劉 碩,李仲影,劉艷如,薛 毅,王 琳,仇立斌,李 煒
齦溝液血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平與牙周病變臨床指標(biāo)的關(guān)系
劉 碩1,李仲影1,劉艷如2,薛 毅2,王 琳1,仇立斌1,李 煒1
目的探討齦溝液中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)與牙周病變主要臨床指標(biāo)的關(guān)系。方法選擇牙周健康組12例,牙齦炎組12例,慢性牙周炎組24例(又分為靜止期和活動(dòng)期,各12例),采用酶聯(lián)免疫吸附 (ELISA)試驗(yàn)對(duì)齦溝液(gingival crevicular fluid,GCF)中VEGF的水平進(jìn)行檢測(cè),數(shù)據(jù)采集完成后應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果健康牙齦、慢性齦緣炎、慢性牙周炎靜止期至慢性牙周炎活動(dòng)期位點(diǎn) GCF中VEGF水平逐漸升高 (P<0.05),VEGF的濃度與牙齦指數(shù)(GI)、附著喪失(AL)呈正相關(guān);其相關(guān)系數(shù)分別是 0.341、0.325(P 均 <0.05),與牙周探診深度(PD)(r=0.236,P >0.05)無相關(guān)。結(jié)論齦溝液中VEGF水平與牙周病變發(fā)展密切相關(guān),VEGF水平有可能作為評(píng)價(jià)牙周組織炎性反應(yīng)與破壞程度的參考標(biāo)志。
血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子;齦溝液;慢性牙周炎
牙周病是以炎性反應(yīng)及牙周支持組織破壞為特點(diǎn)的感染性疾病,其病因多樣,發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,我國(guó)成年人患病率約為50%[1]。目前還沒有精確的方法監(jiān)測(cè)牙周組織炎性反應(yīng)的動(dòng)態(tài)變化,臨床上常用的牙周指標(biāo)如牙齦指數(shù)(gingival index,GI)、牙周探診深度(probing depth,PD)、牙齦附著喪失(attachment loss,AL)等來反映牙周炎性反應(yīng)和組織破壞的情況。觀察齦溝液的量和內(nèi)容物的變化,對(duì)了解牙周疾病的病情變化,評(píng)價(jià)治療效果等均有重要的臨床意義[2-8]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelialgrowth factor,VEGF)是一種特異性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的多功能細(xì)胞因子,有誘導(dǎo)血管生成的作用,與血管的發(fā)生和生長(zhǎng)有密切聯(lián)系[9]。近年許多學(xué)者研究證明,齦溝液(gingival Crevicular Fluid,GCF)中VEGF的水平高低與該部位的炎性反應(yīng)程度和骨破壞程度有關(guān)[10,11]。因此,為進(jìn)一步探討 VEGF與牙周病臨床指標(biāo)的關(guān)系,對(duì)齦溝液中VEGF的量及內(nèi)容物的變化進(jìn)行檢測(cè),為臨床治療提供參考。
1.1 對(duì)象 選取到武警河北總隊(duì)醫(yī)院口腔科門診就診并自愿參加本實(shí)驗(yàn)的牙周病患者36例,以及參加正常體檢的健康者12例。入選者全身無系統(tǒng)性疾病,6個(gè)月內(nèi)未曾服用任何抗生素及避孕藥物,未接受過牙周治療,婦女無妊娠及哺乳期;所有觀察牙牙體無齲壞及充填物,并排除吸煙、飲酒等不良生活習(xí)慣。所有患者均接受系統(tǒng)全口的牙周檢查,觀察牙拍數(shù)字化牙片,依據(jù)《牙周病學(xué)》[12]診斷標(biāo)準(zhǔn)分為牙周健康組、慢性齦緣炎組和慢性牙周炎組。依據(jù)華西醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院趙江川[13]提出的慢性牙周炎活動(dòng)期診斷標(biāo)準(zhǔn),將慢性牙周炎組分為靜止期組與活動(dòng)期組兩個(gè)亞組。各組資料如下:牙周健康組12例,其中男7例,女5例,年齡20~60歲,平均40.3 歲,要求 PD <2 mm,GI=0,AL=0 mm,X 線無牙槽骨吸收;慢性齦緣炎組12例,其中男6例,女6例,年齡20~63 歲,平均43.3 歲,要求 GI≥1,AL=0 mm,并排除青春期齦炎、妊娠期齦炎、增生性齦炎及其他牙齦病;慢性牙周炎靜止期組12例,男6例,女6例,年齡20~62歲,平均42.6歲;慢性牙周炎活動(dòng)期組12例,男7例,女5例,年齡22~66歲,平均46.2 歲;要求 PD≥4 mm,GI≥1,AL≥2 mm。各組間患者的年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
1.2 方法
1.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑 數(shù)字化牙科成像系統(tǒng)(Schick公司,美國(guó)),電子天平(BP110S,德國(guó)Sartorius公司),高速臺(tái)式離心機(jī)(LD4-2A型,r=8 cm,北京醫(yī)用離心機(jī)廠),Whatman 3號(hào)濾紙(Whatman公司,英國(guó)),VEGF ELISA試劑盒(Adlitteram Diagnostic Laboratories美國(guó))。
1.2.2 位點(diǎn)的選擇 牙周健康組選取右上第一磨牙為觀察牙;慢性齦緣炎組選取臨床癥狀最明顯的部位為觀察部位,如:牙齦紅腫,探診出血;慢性牙周炎組依據(jù)X線片所示,選取牙槽骨吸收并附著喪失最大者為觀察牙;上述人員如指定牙缺失者則選取左上第一磨牙為觀察牙。
1.2.3 齦溝液樣本的采集 隔濕取樣牙位,器械去除受試牙的齦上菌斑,吹干受試牙牙面及周圍牙齦黏膜,將準(zhǔn)備就緒的2條濾紙分別插入受試牙的近中頰和遠(yuǎn)中舌牙周袋內(nèi),遇到輕微阻力止,留置30 s后取出(舍去帶血或被唾液污染的標(biāo)本),稱重,減去原重量,換算成體積,-70℃冰箱保存待檢測(cè)。
1.2.4 觀察指標(biāo) 記錄受試牙PD、GI、AL;為防止臨床檢查對(duì)GCF質(zhì)和量的影響,臨床觀察指標(biāo)的檢測(cè)和記錄均在取樣后進(jìn)行。
1.2.5 齦溝液中VEGF的檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)齦溝液中VEGF水平進(jìn)行檢測(cè)。所有樣本收集完畢后,將冰凍樣本在室溫下解凍,加入100 μl PBS 緩沖液(0.01 mol/L,pH=7.4),微型混合器震蕩5 min,3000 r/min,10 min離心后取上清液用于檢測(cè)VEGF。用VEGF酶聯(lián)免疫試劑盒測(cè)定VEGF水平。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用 SPSS13.0軟件,4組間VEGF水平與GCF量的比較采用單因素方差分析,四組間兩兩比較采用LSD法;VEGF與GI的關(guān)系采用Spearma相關(guān)檢驗(yàn),VEGF與 PD、AL的關(guān)系采用Pearson相關(guān)檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
各組GCF量、VEGF濃度與牙周病變各指標(biāo)見表1。從健康牙齦、慢性齦炎、慢性牙周炎靜止期至慢性牙周炎活動(dòng)期位點(diǎn),GCF量及VEGF濃度均升高,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)。VEGF濃度與GI、AL存在正相關(guān)關(guān)系,相關(guān)系數(shù)分別是0.341、0.325(P均 <0.05),而與 PD 則無相關(guān)關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.236(P >0.05)。
表1 四組間每位點(diǎn)中VEGF濃度與GCF量及各項(xiàng)臨床檢驗(yàn)指標(biāo)的比較(n=12;±s)
表1 四組間每位點(diǎn)中VEGF濃度與GCF量及各項(xiàng)臨床檢驗(yàn)指標(biāo)的比較(n=12;±s)
注:與牙周健康組比較,①P<0.05;與慢性齦緣炎組,②P<0.05;與慢性牙周炎靜止期比較,③P<0.05
組別 GCF(μl) VEGF(ng/μl) 牙齦指數(shù) 牙周探診深度(mm)牙齦附著喪失(mm)牙周健康組0.767 ±0.358 23.519 ±13.376 0 1.517 ±0.420 0慢性齦緣炎組 1.125±0.617① 30.348±19.594① 1.530±0.674① 1.875±0.365 0慢性牙周炎靜止期組 1.483 ±0.781①② 34.039 ±28.125①② 1.751 ±0.622①② 3.267 ±1.614 4.167 ±1.642①②慢性牙周炎活動(dòng)期組 2.192 ±1.312①②③ 57.831 ±25.208①②③ 2.083 ±0.669①②③ 4.350 ±1.485 4.833 ±1.801①②③
牙齦炎性反應(yīng)的最初表現(xiàn)是齦溝探診出血,它比牙齦顏色及水腫的改變出現(xiàn)早[14],而且比較客觀,故臨床上常以探診后出血作為牙齦有無炎性反應(yīng)的一個(gè)可靠、安全、方便、客觀性的指標(biāo)。但由于炎性反應(yīng)和出血在牙齦炎和牙周炎中均可存在,不能區(qū)分牙周不同病變組織的變化,所以并不能明確診斷。本研究結(jié)果表明,齦溝液中VEGF的濃度與牙齦指數(shù)的相關(guān)系數(shù)為0.341,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)具有相關(guān)性。提示VEGF與牙齦指數(shù)可能和牙周的急性炎性反應(yīng)期有關(guān),牙齦炎與牙周炎在急性期時(shí),臨床表現(xiàn)為牙齦紅腫,有出血傾向,與齦溝液中的VEGF的促血管生成可增加血管通透性的作用有關(guān),其機(jī)制尚需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。但根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)原理,表示關(guān)系密切程度的確定系數(shù)r2為0.116,表明齦溝液中影響VEGF的濃度因素中僅有11.6%與牙齦指數(shù)有關(guān),數(shù)值并不大,尚不能說明齦溝液中VEGF的濃度變化與牙齦指數(shù)變化具有明顯相關(guān)性,這可能是由于GI主要反映牙齦組織的炎性反應(yīng)程度,不能反映深部牙周支持組織的炎性反應(yīng)和破壞程度。同理推測(cè)牙齦出血癥狀是較粗糙的臨床指征,僅依據(jù)牙齦出血判定牙周炎是否處于活動(dòng)性病變并不十分準(zhǔn)確,需參考其他指標(biāo)綜合判定。
牙周袋是病理性加深的齦溝,也是牙周炎的重要病理改變之一,是否存在真性牙周袋是牙周炎和齦炎的重要區(qū)別。本研究結(jié)果顯示,齦溝液中VEGF的濃度與牙周探診深度的相關(guān)系數(shù) r為0.236,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)無相關(guān)性,這可能由于牙周探診受許多因素的影響,如所用探針的設(shè)計(jì),探診力量、方向、位置,根面上附著牙石,牙齦炎性反應(yīng),牙鄰面接觸區(qū)阻擋,牙根外形,以及觸覺誤差、視覺誤差、記錄誤差等。研究發(fā)現(xiàn),牙齦炎是影響PD測(cè)量值的重要因素之一。健康牙齦在一般探診壓力下,探針尖端越過齦溝底而終止于結(jié)合上皮內(nèi),而在有炎性反應(yīng)的牙齦,由于組織水腫,結(jié)締組織內(nèi)的膠原纖維大部分破壞,同樣的探診力量可使探針穿透袋底部而達(dá)到結(jié)締組織內(nèi),終止于炎性反應(yīng)區(qū)外圍的正常膠原纖維的冠方,導(dǎo)致PD值增加。研究還發(fā)現(xiàn),臨床探診檢查時(shí),不同檢查者之間探診力量不同,同一檢查者探診不同位點(diǎn)時(shí)探診力量也不同,范圍為 5 ~135 g[15]。
牙周附著水平是衡量和判斷牙周組織狀況的一個(gè)重要指標(biāo),附著喪失能客觀地反映出牙周組織的破壞程度[16]。本研究結(jié)果顯示,齦溝液中VEGF的濃度與附著喪失的相關(guān)系數(shù)r為0.325,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)有相關(guān)性。Prapulla等[17]也曾做過類似研究,結(jié)果與本試驗(yàn)一致,他認(rèn)為VEGF在牙周組織的破壞中發(fā)揮一定的作用,其濃度水平可以在一定程度上反映牙周的破壞程度。但根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)原理,表示關(guān)系密切程度的確定系數(shù)r2為0.106,提示在影響齦溝液VEGF濃度的因素中,有10.6%與附著喪失有關(guān),數(shù)值并不大,尚不能提示齦溝液VEGF的濃度變化與附著喪失變化強(qiáng)烈相關(guān),需要進(jìn)一步研究。
[1]戈春城,邱 懿.恩施4994名成年人牙周病患病率調(diào)查分析[J].湖北民族學(xué)院學(xué)報(bào)醫(yī)學(xué)版,2009,26(4):31-33.
[2]Griffiths G S.Formation,collection and significance of gingival crevice fluid[J].Periodontol,2003,31:32 -42.
[3]Uitto V J.Gingival crevice fluid-an introduction[J].Periodontol,2003,31:9 -11.
[4]Delima A J,Van Dyke T E.Origin and function of the cellular components in gingival crevice fluid[J].Periodontol,2003,31:55 -76.
[5]Goodson J M.Gingival crevice fluid flow[J].Periodontol,2003,31:43 -54.
[6]汪戰(zhàn)紅,李德懿.牙周病診斷方法研究進(jìn)展[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)口腔醫(yī)學(xué)分冊(cè),2002,3(29):80-82.
[7]Kantarci A,Hasturk H,Van Dyke T E,et al.Hostmediated resolution of inflammation in periodontal diseases[J].Periodontol,2006,40:144 -163.
[8]Loos B J,Tjoa S.Host-derived diagnostic markers for periodontitis:do they exist in gingival crevice fluid?[J].Periodontol,2005,39:53 -72.
[9]Kiselyov A,Balakin K V,Tkachenko S E.VEGF/VEGFR Signalling as a target for inhibiting angiogenesis[J].Expert Opin Investig Drugs,2007,16(1):83 -107.
[10]陳智濱,孫曉軍,寇傳哲,等.齦溝液微量樣本中多種成分的檢測(cè)[J].北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2008,40(1):57-59.
[11]陳 悅,茍建重,李 昂.齦溝液中MMP-2,9的量與牙周炎的關(guān)系[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)報(bào)),2005,26(3):294-297.
[12]曹采芳.牙周病學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:109-130.
[13]趙川江,吳亞菲,張靜儀.活動(dòng)期與靜止期牙周炎患牙齦溝液中IL-6的含量[J].華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2001,32(3):444-445.
[14]Newbrun E.Indices to measure gingival bleeding[J].J Periodontol,1996,67(6):555 -561.
[15]Freed H,Gapper R,Kalkwarf K.Evaluation of periodontal probing forces.J Periodontol,1983,54(8):488 -492.
[16]Eley B M,Cox S W.Advances in periodontal diagnosis.1.Traditional clinical methods of diagnosis[J].Br Dent J,1998,184(1):12 -16.
[17]Prapulla D V,Sujatha P B,Pradeep A R,et al.Gingival crevicular fluid VEGF levels in periodontal health and disease[J].J Periodontol,2007:78(9):1783 -1387.
Vascular endothelial growth factor level in gingival crevicular fluid in periodontal disease
LIU Shuo1,LI Zhongying1,LIU Yanru2,XUE Yi2,WANG Lin1,QIU Libin1,and LI Wei1.1.Hebei Provincial Corps Hospital of Chinese People’s Armed Polices Forces,Shijiazhuang 050081,China;2.Bethune International Peace Hospital,Shijiazhuang 050071,China
ObjectiveTo study the relationship between the vascular endothelial growth factor(VEGF)level in gingival crericalar fluid(GCF)and periodontal clinical parameters.Methods The GCF samples were collected in 12 periodontally healthy individuals,12 gingivitis and 24 chronic periodontitis patients.VEGF levels in GCF were measured by enzyme - linked immunosorbent assay(ELISA).The data were analyzed using SPSS13.0 software package.Results The VEGF concentrations were higher in patients with periodontal disease than in persons with healthy gingiva.There was a statistical difference between the four groups(P <0.05).The concentration of VEGF in GCF was positivly related to gingival index(GI)and attachment loss(AL)and not related to probing depth(PD) .Conclusions VEGF level in GCF is closly related progression of periodontal disease,and can be regarded as an useful index to reflect the status of periodontal disease.
vascular endothelial growth factor;gingival crevicular fluid;chronic periodontitis
R781.41
劉 碩,男,1974年出生。碩士,主治醫(yī)師,主要從事口腔治療和修復(fù)工作。
1.050081 石家莊,武警河北總隊(duì)醫(yī)院;2.050071 石家莊,白求恩國(guó)際和平醫(yī)院
(2012-06-13收稿 2012-10-09修回)
(責(zé)任編輯 武建虎)