)糖尿病心肌病大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響

于學(xué)江 張博靜 于江

目的 探討曲美他嗪對(duì)糖尿病心肌病大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響。方法 SD大鼠50只，隨機(jī)分為對(duì)照組，糖尿病心肌病組，曲美他嗪治療組。第12周末采用Tunel法檢測(cè)光鏡下觀察心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)，免疫組化法測(cè)定Bcl-2，Bax及p53基因蛋白表達(dá)。結(jié)果 曲美他嗪治療組減少p53、Bax的表達(dá)，增加Bcl-2表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡指數(shù)。結(jié)論 曲美他嗪能有效減少糖尿病大鼠心肌細(xì)胞凋亡。

曲美他嗪;糖尿病心肌病;細(xì)胞凋亡

糖尿病心肌病目前發(fā)病機(jī)制尚未闡明，近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)與心肌細(xì)胞凋亡有密切關(guān)系。曲美他嗪作為改善心肌細(xì)胞代謝藥物已在臨床中廣泛應(yīng)用，但對(duì)糖尿病心肌細(xì)胞凋亡的研究報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)觀察曲美他嗪對(duì)糖尿病心肌病大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響，為臨床治療該病應(yīng)用中提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 從SD大鼠50只隨機(jī)分出10只作為正常對(duì)照組(NC)組，其余尾靜脈注射1%STZ溶液，3 d后采尾靜脈血測(cè)血糖，濃度大于16.7 mmol/L為糖尿病成模。普通飼料喂食6周，隨機(jī)抽取10只，糖尿病心肌病成模標(biāo)準(zhǔn):微血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，線粒體變形，排列紊亂，基底膜不規(guī)則增厚，間質(zhì)成纖維數(shù)量增多，細(xì)胞外基質(zhì)膠原積聚。按隨機(jī)數(shù)字表方法將糖尿病大鼠隨機(jī)分為兩組:糖尿病心肌病組(DCM)組，曲美他嗪(QMTQ)組。其后治療組給予曲美他嗪7.5 mg/d，每天灌胃一次，給藥容量為10 m l/kg，NC組和DCM組給予等容量純凈水，持續(xù)6周。

1.2 指標(biāo)測(cè)定 大鼠心肌常規(guī)石蠟切片后，心肌細(xì)胞凋亡按末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT酶)介導(dǎo)帶熒光的dUTP缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)標(biāo)記凋亡細(xì)胞核，切片計(jì)高倍視野鏡下的凋亡陽(yáng)性細(xì)胞核數(shù)/總細(xì)胞核數(shù)，其平均值為細(xì)胞凋亡指數(shù)。Bcl-2，Bax及p53基因蛋白表達(dá)按試劑盒說(shuō)明書(shū)免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)。

2 結(jié)果

心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)與Bcl-2、Bax、p53基因蛋白表達(dá) 與NC組相比，TXL組和QMTQ組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)均增多;Bcl-2表達(dá)減弱，Bax、p53表達(dá)增強(qiáng)。與DCM組相比，QMTQ組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯減少:Bcl-2表達(dá)顯著增強(qiáng)，Bax、p53表達(dá)顯著減弱。

3 討論

細(xì)胞凋亡是導(dǎo)致糖尿病心肌病心功能不全重要事件之一。p53、Bax以及Bcl-2蛋白是目前公認(rèn)的影響細(xì)胞凋亡的重要因素。Kirshenbaum等研究心肌細(xì)胞凋亡的分子調(diào)節(jié)機(jī)制，結(jié)果證實(shí)p53基因?yàn)樾募〖?xì)胞凋亡的激活因子，并且指導(dǎo)促凋亡基因Bax的轉(zhuǎn)錄，而且由p53激活的心肌細(xì)胞凋亡可以被抗凋亡基因Bcl-2所阻斷，支持了Bcl-2是一個(gè)強(qiáng)有力的抗凋亡因子。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示DCM組大鼠心肌凋亡細(xì)胞數(shù)目明顯升高，與Backlund報(bào)道一致［1］。高血糖通過(guò)活性氧簇線粒體途徑誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，并激活了p53基因并使p53蛋白糖基化，引起血管緊張素Ⅱ合成增加，血管緊張素Ⅱ再通過(guò)P38有絲分裂原激活蛋白激酶(MAPK)使p53蛋白磷酸化，最終引起心肌細(xì)胞凋亡［2］。同時(shí)，氧自由基亦可直接引起p53表達(dá)增加，抑制Bcl-2的表達(dá)，增強(qiáng)Bax的表達(dá)。應(yīng)用曲美他嗪后，治療組大鼠心肌細(xì)胞中p53、Bax表達(dá)減弱、Bcl-2表達(dá)增強(qiáng)，與DCM組比較差異有顯著性，提示曲美他嗪可以通過(guò)調(diào)節(jié)p53、Bax、Bcl-2表達(dá)抑制心肌細(xì)胞凋亡。使心肌凋亡細(xì)胞數(shù)目顯著減少，考慮曲美他嗪可能通過(guò)阻斷上述途徑抑制糖尿病大鼠心肌細(xì)胞凋亡。

曲美他嗪是一種新型的改善心肌代謝的藥物，其細(xì)胞保護(hù)作用是通過(guò)直接抑制線粒體的一種酶獲得，使心肌能量代謝由脂肪酸代謝轉(zhuǎn)移為葡萄糖氧化［3］。在心肌代謝障礙的情況下，葡萄糖裂解ATP的再合成中需要的氧減少，因此能夠改善心肌的能量代謝，提高對(duì)低氧應(yīng)激的耐受能力，抑制氧自由基的產(chǎn)生，從而保護(hù)了心肌細(xì)胞。但曲美他嗪對(duì)心肌細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的作用機(jī)制，有待于進(jìn)一步的研究。

［1］Backlund T，Palojoki E，Saraste A，Eriksson A，F(xiàn)inckenberg P，Kyto V，etal.Sustained cardiomyo-cyte apoptosis and left ventricular remodelling after myocardial infarction in experimental diab-etes.Diabetologia，2004，47(2):325-330.

［2］程國(guó)杰，崔亮.糖尿病心肌病與心肌細(xì)胞凋亡.北京醫(yī)學(xué)，2008，30(1):46-47.

［3］楊建華.曲美他嗪治療糖尿病心肌病的臨床觀察.臨床合理用藥，2011，2(4):30-31.

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