李 瑩, 王 偉, 孟凡平, 李占東

(1．大連海洋大學(xué) 農(nóng)業(yè)部北方海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 遼寧 大連 116023; 2.東港出入境檢驗(yàn)檢疫局, 遼寧東港 118300)

利用線粒體DNA控制區(qū)部分序列分析不同地理群體大瀧六線魚(yú)遺傳多樣性

李 瑩1, 王 偉1, 孟凡平1, 李占東2

(1．大連海洋大學(xué) 農(nóng)業(yè)部北方海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 遼寧 大連 116023; 2.東港出入境檢驗(yàn)檢疫局, 遼寧東港 118300)

利用PCR技術(shù)擴(kuò)增了6個(gè)野生地理群體大瀧六線魚(yú)(Hexagrammos otakii)線粒體DNA控制區(qū)的部分序列, 共獲得 352bp堿基序列, 31尾個(gè)體定義了 22種單倍型。中性檢驗(yàn) Fu′sFs值為-0.14881(P＜0.01)。分子變異分析(AMOVA)結(jié)果顯示： 遺傳分化指數(shù)Fst=0.7398(P＜0.01), 73.98%的變異來(lái)自群體間, 26.02%的變異來(lái)自群體內(nèi)。根據(jù)不同個(gè)體間的遺傳距離構(gòu)建了NJ和MP系統(tǒng)樹(shù), 兩種方法獲得了相似的進(jìn)化樹(shù)。其中青島群體與旅順群體的一部分個(gè)體單獨(dú)成支, 其它群體聚為 1支。研究結(jié)果表明, 大瀧六線魚(yú)群體遺傳多樣性較為豐富, 群體間發(fā)生了較大的遺傳分化, 證明線粒體DNA控制區(qū)基因可用于大瀧六線魚(yú)群體內(nèi)及群體間遺傳多樣性的分析。

大瀧六線魚(yú)(Hexagrammos otakii); 野生地理群體; 線粒體DNA控制區(qū)部分序列; 遺傳多樣性

大瀧六線魚(yú)(Hexagrammos otakii), 也稱為歐氏六線魚(yú)、六線魚(yú)等[1-2], 山東、遼寧沿海俗稱黃魚(yú), 隸屬于鲉形目(Scorpaeniformes)、六線魚(yú)科(Hexagrammidae)、六線魚(yú)屬(Hexagrammos)[2], 主要分布于中國(guó)的遼寧和山東等地的近海多巖礁海區(qū),日本、韓國(guó)和朝鮮等國(guó)的近海也有分布[3-4]。該魚(yú)肉味鮮美, 營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高, 很受山東、遼寧沿海當(dāng)?shù)厝嗣竦臍g迎, 除供我國(guó)市場(chǎng)外, 還可以出口。該魚(yú)目前已成為北方海水養(yǎng)殖魚(yú)類之一。日本于20世紀(jì)70年代就開(kāi)始對(duì)其人工繁殖進(jìn)行研究, 中國(guó)于20世紀(jì)80年代也開(kāi)始研究。有關(guān)該魚(yú)的生物學(xué)研究主要是在人工育苗[5-8], 營(yíng)養(yǎng)成分分析[9-10], 生物學(xué)指標(biāo)[11-12]等方面, 目前國(guó)內(nèi)僅見(jiàn)劉奇[13]一篇關(guān)于大瀧六線魚(yú)群體遺傳多樣性方面的研究報(bào)道。

研究物種的遺傳多樣性有助于了解物種的進(jìn)化歷史和種群恢復(fù)潛力, 從而制定有效的保護(hù)和管理對(duì)策。線粒體DNA(mtDNA)具有母性遺傳的特點(diǎn), 它的拷貝數(shù)多、突變率高, 突變固定后形成的多態(tài)位點(diǎn)可反映群體遺傳特征、種群分化和種屬關(guān)系等特點(diǎn),是系統(tǒng)進(jìn)化和種群遺傳研究中理想的分子標(biāo)記[14-16]?？刂茀^(qū)(D-loop)是線粒體上的非編碼區(qū), 進(jìn)化速度快,適合群體水平的遺傳變異分析[17-18]。以序列測(cè)定技術(shù)為支持, 魚(yú)類線粒體 D-loop序列已被應(yīng)用于多種魚(yú)類群體遺傳多樣性的分析,例如, 四大家魚(yú)[19]、云南 倒 刺鲃(Spinibarbus denticulatus yunnanensis)[20]、黃吻姬鯛(Pristipomoides multidens)[21]、雅羅魚(yú)(Leuciscus leuciscus)[22]、鏟頷魚(yú)(Varicorhinus barbatulus)[23]、細(xì)鱗鮭(Brachymystax lenok)[24]、大口黑鱸(Micropterus salmoides)[25]、沙鰍(Botia superciliaris)[26]、銀鯧(Pampus argenteus)[27]和裂腹魚(yú)(Schizothorax kozlovi)[28]等。近年來(lái), 大瀧六線魚(yú)的資源量日益減少, 本實(shí)驗(yàn)利用線粒體DNA控制區(qū)序列對(duì) 6個(gè)群體大瀧六線魚(yú)的遺傳結(jié)構(gòu)和變異進(jìn)行分析, 旨在了解其遺傳背景, 為加強(qiáng)對(duì)其遺傳多樣性的保護(hù)和開(kāi)發(fā), 合理利用其漁業(yè)資源提供基礎(chǔ)性的資料。

1 材料與方法

1.1 樣本采集

本實(shí)驗(yàn)所用野生大瀧六線魚(yú)分別采自青島、丹東和大連等 6個(gè)地區(qū)。采樣地的地理位置和樣本數(shù)見(jiàn)圖1和表1。

圖1 大瀧六線魚(yú)群體的采樣地點(diǎn)Fig. 1 Map of Hexagrammos otakii sampling sites

表1 大瀧六線魚(yú)群體簡(jiǎn)稱、采樣地、數(shù)量及地理坐標(biāo)Tab. 1 Population codes, locality, numbers and geographical coordinates of Hexagrammos otakii

1.2 基因組DNA的提取

采用了一種快速提取DNA的方法。取50 mg左右魚(yú)尾部肌肉組織加入勻漿液、SDS以及蛋白酶K,消化大約 2 h, 經(jīng)乙酸鉀溶液抽提, 兩倍體積無(wú)水乙醇沉淀, 75%酒精洗滌后, 用適量 TE溶解, -20℃存放。

1.3 PCR擴(kuò)增及測(cè)序

所用通用引物序列為 DL1(5’-TCA AAG CTT ACA CAG TCT TGT AAA CC-3’), DL2 (5’-CCT GAA GTA GGA ACC AGA TG -3’)。PCR反應(yīng)使用大約50 ng基因組DNA為模板。反應(yīng)體積為25 μL, 其中基因組 DNA2 μL, 10×PCR Buffer 2.5 μL, MgCl25.0 μmmol/L, dNTPs 0.5 mmol/ L, 引物各1 mol/L, Taq酶2U。PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?95℃預(yù)變性3 min, 然后進(jìn)行35個(gè)循環(huán)(94℃變性30 s, 56℃退火45 s, 72℃延伸1 min), 最后72℃延伸10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠回收純化, 送至上海鼎安生物科技有限公司進(jìn)行測(cè)序。

1.4 數(shù)據(jù)分析

用 ClustalX1.83軟件進(jìn)行序列比對(duì), 用Mega4.10軟件統(tǒng)計(jì)變異位點(diǎn)和堿基組成, 計(jì)算群體遺傳距離, 構(gòu)建 NJ和 MP分子系統(tǒng)樹(shù)。用DNASP4.10軟件計(jì)算序列的單倍型數(shù)(h)、單倍型多樣性指數(shù)(Hd)、核苷酸多樣性指數(shù)(π)以及平均核苷酸差異數(shù)(K)。用Arlequin 3.11軟件進(jìn)行中性檢驗(yàn), 計(jì)算Fu′sFs值來(lái)推斷群體發(fā)生擴(kuò)張的歷史。用分子變異分析方法(AMOVA)分析群體間遺傳分化指數(shù)Fst并用排列測(cè)驗(yàn)法(permutation test)檢測(cè)Fst的顯著性。

2 結(jié)果

2.1 序列特征

PCR擴(kuò)增得到約500 bp的堿基序列, 測(cè)序結(jié)果經(jīng)比對(duì)剪切共獲得 31尾大瀧六線魚(yú)線粒體 D-loop序列, 其5′端的長(zhǎng)度為352 bp。T、A、C、G堿基的平均含量分別為37.0%、34.2%、14.1% 和14.8%。A+T 含量(71.1%)明顯高于 G+C含量(28.9%), 表現(xiàn)出顯著的堿基組成偏向性, 符合脊椎動(dòng)物 mtDNA D-loop區(qū)堿基組成的特點(diǎn)。大連群體 T+A含量最高,高達(dá)71.9%, 而青島群體最低(69.4%)。G+C 含量則相反, 青島群體最高(30.6%), 大連群體最低(28.1%)。

31尾個(gè)體共定義了 22種單倍型(表 2)： 群體間共享的單倍型有4個(gè), 占單倍型總數(shù)的18.2% ,其中2個(gè)單倍型為3個(gè)群體所共有, 2個(gè)單倍型為兩個(gè)群體共有。18種單倍型為單個(gè)群體特有, 占單倍型總數(shù)的81.8%。

2.2 遺傳多樣性

群體遺傳多樣性參數(shù)統(tǒng)計(jì)表明(表 3)： 旅順群體呈現(xiàn)出最高的核苷酸多樣性指數(shù)(0.28938), 東港、大連和青島群體呈現(xiàn)出最高的單倍型多樣性指數(shù)(1.00000)。東港、長(zhǎng)?？h、瓦房店和青島群體序列的 Fu′sFs值均為負(fù), 并達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著性差異,提示這4個(gè)群體的檢驗(yàn)結(jié)果均偏離中性模式。

2.3 遺傳結(jié)構(gòu)

Kimura 2-paramter遺傳距離和遺傳分化指數(shù)Fst見(jiàn)表 4。6個(gè)群體間的平均遺傳距離為 0.00739～0.66972, 其中青島與瓦房店群體間的遺傳距離最高,大連與瓦房店群體間的最低。6個(gè)群體間的遺傳分化指數(shù)Fst為-0.04828～0.97565, 其中青島與長(zhǎng)海縣群體間的遺傳分化指數(shù)最高, 長(zhǎng)?？h與瓦房店群體間的最低。分子變異分析(AMOVA)結(jié)果顯示(表5),Fst=0.73983(P＜0.01), 即 73.98%的變異來(lái)自群體間,26.02%的變異來(lái)自群體內(nèi), 表明大瀧六線魚(yú) 6個(gè)群體間發(fā)生了顯著的遺傳分化。

表2 大瀧六線魚(yú)mtDNA控制區(qū)單倍型在各群體中的分布Tab. 2 The distribution of haplotypes in the six populations of Hexagrammos otakii

表3 大瀧六線魚(yú)群體遺傳多樣性參數(shù)Tab. 3 Intra-populational genetic diversity in different populations of Hexagrammos otakii

表4 6個(gè)大瀧六線魚(yú)群體間的遺傳距離(對(duì)角線下方)與遺傳分化指數(shù)Fst(對(duì)角線上方)Tab. 4 Pairwise genetic distance (below diagonal) and Fst (above diagonal) among the six populations of Hexagrammos otakii

表5 大瀧六線魚(yú)群體間遺傳差異的分子方差分析Tab. 5 Analysis of molecular variance (AMOVA) among the populations of Hexagrammos otakii

圖2 大瀧六線魚(yú)部分線粒體DNA D-oop序列的NJ和MP分子系統(tǒng)樹(shù)Fig. 2 Neighbor-joining and Maximum Parsimony tree based on partly mtDNA D-loop sequences

2.4 分子系統(tǒng)樹(shù)的構(gòu)建

選擇短鲬(Parabembras curtus)的同源序列作為外群(登錄號(hào)：GU139032.1), 基于Kimura雙參數(shù)模型構(gòu)建 NJ和 MP分子系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù), 節(jié)點(diǎn)支持率使用1 000次 bootstrap檢驗(yàn)(圖 2)。可以看出, 兩種方法獲得的進(jìn)化樹(shù)相似, 大瀧六線魚(yú)31尾個(gè)體聚為兩大分支。其中東港、長(zhǎng)?？h、大連和瓦房店群體親緣關(guān)系較近, 構(gòu)成一個(gè)分支, 青島群體構(gòu)成另外一個(gè)分支, 旅順群體在兩大分支中各有分布。

3 討論

一個(gè)物種遺傳多樣性的高低與其適應(yīng)能力、生存能力和進(jìn)化潛力密切相關(guān)。豐富的遺傳多樣性意味著比較高的適應(yīng)生存潛力, 蘊(yùn)藏著比較大的進(jìn)化潛能以及比較豐富的育種和遺傳改良的潛力, 而貧乏的遺傳多樣性則會(huì)給物種生存、進(jìn)化及種質(zhì)資源的保護(hù)和利用帶來(lái)許多不利影響[29]。在本研究中, 6個(gè)群體31尾大瀧六線魚(yú)共檢測(cè)到22種單倍型, 單倍型多樣性指數(shù)為0.83333～1.00000。已有的資料表明,種群能夠維持較高單倍型多樣性的原因可能在于較大的種群數(shù)量、環(huán)境的不均一性或者具有適應(yīng)種群快速增長(zhǎng)的生活特性[30]。大瀧六線魚(yú)是地方性的魚(yú)類, 資源量不大[31], 間接說(shuō)明中國(guó)的近海多巖礁海區(qū)比較適合其生長(zhǎng)繁殖, 這可能是其維持較高遺傳多樣性的基礎(chǔ)。本研究發(fā)現(xiàn), 與旅順群體的核苷酸多樣性指數(shù)(0.28938)相比, 東港群體(0.01988)、青島群體(0.01612)、瓦房店群體(0.01001)、大連群體(0.00733)和長(zhǎng)?？h群體(0.00628)的核苷酸多樣性均低。Grant等[32]指出單倍型多樣性值高與核苷酸多樣性值低的原因可能是由于種群是由一個(gè)較小的有效群體快速擴(kuò)張而來(lái)的, 雖然通過(guò)變異積累了單倍型的多態(tài)性, 但卻還未能積累核苷酸序列的多樣化,這些群體的許多種類可能起源于上新世或更新世早期。此現(xiàn)象在鯨鯊[33]、尖吻鯖鯊、紅擬石首魚(yú)與西大西洋小沙丁魚(yú)[32]中也存在。Fu[34]認(rèn)為Fs中性檢驗(yàn)顯著偏離中性, 負(fù)的Fs值和差異顯著的P值表明種群可能在歷史上有擴(kuò)張的跡象。在本實(shí)驗(yàn)中, 1000次模擬取樣的情況下, 青島、東港、瓦房店和長(zhǎng)?？h群體的Fs值均為負(fù)值(P＜0.05), 表明這4個(gè)群體可能曾經(jīng)歷過(guò)種群擴(kuò)張的歷史, 而旅順與大連群體的Fs值均為正值, 說(shuō)明這兩個(gè)群體沒(méi)有經(jīng)歷過(guò)種群擴(kuò)張的歷史, 種群大小穩(wěn)定。

Fst是用來(lái)測(cè)量群體之間遺傳分化的重要指標(biāo),Fst接近于 0時(shí), 說(shuō)明群體間沒(méi)有發(fā)生遺傳分化, 在 0到1的范圍內(nèi),Fst值越大, 兩種群的分化程度越高[35]。本實(shí)驗(yàn)中旅順和青島群體與其他群體間Fst值較大(0.30275～0.97565), 已達(dá)高等分化水平, 其他四個(gè)群體之間沒(méi)有出現(xiàn)遺傳分化。另外, 群體間的相對(duì)遺傳距離能反映群體間的親緣關(guān)系, 本研究中旅順和青島群體與其他群體間的遺傳距離較大(0.33209～0.66972), 其他 4個(gè)群體間的遺傳距離均較小(0.00739 ～ 0.01519)。AMOVA 分析結(jié)果顯示, 群體間遺傳變異占總遺傳變異較大的比例(73.98% ), 說(shuō)明大瀧六線魚(yú)群體間差異較大, 遺傳變異主要發(fā)生在群體間。構(gòu)建的NJ和MP分子系統(tǒng)樹(shù)顯示, 青島群體和旅順群體的一部分個(gè)體組成一個(gè)分支, 東港、長(zhǎng)?？h、大連、瓦房店和旅順群體的另一部分個(gè)體為另一大分支。單倍型在群體中的分布也顯示, 除青島群體外, 其他5個(gè)群體均有單倍型互相交叉。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 可以將這6個(gè)群體劃分為兩大區(qū)域, 基本符合其所在的地理區(qū)域, 即青島群體屬于山東地區(qū),東港、長(zhǎng)?？h、大連、瓦房店群體屬于遼寧地區(qū)。由于mtDNA屬于母系遺傳, 由此可推斷這6個(gè)群體的31尾個(gè)體可能來(lái)源于兩個(gè)不同的母系祖先。但是作者看到旅順群體的一部分與青島群體的親緣關(guān)系極近, 分析可能由于引種問(wèn)題或者遺傳漂變使兩群體間發(fā)生了基因交流。

通過(guò)研究作者發(fā)現(xiàn), 高比例的遺傳變異分布在地區(qū)之間, 表明大瀧六線魚(yú)群體間具有顯著的遺傳分化。山東地區(qū)和遼寧地區(qū)之間沒(méi)有共享的單倍型,雖然不排除有少量共享單倍型未被檢出的可能性(尤其是在青島群體和旅順群體之間), 但我們?nèi)匀唤ㄗh按照不同的地理區(qū)域來(lái)保護(hù)大瀧六線魚(yú)種群, 避免不同區(qū)域的種群之間發(fā)生基因交流, 因?yàn)榛蚪涣髟谀撤N程度上會(huì)阻礙群體間的遺傳分化[36]。本研究結(jié)果顯示, 與其他魚(yú)類的相比, 如細(xì)鱗鮭(0.0005)[24]、大口黑鱸(0.0028)[25]、沙鰍( 0.00365)[26]、銀鯧(0.0007)[27]和裂腹魚(yú)(0.00324)[28], 大瀧六線魚(yú)群體具有較高的核苷酸多樣性(旅順、東港、青島、瓦房店、大連、長(zhǎng)海縣分別為： 0.28938、0.01988、0.01612、0.01001、0.00733、0.00628), 遺傳多樣性較為豐富。近年來(lái), 隨著近海經(jīng)濟(jì)的發(fā)展, 填海造地等嚴(yán)重破壞了大瀧六線魚(yú)的棲息場(chǎng)所, 而濫采濫捕等又加大了對(duì)該魚(yú)種群的選擇壓力, 致使出現(xiàn)捕撈個(gè)體小型化、性早熟等種質(zhì)衰退的現(xiàn)象。大瀧六線魚(yú)的懷卵量很少, 繁殖力低, 故很難形成大群體, 資源量也得不到大量補(bǔ)充,一旦資源被破壞, 很難恢復(fù), 也可能會(huì)遭受滅頂之災(zāi)[31]。從長(zhǎng)遠(yuǎn)角度看, 過(guò)度捕撈勢(shì)必破壞其遺傳多樣性和種質(zhì)資源的穩(wěn)定性, 不能因?yàn)槟壳跋鄬?duì)豐富的遺傳多樣性水平而忽視對(duì)大瀧六線魚(yú)資源必要的保護(hù)與管理。今后應(yīng)針對(duì)中國(guó)范圍內(nèi)不同群體大瀧六線魚(yú)資源的遺傳多樣性展開(kāi)更為詳細(xì)的研究工作,后繼的相關(guān)研究, 應(yīng)嘗試結(jié)合其他mtDNA基因信息以及其他分子標(biāo)記方法進(jìn)一步比較研究大瀧六線魚(yú)群體內(nèi)及群體間遺傳多樣性的變動(dòng)規(guī)律。以期為今后定期的遺傳多樣性檢測(cè)奠定基礎(chǔ), 并根據(jù)其遺傳多樣性的變化趨勢(shì)采取相應(yīng)的保護(hù)措施, 科學(xué)的保護(hù)野生大瀧六線魚(yú)的種質(zhì)資源。

[1]劉蟬馨, 秦克靜. 遼寧動(dòng)物志(魚(yú)類)[M]. 沈陽(yáng)： 遼寧科學(xué)技術(shù)出版社, 1987： 393-396.

[2]成慶泰, 鄭寶珊. 中國(guó)魚(yú)類系統(tǒng)檢索[M]. 北京： 科學(xué)出版社, 1987.

[3]遼寧省海洋局. 遼寧省海島資源綜合調(diào)查研究報(bào)告[M].北京： 海洋出版社, 1996： 357.

[4]唐啟升, 葉懋中. 山東近海漁業(yè)資源開(kāi)發(fā)與保護(hù)[M].北京： 農(nóng)業(yè)出版社, 1990： 80-102.

[5]Osamu Fukuhara, Toru Fushimi. Development and early live history of the greenlingsHexagrammos otakii(spices：Hexagrammidae) reared in the laboratory[J].Bulletin of the Japanese Society of Scientific Fishries,1983, 49(12)： 1843-1848.

[6]吳立新, 秦克靜, 姜志強(qiáng), 等. 大瀧六線魚(yú)(Hexagrammos otakii)人工育苗初步試驗(yàn)[J]. 海洋科學(xué),1996, 20(4)： 32-34.

[7]于鴻仙, 莊虔增, 徐春華, 等. 六線魚(yú)人工魚(yú)苗技術(shù)研究[J]. 齊魯漁業(yè), 1998, 15(5)： 21-24.

[8]莊虔增, 于鴻仙, 劉崗, 等. 六線魚(yú)苗種生產(chǎn)技術(shù)的研究[J]. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué), 1999, 6(1)： 103-106.

[9]康斌, 武云飛. 大瀧六線魚(yú)的營(yíng)養(yǎng)成分分析[J]. 海洋科學(xué), 1999, 23(6)： 23-25.

[10]Sang-Min L, Sung-Hwoan C, Kyoung-Duck K．Effect of dietary protein and energy levels on growth and body composition of juvenile flounderParalichthys olivaceus[J]. World Aquae Soc, 2000, 31(3)： 306-315.

[11]王書(shū)磊, 姜志強(qiáng), 苗治歐. 大連海區(qū)大瀧六線魚(yú)生物學(xué)指標(biāo)的季節(jié)變化[J]. 水產(chǎn)科學(xué), 2005, 24(5)： 1-3.

[12]劉奇, 王亮. 北黃海大瀧六線魚(yú)主要生物學(xué)特征比較研究[J]. 中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào), 2009, 39(Sup.)： 13-18.

[13]劉奇. 大瀧六線魚(yú)(Hexagrammos otakii)生物學(xué)特征與遺傳多樣性研究[D]. 山東： 青島海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文, 2010.

[14]Lu G, Li S. Advances in the study and application of fish mitochondrial DNA polymorphism[J]. Journal of Fisheries of China, 1998, 3： 94-103.

[15]呂國(guó)慶, 李思發(fā). 魚(yú)類線粒體 DNA多態(tài)研究和應(yīng)用進(jìn)展[J]. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué), 1998, 5(3)： 94-103.

[16]李春枝, 張邦杰, 李本旺, 等. 尖塘鱧屬魚(yú)類線粒體12SrRNA 基因序列分析[J]. 生態(tài)科學(xué), 2006, 25(5)：433-436.

[17]GattM H, FergusonM M, Liskauskas A P. Comparison of control region sequencing and fragment RFLP analysis for resolving mitochondrial DNA variation and phylogenetic relationships amongGreatLakesWal leyes[J]. Trans American Fish Soc, 2000, 129(6)：1288-1299.

[18]Zardoya R, Meyer A. Mitochondrial evidence on the phylogenetic position of caecilians (Amphibia Gynnnophiona) [J]. Geneties, 2000, 2： 765-775.

[19]李思發(fā), 呂國(guó)慶, 貝納切茲. 長(zhǎng)江中下游鰱鳙草青四大家魚(yú)線粒體DNA多樣性分析[J]. 動(dòng)物學(xué)報(bào), 1998,44(1)： 82-93.

[20]鄭冰蓉, 張亞平. 云南倒刺鲃mtDNAD-loop序列的遺傳多樣性研究[J]. 水利漁業(yè), 2002, 22(3)： 15-16.

[21]Ovenden J R, Lloyd J, Newman S J. Spatial genetic subdivision between northern Australian and southeast Asian populations ofPristipomoides multidens： a tropical marine reef fish species[J]. Fisheries Research,2002, 59： 57-69.

[22]胡文革, 段子淵, 王金富, 等. 新疆 3種雅羅魚(yú)線粒體 DNA 控制區(qū)序列的差異和系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系[J]. 遺傳學(xué)報(bào), 2004, 31(9)： 970-975.

[23]Wang J P, Lin H D, Huang S. Phylogeography ofVaricorhinus barbatulus( Cyprinidae) in Taiwan based on nucleotide variation of mtDNA and allozymes[J].Molecular Phylogenetics and Evolution, 2004, 31：1143-1156.

[24]夏穎哲, 盛巖, 陳宜瑜. 利用線粒體 DNA 控制區(qū)序列分析細(xì)鱗鮭種群的遺傳結(jié)構(gòu)[J]. 生物多樣性, 2006,14(1)： 48-54.

[25]李勝杰, 白俊杰, 葉星, 等. 基于線粒體D-loop區(qū)探討我國(guó)養(yǎng)殖大口黑鱸的分類地位和遺傳變異[J]. 海洋漁業(yè), 2008, 30(4)： 292-296.

[26]劉紅艷, 陳大慶, 劉紹平, 等. 長(zhǎng)江上游中華沙鰍遺傳多樣性研究[J]. 淡水漁業(yè), 2009, 39(3)： 8-13.

[27]彭士明, 施兆鴻, 陳超, 等. 根據(jù) mtDNA D-loop序列分析東海銀鯧群體遺傳多樣性[R]. 海洋科學(xué),2010, 34(2)： 28-32.

[28]代應(yīng)貴, 鄒習(xí)俊, 肖海. 四川裂腹魚(yú)烏江種群mtDNA控制區(qū)序列的遺傳多樣性分析[J]. 四川動(dòng)物,2010, 29(4)： 505-509.

[29]季維智, 宿兵. 遺傳多樣性研究的原理與方法[M].杭州： 浙江科學(xué)技術(shù)出版社, 1999.

[30]Nei M. Molecular Evolutionary Genetics [M]. New York： Columbia University Press, 1987.

[31]馮昭信, 韓華. 大瀧六線魚(yú)資源合理利用的研究[J].大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào), 1998, 13(2)： 24-28.

[32]Grant W S, Bowen B W. Population histories in deep evolutionary lineages of marine fishes： insights from sardines and anchovies and lessons for conservation [J].J Heredity, 1998, 89： 415-426.

[33]Ramirez-Macias D, Vazquez-Juarez R, Galvan-Magana F, et al. Variations of the mitochondrial control region sequence in whale sharks (Rhincodon typus) from the Gulf of California, Mexico [J]. Fisheries Research,2007, 84： 87-95.

[34]Fu Y X. Statistical tests of neutrality of mutations against population growth, hitchhiking and background selection [J]. Genetics, 1997, 147： 915-925.

[35]Wright S. Evolution and the Genetics of Populations.Vol. 4[M]// Variability Within and Among Natural Populations. Chicago： University of Chicago Press,1978.

[36]黃原. 分子系統(tǒng)學(xué)-原理、方法及應(yīng)用[M]. 北京： 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社, 1998.

Genetic diversity analysis between different stocks ofHexagrammos otakiibased on analysis of mitochondrial DNA control region partial sequence

LI Ying1, WANG Wei1, MENG Fan-ping1, LI Zhan-dong2
(1. Key Laboratory of North Mariculture, Ministry of Agriculture, Dalian Ocean University Dalian 116023, China;2. Donggang Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Liaoning Province, Donggang 118300, China)

May,17,2011

Hexagrammos otakii; wide stocks; mitochondrial DNA control region partial sequence; genetic diversity

Nucleotide sequences of mitochondrial DNA control region partial sequence from six wide stocks ofHexagrammos otakiiwere amplified using PCR technique. Twenty-two haplotypes were identified from 31 individuals according to the determined sequences. The value of Fu′s Fs of neutrality tests was -0.14881 (P＜0.01).AMOVA analysis demonstrated that theFstwas 0.7398 (P＜0.01), and 73.98% variances occurred among populations and 26.02% variances occurred within populations. The NJ and MP molecular phylogenetic trees constructed by the distances among different individuals were similar. The phylogenetic trees were all divided into two branches.The Qingdao population and one part of the Lvshun population made up one branch, the rest populations were clustered into the other branch. The results suggested that the genetic diversity of theHexagrammos otakiipopulations was abundant, and there was a huge genetic differentiation among populations. It was also verified that the gene sequence of mitochondrial DNA control region could be used to analyze the genetic diversity ofHexagrammos otakiiwithin or among populations.

Q347

A

1000-3096(2012)08-0040-07

2011-05-17;

2011-07-04

博士啟動(dòng)基金資助項(xiàng)目(SYYJ200805); 省教育廳計(jì)劃項(xiàng)目(2009A175)

李瑩(1985-), 女, 吉林通化人, 碩士研究生, 主要從事魚(yú)類群體遺傳學(xué)的研究, E-mail： 000liying000@163.com; 王偉, 通信作者,博士, E-mail： wangwei@dlou.edu.cn

譚雪靜)