趙運勝，王猛，李軍良，吳俠，李洪臣

血清高爾基體蛋白73、異常凝血酶原、磷脂?；嫉鞍拙厶牵?和甲胎蛋白聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的早期診斷價值研究

趙運勝，王猛，李軍良，吳俠，李洪臣

目的探討血清高爾基體蛋白73(GP73)、異常凝血酶原(DCP)、磷脂酰基醇蛋白聚糖－3(GPC－3)和甲胎蛋白(AFP)聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌(PHC)的早期診斷價值。方法選擇2011年4—9月在我院就診的消化系統(tǒng)疾病患者共110例，根據(jù)患者疾病分為PHC組50例、慢性肝炎組20例、肝硬化組20、其他消化系統(tǒng)惡性腫瘤組(其他腫瘤組)20例。選擇同期我院健康體檢正常者20例為對照組。采用酶聯(lián)免疫法檢測各組血清GP73、DCP、GPC－3水平，電化學發(fā)光法測定AFP水平。評價各指標單獨和聯(lián)合檢測對早期PHC的診斷價值。結(jié)果各組血清GP73、DCP、GPC－3和AFP水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。GP73、DCP、GPC－3和AFP診斷早期PHC的曲線下面積(AUG)分別為0.824〔95%CI(0.735，0.912)〕、0.640〔95%CI(0.533，0.746)〕、0.635〔95%CI(0.527，0.743)〕和0.668〔95%CI(0.564，0.773)〕。將慢性肝炎組、肝硬化組、其他腫瘤組及對照組合并為非PHC組，與PHC組進行比較:單項檢測以GP73靈敏度和準確率最高，以GPC－3特異度最高;聯(lián)合檢測以GP73/AFP靈敏度和準確率最高，系列試驗中GP73與其他任何一項或幾項指標聯(lián)合的特異度均可達100.0%。結(jié)論單獨檢測GP73對早期PHC診斷價值優(yōu)于AFP，單獨檢測DCP或GPC－3對早期PHC有一定的鑒別診斷價值，與AFP相當，GP73、DCP、GPC－3和AFP聯(lián)合檢測對早期PHC有較好的診斷價值，可根據(jù)臨床實際選擇不同的項目組合。

肝腫瘤;高爾基體蛋白73;異常凝血酶原;磷脂?；嫉鞍拙厶穷?甲胎蛋白類

R 735.7

A

1007－9572(2012)11－3730－04

原發(fā)性肝癌(PHC)是世界上致死率最高的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率有逐年上升的趨勢［1］。早期診斷PHC是治療和延長PHC患者生存期的最主要策略。血清甲胎蛋白(AFP)是目前檢測PHC最常用的腫瘤標志物，但其靈敏度和特異度較差，對PHC的早期診斷價值有限［2］。血清高爾基體蛋白73(GP73)、異常凝血酶原(DCP)和磷脂?；嫉鞍拙厶牵?(GPC－3)有望成為PHC早期診斷及判斷預后的新標記物［2］。GP73是一種定位于高爾基體的Ⅱ型跨膜蛋白，病毒感染或PHC患者血清中GP73水平顯著升高［3－4］，文獻報道其診斷PHC的敏感度為69%、特異度為90%［5］。DCP可以在PHC患者、維生素K缺乏者及服用華法林患者的血清中測得，其在PHC患者血清中的表達水平與瘤灶大小、腫瘤數(shù)量、血管浸潤程度及肝內(nèi)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［6］，是判斷PHC進展程度及預后的重要指標［7］。GPC－3是一種膜性硫酸乙酰肝素糖蛋白，在PHC患者癌細胞中高表達［8］，對PHC的早期診斷和良惡性腫瘤的鑒別診斷有較高特異度［9］。

但上述血清標記物既有自身獨到的診斷價值，也有自身局限性。有研究提議，將GP73與其他常用腫瘤標記物聯(lián)合檢測以提高PHC早期診斷水平［10］。本研究旨在探討GP73、DCP、GPC－3和AFP聯(lián)合檢測對PHC的早期診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2011年4—9月在我院就診的消化系統(tǒng)疾病患者共110例，根據(jù)患者疾病進行分組:(1)PHC組50例，其中男38例，女12例;年齡32～81歲，平均57歲;均經(jīng)病理檢查明確診斷為早期PHC。(2)慢性肝炎組20例，其中男11例，女9例;年齡36～57歲，平均48歲。(3)肝硬化組20例，其中男15例，女5例;年齡41～81歲，平均55歲。(3)其他消化系統(tǒng)惡性腫瘤組(其他腫瘤組)20例，其中男14例，女6例;年齡47～78歲，平均69歲。選擇同期我院健康體檢正常者20例為對照組，其中男10例，女10例;年齡21～45歲，平均34歲。

1.2 檢測方法采用促凝管采集受檢者清晨空腹肘靜脈血3 ml，離心半徑r=16 cm，3 000 r/min離心10 min分離血清，－80℃冰箱保存。采用CODA全自動酶標儀檢測受檢者GP73、DCP、GPC－3水平，檢測方法采用酶聯(lián)免疫定量方法，試劑盒均購自上海瑞奇科技有限公司;采用羅氏2010電化學發(fā)光儀檢測其AFP水平，檢測方法采用羅氏電化學發(fā)光法，試劑盒購自上海羅氏診斷產(chǎn)品有限公司。上述指標的檢測均嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.3 觀察內(nèi)容檢測各組血清GP73、DCP、GPC－3和AFP水平并比較其差異;分析各指標診斷早期PHC的曲線下面積(AUG)及95%可信區(qū)間(95%CI)、臨界值。評價多指標聯(lián)合檢測的意義，聯(lián)合檢測分為系列試驗和平行試驗。系列試驗也稱串聯(lián)試驗，是指采用幾種篩查方法檢測疾病，只有全部指標均為陽性才判為陽性，凡有一項指標為陰性即判為陰性;平行試驗也稱并聯(lián)試驗，是指采用幾種篩查方法檢測疾病，凡有一項指標為陽性即判為陽性，所有指標均為陰性才判為陰性。1.4統(tǒng)計學方法應用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行分析，偏態(tài)分布的計量資料采用M(QR)表示，多組間比較采用Kruskal－Wallis檢驗，兩兩比較采用Nemeny法;計數(shù)資料采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。各指標診斷早期PHC的靈敏度、特異度和AUG等通過繪制受試者工作特征曲線(ROC曲線)獲得。

2 結(jié)果

2.1 各組血清GP73、DCP、GPC－3和AFP水平比較各組血清GP73水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);其中PHC組與慢性肝炎組(U=129.00)、肝硬化組(U=280.00)、其他腫瘤組(U=183.00)、對照組(U=114.00)比較，肝硬化組和其他腫瘤組與慢性肝炎組(U值分別為57.50和87.00)比較，肝硬化組和其他腫瘤組與對照組(U值分別為43.00和48.50)比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。各組血清DCP水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);其中PHC組與慢性肝炎組(U=301.50)、其他腫瘤組(U=338.00)、對照組(U=264.00)比較，肝硬化組和其他腫瘤組與對照組(U值分別為71.50和71.00)比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。各種血清GPC－3水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);其中PHC組與慢性肝炎組(U=347.00)、其他腫瘤組(U=350.00)、對照組(U=261.50)比較，肝硬化組與對照組(U=69.50)比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。各組血清AFP水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);其中PHC組與慢性肝炎組(U=338.00)、肝硬化組(U=344.00)、其他腫瘤組(U=348.00)、對照組(U=164.00)比較，慢性肝炎組、肝硬化組和其他腫瘤組與對照組(U值分別為33.00、70.50、57.00)比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，見表1)。

表1 各組血清GP73、DCP、GPC－3和AFP水平比較〔M(QR)，μg/L〕Table 1 Comparison of serum GP73，DCP，GPC－3 and AFP levels in each group

2.2 GP73、DCP、GPC－3和AFP對早期PHC的診斷價值

GP73、DCP、GPC－3和AFP診斷早期PHC的AUG分別為0.824〔95%CI(0.735，0.912)〕、0.640〔95%CI(0.533，0.746)〕、0.635〔95%CI(0.527，0.743)〕和0.668〔95%CI(0.564，0.773)〕。GP73、DCP、GPC－3和AFP診斷早期PHC的臨界值分別為72.7 μg/L、37.5 μg/L、20.7 μg/L和108.0 μg/L(見圖1)。

圖1 GP73、DCP、GPC－3和AFP診斷早期PHC的ROC曲線Figure 1 ROC curve of GP73，DCP，GPC－3 and AFP for diagnosis of early PHC

2.3 GP73、DCP、GPC－3和AFP單項及聯(lián)合檢測對早期PHC的診斷價值將慢性肝炎組、肝硬化組、其他腫瘤組及對照組合并為非PHC組，與PHC組進行比較:單項檢測以GP73靈敏度和準確率最高，以GPC－3特異度最高;聯(lián)合檢測以GP73/AFP靈敏度和準確率最高，系列試驗中GP73與其他任何一項或幾項指標聯(lián)合的特異度均可達100.0%(見表2)。

表2 GP73、DCP、GPC－3和AFP單項及聯(lián)合檢測對早期PHC的診斷價值比較Table 2 Comparison of diagnosis value about single and combined examination of GP73，DCP，GPC－3 and AFP for early PHC

3 討論

PHC的治療效果取決于早期診斷，GP73是新近發(fā)現(xiàn)的PHC血清標記物之一［11］。本研究結(jié)果顯示，早期PHC患者血清GP73水平高于慢性肝炎、肝硬化、其他消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者及正常人群，肝硬化及其他消化系統(tǒng)腫瘤患者高于慢性肝炎患者及正常人群，與以往研究結(jié)果基本一致［12－13］。GP73單獨診斷早期PHC的AUG為0.824，靈敏度為72.0%，特異度為95.0%，診斷價值明顯優(yōu)于AFP，與Drake等［5］研究結(jié)果一致。但Ozkan等［14］報道，GP73診斷早期PHC的靈敏度和特異度與AFP相當或更低，因此，單獨檢測GP73對PHC的早期診斷價值有待進一步研究探討。

本研究結(jié)果顯示，早期PHC患者血清DCP水平高于慢性肝炎、其他消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者及正常人群，肝硬化、其他消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者高于正常人群，與Yamashiki等［15］研究結(jié)果一致。但單獨檢測DCP診斷早期PHC的AUG為0.640，靈敏度僅為44.0%，與文獻報道其敏感度較差一致［7］;而DCP可能與PHC的肝內(nèi)轉(zhuǎn)移尤其是門脈轉(zhuǎn)移相關(guān)，在預測肝癌預后方面可能優(yōu)于AFP［16］。GPC－3與DCP診斷早期PHC的AUG和靈敏度相似，但其特異度較高，在區(qū)分良惡性腫瘤及判斷疾病預后方面效果較好［9］。因此，DCP和GPC－3對早期PHC有較好的鑒別診斷價值。AFP是目前臨床應用最廣泛的PHC腫瘤標記物，本研究結(jié)果顯示，早期PHC患者血清AFP水平高于慢性肝炎、肝硬化、其他消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者及正常人群，且慢性肝炎、肝硬化及其他消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者AFP均高于正常人群;單獨檢測AFP診斷早期PHC的AUG為0.668，靈敏度為52.0%，特異度為92.5%。徐萬菊等［17］報道，血清AFP水平在肝癌、胃癌、肺癌、胰腺癌、膽管腫瘤及睪丸腫瘤患者中均明顯升高，提示AFP診斷早期PHC的特異度較差，鑒別診斷價值有限。

聯(lián)合檢測結(jié)果表明，GP73、DCP、GPC－3和AFP聯(lián)合檢測可提高診斷早期PHC的靈敏度和特異度。在系列實驗中，GP73和其他任何一項指標聯(lián)合檢測的特異度都可達100.0%，繼續(xù)增加其他聯(lián)合檢測的指標意義不大，因此可將其作為診斷早期PHC的較好的腫瘤標記物。在平行實驗中，以GP73/AFP的靈敏度最高，繼續(xù)增加其他聯(lián)合檢測的指標意義也不大，且聯(lián)合檢測所有組合中以GP73/AFP準確率最高，診斷價值最好。臨床上應根據(jù)工作需要和患者特點選擇不同的項目組合，多種腫瘤標記物聯(lián)合檢測對提高PHC早期診斷率有重要價值［10］。

綜上所述，單獨檢測GP73對早期PHC診斷價值優(yōu)于AFP，單獨檢測DCP或GPC－3對早期PHC有一定的鑒別診斷價值，與AFP相當，GP73、DCP、GPC－3和AFP聯(lián)合檢測對早期PHC有較好的診斷價值，可根據(jù)臨床實際選擇不同的項目組合。但本研究樣本量較小，所使用的統(tǒng)計軟件本身可能存在一定的局限性，數(shù)據(jù)處理過程中存在一定的誤差，GP73、DCP、GPC－3和AFP聯(lián)合檢測對早期PHC的診斷價值及其評價PHC手術(shù)效果、判斷預后的價值，均有待更大規(guī)模的多中心聯(lián)合的臨床試驗進一步研究驗證。

1 Asmaa I Gomaa，Shahid A Khan，Edward LS Leen，et al．Diagnosis of hepatoellular carcinoma［J］．World J Gastroenterol，2009，15(11):1301－1314．

2 徐海峰，楊華瑜，張宏冰，等.改變肝癌早期診斷和治療現(xiàn)狀的新肝癌血清標志物［J］.基礎醫(yī)學與臨床，2008，28(1):104－108．

3 李利軍，李新豐，王高雄.GP73聯(lián)合AFP、VEGF檢測對原發(fā)性肝癌的診斷價值［J］.世界華人消化雜志，2009，17(29):3056－3060．

4 Block TM，Comunale MA，Lowman M，et al．Use of target glycoproteomics to identify serum glycoproteins that correlate with liver cancer in woodchucks and humans［J］．Proc Natl Acad Sci USA，2005，102(3):779－784．

5 Drake RR，Schwegler EE，Malik G，et al．Lectin capture strategies combined with mass spectrometry for the discovery of serum glycoprotein biomarkers［J］．Mol Cell Proteomics，2006，5(10):1957－1967．

6 Inagaki Y，Tang W，Makuuchi M，et al．Clinical and molecular insights into the hepatocellular carcinoma tumour marker des－γ－carboxyprothrombin［J］．Liver Int，2011，31(1):22－35．

7 Bertino G，Ardiri AM，Calvagno GS，et al．Prognostic and diagnostic value of des－γ－carboxy prothrombin in liver cancer［J］．Drug News Perspect，2010，23(8):498－508．

8 Nassar A，Cohen C，Siddiqui MT．Utility of glypican－3 and survivin in differentiating hepatocellular carcinoma from benign and preneoplastic hepatic lesions and metastatic carcinomas in liver fine－needle aspiration biopsies［J］．Diagn Cytopathol，2009，37(9):629－635．

9 Liu H，Li P，Zhai Y，et al．Diagnostic value of glypican－3 in serum and liver for primary hepatocellular carcinoma［J］．World J Gastroenterol，2010，16(35):4410－4415．

10 許文芳，費迎明，周建康，等.血清GP73、AFP和AFP－L3聯(lián)合檢測在原發(fā)性肝癌診斷中的價值［J］.中華實驗和臨床病毒學雜志，2011，25(4):286－288．

11 Hu JS，Wu DW，Liang S，et al．GP73，a resident Golgi glycoprotein，is sensibility and specificity for hepatocellular carcinoma of diagnosis in a hepatitis B－endemic Asian population［J］．Med Oncol，2010，27(2):339－345．

12 Liu X，Wan X，Li Z，et al．Golgi protein 73(GP73)，a useful serum marker in liver diseases［J］．Clin Chem Lab Med，2011，49(8):1311－1316．

13 Morota K，Nakagawa M，Sekiya R，et al．A comparative evaluation of Golgi protein－73，fucosylated hemopexin，α－fetoprotein，and PIVKA－Ⅱin the serum of patients with chronic hepatitis，cirrhosis，and hepatocellular carcinoma［J］．Clin Chem Lab Med，2011，49(4):711－718．

14 Ozkan H，Erdal H，Tutkak H，et al．Diagnostic and prognostic validity of Golgi protein 73 in hepatocellular carcinoma［J］．Digestion，2011，83(1－2):83－88．

15 Yamashiki N，Sugawara Y，Tamura S，et al．Diagnostic accuracy of α－fetoprotein and des－γ－carboxy prothrombin in screening for hepatocellular carcinoma in liver transplant candidates［J］．Hepatol Res，2011，41(12):1199－1207．

16 Yamamoto K，Imamura H，Matsuyama Y，et al．AFP，AFP－L3，DCP，and GP73 as markers for monitoring treatment response and recurrence and as surrogate markers of clinicopathological variables of HCC［J］．J Gastroenterol，2010，45(12):1272－1282．

17 徐萬菊，趙莉，馬萬山.甲胎蛋白異質(zhì)體與高爾基體蛋白73在肝細胞癌診斷中的應用進展及展望［J］.醫(yī)學檢驗與臨床，2010，21(1):71－75．

Clinical Significance of Serum GP73，DCP，GPC－3 and AFP Tests in Diagnosis of Primary Hepatic Carcinoma

ZHAO Yun－sheng，WANG Meng，LI Jun－liang，et al．Department of Clinical Laboratory，the First Hospital of Qinhuangdao，Qinhuangdao 066000，China

ObjectiveTo investigate the clinical value of serum Glogi glycoprotein 73(GP73)，des－γ－carboxy prothrombin(DCP)，glypican－3(GPC－3)and alpha－fetoprotein(AFP)tests for early diagnosis of primary hepatic carcinoma(PHC)．MethodsTotally 50 cases of PHC(PHC group)，20 cases of chronic hepatitis(CH group)，20 cases of liver cirrhosis(LC group)，20 cases of malignant tumors of digestive system except hepatic carcinoma(DS group)，and 20 cases of healthy controls(control group)were enrolled in this study．Serum GP73，DCP，and GPC－3 levels were detected using enzyme－linked immunosorbent assay．AFP was detected by electrochemiluminescence reaction.ResultsThe serum GP73，DCP，GPC－3，and AFP levels were significantly different among these five groups．The area under curve(AUC)of GP73，DCP，GPC－3，and AFP for diagnosing the early PHC was 0.824〔95%CI(0.735，0.912)〕，0.640〔95%CI(0.533，0.746)〕，0.635〔95%CI(0.527，0.743)〕，and 0.668〔95%CI(0.564，0.773)〕．Comparison between the non－PHC group(including the CH group，LC group，DS group，and control group)and PHC group showed that GP73 had the highest sensitivity and accuracy and GPC－3 had the highest specificity．When applied in a combined manner，GP73/AFP had the highest sensitivity and accuracy．During the consequent tests，GP73，when used consequently with other tests，yielded a specificity of 100.0%．ConclusionWhen used alone，GP73 has superior diagnostic value than AFP for early PHC．Either DCP or GPC－3 has similar value as AFP for the differential diagnosis of early PHC．The combined GP73，DCP，GPC－3，and AFP tests has good diagnostic value for early PHC，and can be applied based on the specific clinical conditions．

Liver neoplasms;Glogi glycoprotein 73;Des－γ－carboxy prothrombin;Glypicans;Alpha－fetoproteins

10.3969/j.issn.1007－9572.2012.11.053

066000河北省秦皇島市第一醫(yī)院檢驗科

趙運勝，066000河北省秦皇島市第一醫(yī)院檢驗科;E－mail:zhao_yun_sheng_sh@yahoo.cn

2012－06－30;

2012－10－15)

(本文編輯:鹿飛飛)