孫 瑤，黃康康

(浙江省杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 杭州 310024)

樹蘭為蘭科樹蘭屬熱帶蘭，原產(chǎn)于厄瓜多爾，是一種具有很高觀賞價(jià)值的熱帶氣生蘭，深受臺(tái)灣蘭花愛好者的青睞，但在國內(nèi)尚屬少見［1-2］。谷祝平等［3］、潘學(xué)峰等［4］曾利用樹蘭種子誘導(dǎo)形成的原球莖進(jìn)行擴(kuò)繁取得成功，但種子間差異很大，利用種子擴(kuò)繁不利于親本性狀的保持［1］。為了加速繁育速度，縮短育種周期，在工廠化育苗中常采用組織培養(yǎng)的方式［5-6］。樹蘭是瀕危蘭花物種，數(shù)量稀少，因此研究樹蘭組織培養(yǎng)技術(shù)，構(gòu)建一套簡便高效的再生體系，對(duì)樹蘭的快繁研究具有重要意義。現(xiàn)將作者的試驗(yàn)結(jié)果總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料為樹蘭 (Epidendrum Yellow)無菌苗的莖段和叢芽，由課題組組培室提供。

1.2 方法

取健壯無菌試管苗，以1/2 MS為基本培養(yǎng)基，每升附加8 g瓊脂粉，30 g蔗糖和2 g活性炭，添加不同濃度的NAA(0.2，0.5，1.0 mg·L-1)和6-BA(0.5，1.0，2.0，3.0，4.0 mg·L-1)。試驗(yàn)設(shè)15個(gè)處理。每瓶接種5個(gè)外植體，每處理接種10瓶，pH值調(diào)至5.8，培養(yǎng)溫度25℃左右，每天光照時(shí)間14 h，光照強(qiáng)度1 500～2 000 lx，培養(yǎng)40～50 d后統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)愈傷組織和芽誘導(dǎo)的影響

外植體接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基上約20 d后開始膨大，產(chǎn)生愈傷組織，但不同激素組合對(duì)樹蘭莖段愈傷組織的誘導(dǎo)作用差異顯著，以NAA 1.0 mg·L-1+6-BA 3.0 mg·L-1誘導(dǎo)出的愈傷組織最好，誘導(dǎo)率達(dá)50.0%(表1)，且愈傷組織呈黃綠色、表面濕潤、松軟，生長狀態(tài)好。

表1 NAA、6-BA不同配比組合對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響

在激素對(duì)樹蘭莖段的誘導(dǎo)過程中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)40～50 d的培養(yǎng)后，有些莖段分化成芽 (表2)，且不同激素組合對(duì)芽的誘導(dǎo)效果不同。以NAA 1.0 mg·L-1+6-BA1.0 mg· L-1和 NAA 1.0 mg·L-1+6-BA 0.5 mg·L-1誘導(dǎo)出的芽最多，誘導(dǎo)率分別達(dá)52.0%和48.0%，且植物生長健壯。

表2 NAA、6-BA不同配比組合對(duì)芽分化的影響

2.2 對(duì)生根的影響

從表3可以看出，不同NAA和6-BA配比組合對(duì)樹蘭組培苗生根的影響不同。NAA 0.5 mg·L-1+6-BA 2.0 mg·L-1的激素組合對(duì)生根的誘導(dǎo)率最低，只有87.5%。其余各生長調(diào)節(jié)劑組合對(duì)生根的誘導(dǎo)率均達(dá)90%以上。

表3 NAA、6-BA不同配比組合對(duì)組培苗生根的影響

3 小結(jié)和討論

本實(shí)驗(yàn)中樹蘭原球莖的誘導(dǎo)率和芽的分化率較低，這可能是由于這2個(gè)實(shí)驗(yàn)均是在同一種培養(yǎng)基中統(tǒng)計(jì)所致，也即是說莖段培養(yǎng)40～50 d后，同一個(gè)組培瓶中出現(xiàn)原球莖和芽并存的情況。如NAA 1.0 mg·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1培養(yǎng)基中原球莖的誘導(dǎo)率為30%，芽分化率為52%，即在該培養(yǎng)基中培養(yǎng)40～50 d后30%莖段轉(zhuǎn)變成原球莖，另外52%的莖段分化成芽，誘導(dǎo)和分化率總和則為82%。表明樹蘭的誘導(dǎo)和分化相對(duì)容易，可以在同一種培養(yǎng)基 中 完 成。其 中 NAA 1.0 mg·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1配方中誘導(dǎo)和分化總和最高，達(dá)82%。此外，樹蘭生根相對(duì)容易，在各培養(yǎng)基中的生根率均在87.5%以上，其中在培養(yǎng)基NAA 1.0 mg·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1上的生根率達(dá)100%。因此，推斷樹蘭的誘導(dǎo)、分化和生根可以在同一個(gè)培養(yǎng)基上完成。張先云等［7］的研究也表明雜交蘭的從誘導(dǎo)、增殖、分化到生根可以用同一種培養(yǎng)基。這樣大大縮短了生產(chǎn)和試驗(yàn)周期、簡化了操作程序、降低了成本。

根據(jù)已有研究可知，不同品種間的差異性較為顯著。本文僅對(duì)樹蘭的一個(gè)品種進(jìn)行了研究，不能對(duì)不同品種的培養(yǎng)效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。因此對(duì)具有廣泛品種適應(yīng)性的培養(yǎng)基還有待于進(jìn)一步研究。

［1］ 魏翠華.樹蘭離體培養(yǎng)和植株再生 (簡報(bào))［J］.亞熱帶植物科學(xué)，2006，35(2):64-65.

［2］ 龍雅宜.初識(shí)奇妙的蘭科觀賞植物 (中)［J］.花木盆景:花卉園藝版，2007(12):7-11.

［3］ 谷祝平，徐濤.樹蘭原球莖增殖中體細(xì)胞胚發(fā)生的研究 ［J］.蘭州大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，1990，26(1):76-79.

［4］ 潘學(xué)峰，凌梅，王安石.樹蘭未成熟種子離體快繁技術(shù)［J］.熱帶生物學(xué)報(bào)，2010，1(2):158-164.

［5］ 江金蘭，周輝明，羅慶國.6-BA、NAA不同配比對(duì)大花蕙蘭叢生芽增殖的影響 ［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009(1):85-86.

［6］ 馬華升，王偉科，王佳.培養(yǎng)基、激素和添加物對(duì)大花蕙蘭原球莖誘導(dǎo)增殖的影響 ［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005(6):452-456.

［7］ 張先云，袁秀云，馬杰.雜交蘭的組織培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)研究 ［J］.河南科學(xué)，2009，27(4):419-421.