紀(jì) 佳

鄭州人民醫(yī)院藥劑科，河南鄭州 450053

為更好的在實(shí)踐中對(duì)白芍中的芍藥苷含量進(jìn)行測(cè)定，本研究利用高效液相色譜法對(duì)白芍總苷膠囊中的芍藥苷的具體含量進(jìn)行檢測(cè)，并同時(shí)對(duì)高效液相色譜法對(duì)白芍總苷中芍藥苷測(cè)定的精密度和重復(fù)性以及穩(wěn)定性方面進(jìn)行考察，分析可行性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

1.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 高效液相色譜儀系統(tǒng)主要包括：脫氣機(jī)（G1379），四 原 泵（G1311A）、進(jìn) 樣 器（G1313A）、柱 溫 箱（G1316A）、色譜工作站（Echrom 98），分析天平（92SM），超聲儀（5150A）。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)室試藥 白芍總苷原料藥（浙江立華110736）；芍藥苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所091102）；水（雙蒸水）；乙腈（色譜純）；磷酸（分析純）；其他試劑（全部為分析純）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 對(duì)照品溶液制備方法 精密稱取芍藥苷對(duì)照品22.2 mg，置于10 m L容量瓶中，然后加入適量的甲醇溶液將其進(jìn)行溶解，再繼續(xù)加甲醇將其稀釋至刻度線，搖勻后就制成芍藥苷對(duì)照品實(shí)驗(yàn)的儲(chǔ)備液。再進(jìn)行精密移取芍藥苷對(duì)照品的儲(chǔ)備液1 mL，放置到10 mL量瓶中，再加甲醇溶液稀釋至刻度線，即得芍藥苷的對(duì)照品溶液。

1.2.2 供試品溶液制備方法 精密稱取白芍總苷樣品20 mg，置于10 mL容量瓶中，加適量甲醇超聲溶解，放至室溫后用甲醇定容至刻度，搖勻后就制成白芍總皂苷供試品的儲(chǔ)備液，再進(jìn)行精密移取白芍總皂苷供試品的儲(chǔ)備液1 mL放置到5 mL容量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻后使用0.45 μm濾膜進(jìn)行過濾，即得供試品溶液。

1.2.3 色譜條件設(shè)定[1]色譜柱（SB—C18250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相（乙腈—0.015%磷酸）；流速（1.0 mL/min）；柱溫（30℃）；梯度洗脫程序?yàn)椋?%乙腈0 min—12%乙腈5 min—20%乙腈20 min—20%乙腈25 min—45%乙腈35 min—45%乙腈40 min。

1.2.4 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取芍藥苷的對(duì)照品溶液0.04、0.2、0.8、1.0、1.5、1.8 m L 各自放置在 2 m L 量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻后依次進(jìn)樣5 μL，記錄色譜圖，以其色譜的峰面積做為縱坐標(biāo)（Y），以芍藥苷對(duì)照品溶液的進(jìn)樣質(zhì)量濃度做為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行線性回歸[2]。

1.2.5 精密度的考察 精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液5μL，在“色譜條件設(shè)定”下，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄所測(cè)量色譜的峰面積。1.2.6 穩(wěn)定性的考察 分別精密吸取一批白芍總苷供試品溶液 5 μL，分別在 0、1、2、4、6、12、24 h 時(shí)進(jìn)樣測(cè)定，記錄所測(cè)得的色譜峰面積[3]。

1.2.7 重復(fù)性的考察 分別稱取同一批次白芍總苷樣品6份，按照“供試品溶液制備方法”項(xiàng)下的方法制備6份白芍總苷供試品溶液，按“色譜條件設(shè)定”下分別進(jìn)樣5 μL進(jìn)行測(cè)量，記錄峰面積。

1.2.8 加樣回收率的考察 稱取白芍總苷樣品5份各10 mg，分別精密加入一定量的芍藥苷，制備供試品溶液，取各溶液5 μL進(jìn)樣，在“色譜條件設(shè)定”項(xiàng)下分別測(cè)定芍藥苷峰面積，記錄色譜圖，計(jì)算回收率。

1.2.9 樣品測(cè)定 稱取白芍總苷20 mg 3份，按“供試品溶液制備方法” 項(xiàng)下方法進(jìn)行制備，分別進(jìn)樣測(cè)定芍藥苷的峰面積，按照所求的的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中所含芍藥苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，取3次計(jì)算的平均值。

2 結(jié)果

2.1 線性關(guān)系

得出芍藥苷的回歸方程為：Y＝6.523 2X-0.821 69 （r=0.999 9），線性范圍是4.43~198.90μg/mL。

2.2 精密度

得出芍藥苷峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.41%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，使用高效色相色譜法對(duì)白芍苷的含量進(jìn)行檢測(cè)具有良好的精密度。

2.3 穩(wěn)定性

得出芍藥苷的峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD是1.36%，結(jié)果顯示在白芍供試品溶液制備24 h內(nèi)進(jìn)行芍藥苷的含量測(cè)定，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果均比較穩(wěn)定。

2.4 重復(fù)性

得出6次芍藥苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD是1.72%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明使用高效液相色譜法對(duì)白芍總苷中芍藥苷的含量進(jìn)行檢測(cè)重復(fù)性良好。

2.5 回收率

得出芍藥苷的平均回收率是102.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD是0.78%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明使用高效液相色譜法對(duì)白芍總苷中芍藥苷的含量進(jìn)行檢測(cè)加樣回收率良好。

2.6 芍藥苷的含量

白芍總苷樣品中芍藥苷的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為368.12 mg/g，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD是1.72%。

3 討論

白芍總苷為從白芍的飲片中提取出的總苷，按照白芍的干燥品進(jìn)行計(jì)算，質(zhì)量合格的白芍其芍藥苷的含量應(yīng)少于40.0%[4]。對(duì)白芍進(jìn)行生化提取后，從白芍干燥根中可提取芍藥苷、羥基芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥花苷、苯甲酰芍藥苷等諸多具有一定生理功效的苷類混合物，這些苷類統(tǒng)稱為白芍總苷。而芍藥苷是白芍最為重要的一種苷類成分，其在白芍總苷中的含量約在 90% 左右。本研究進(jìn)行高效液相色譜法對(duì)白芍總苷中的芍藥苷含量進(jìn)行測(cè)定，所使用的稀釋溶劑為甲醇，實(shí)驗(yàn)證明純品的甲醇作為溶劑，所制得的溶液比較澄清，可有效免于過濾，同時(shí)實(shí)驗(yàn)中采取梯度洗脫的方式，明顯的縮短了進(jìn)行芍藥苷含量測(cè)定的分析時(shí)間。綜上所述，本研究建立的應(yīng)用高效液相色譜法對(duì)白芍總苷中芍藥苷的含量進(jìn)行檢測(cè)，其檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、方便、準(zhǔn)確性好，同時(shí)實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性和重復(fù)性也比較好，在對(duì)白芍總苷中芍藥苷的含量測(cè)定上，具有良好的應(yīng)用價(jià)值。

[1] 張家富，孟楣，邢安之.HPLC法測(cè)定白芍不同飲片中芍藥苷的含量[J].安徽醫(yī)藥，2005，9（8）：588-589.

[2] 王巧，劉榮霞，畢開順，等.HPLC法測(cè)定白芍總苷膠囊中芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷和苯甲酰芍藥苷[J].中草藥，2005，36（11）：1630-1632.

[3] 鄭軍獻(xiàn)，胡軼娟，魏克民，等.白芍提取物中芍藥苷及總皂苷的含量測(cè)定[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2011，18（4）：326-327.

[4] 饒毅，夏川川，周海濱，等.高效液相色譜法測(cè)定白芍總苷的不確定度分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，（19）：89-93.