金 露 張 妤 虞選柯 郭應(yīng)建 陸雪嬌 關(guān)允詩 黃光榮*

（中國計(jì)量學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，杭州 310018）

高效液相色譜法測定月餅中3種防腐劑*

金 露**張 妤 虞選柯 郭應(yīng)建 陸雪嬌 關(guān)允詩 黃光榮***

（中國計(jì)量學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，杭州 310018）

利用高效液相色譜法測定5種月餅樣品中的3種常見防腐劑苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸的含量。樣品經(jīng)提取、脫蛋白、膜過濾后，用高效液相色譜進(jìn)行測定。結(jié)果表明，3種防腐劑的測定線性相關(guān)性均在0.99以上，檢測線性范圍為10 μg/mL～200 μg/mL。該方法應(yīng)用于5種月餅中苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸的測定結(jié)果表明，5種樣品均檢出山梨酸，3種樣品檢出有脫氫乙酸，均未檢出苯甲酸。

高效液相色譜；月餅；防腐劑

月餅是我國人們?cè)谥星锕?jié)前后普遍消費(fèi)的一類大眾食品，種類各式各樣，其保質(zhì)期也各不相同。2011年6月20日起，我國實(shí)施新的國家標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)——食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》，與2007版標(biāo)準(zhǔn)相比，有27類食品添加劑被限制使用，其中包括在月餅中不得使用苯甲酸及傳統(tǒng)抗氧化劑BHA（丁基羥基茴香醚）、BHT（二丁基甲基甲苯）和TBHQ（特丁基對(duì)苯二酚）。因此，月餅的保質(zhì)期相比以前都將會(huì)大大縮短。目前，月餅的保質(zhì)期一般30 d～60 d，有的只有15 d左右。

為防止月餅及餡料不腐敗變質(zhì)，添加防腐劑是一種有效的方法。防腐劑雖可抑制食品中微生物的繁殖，但添加過量，不僅能破壞VB1，還可能使鈣形成不溶物，影響人體對(duì)鈣的吸收；另外，防腐劑對(duì)人胃腸有刺激作用，過量食用還可能引發(fā)癌癥。苯甲酸在酸性條件下抑菌范圍廣、價(jià)格低廉，在以前的食品防腐中被廣泛應(yīng)用，但是苯甲酸的毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于山梨酸；山梨酸及其鉀鹽的毒性相對(duì)較小，抗菌力強(qiáng)，是月餅中最常使用的防腐劑之一；脫氫乙酸具有較強(qiáng)的抑制細(xì)菌、霉菌及酵母菌的作用，尤其對(duì)霉菌的抑制作用很強(qiáng)，是一種廣譜、高效的防霉、防腐劑，同時(shí)其脂溶性強(qiáng)、熱穩(wěn)定性極高，尤其適用于熱加工食品。現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)GB2760-2011《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定月餅防腐劑中禁用苯甲酸，山梨酸及其鉀鹽最大使用量1.0 g/kg（以山梨酸計(jì)），脫氫乙酸及其鈉鹽最大使用量0.50 g/kg（以脫氫乙酸計(jì)）。

本次研究采用高效液相色譜法分別對(duì)市售5種月餅樣品中的防腐劑苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸的含量進(jìn)行了測定。

1 材料與方法

1.1 主要儀器和試劑

儀器：高效液相色譜儀（LC-15C），數(shù)控超聲波清洗器（KQ2200DE），電子天平（JA2003），臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（CT14RD）。

試劑：甲醇為色譜純?cè)噭郊姿?、山梨酸和脫氫乙酸為色譜級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品，水為超純水，其他試劑均為分析純。

1.2 色譜條件

測定苯甲酸和山梨酸鉀色譜條件：Diamonsil C18色譜柱（250×4.6 mm，5 μm）；柱溫40℃；流動(dòng)相為甲醇-0.02 mol/L乙酸銨（體積比5∶95）；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；檢測波長230 nm。

測定脫氫乙酸色譜條件：Diamonsil C18色譜柱（250×4.6 mm，5 μm）；柱溫30℃；流動(dòng)相為甲醇-0.02 mol/L乙酸銨（體積比10∶90）；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；檢測波長293 nm。

均采用色譜峰的保留時(shí)間來定性，以外標(biāo)法峰面積來定量計(jì)算含量。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品，用超純水溶解并定容，配成質(zhì)量濃度為1.000 mg/mL的儲(chǔ)備液，4℃冰箱保存。

工作液：準(zhǔn)確量取適量的苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸的儲(chǔ)備液，以超純水逐級(jí)稀釋，配制成系列濃度的工作溶液，過孔徑0.22 μm濾膜，取10 μL進(jìn)樣分析。

1.4 樣品的預(yù)處理

用刀把5種月餅樣品分別切碎、擠壓，呈肉眼看不到大顆粒的均勻黏糊狀。

測定苯甲酸、山梨酸的樣品前預(yù)處理方法：準(zhǔn)確稱取5.0 g均勻黏糊狀樣品于25 mL容量瓶中，加入10 mL超純水，再先后加入0.5 mL 0.5 mol/L氫氧化鈉溶液、4 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%亞鐵氰化鉀溶液和4 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%乙酸溶液，震蕩混勻后用稀醋酸調(diào)pH至7.0～8.0，用超純水定容。混勻靜置30 min，待沉淀蛋白后，用濾紙過濾，濾液再經(jīng)孔徑0.22 μm微孔濾膜過濾，收集濾過液于樣品瓶中保存，供高效液相色譜測定。每個(gè)樣品做3次重復(fù)，以平均值計(jì)算含量。

測定脫氫乙酸的樣品預(yù)處理方法：準(zhǔn)確稱取5.0 g均勻黏糊狀樣品于25 mL容量瓶中，加入約10 mL超純水，然后加入5 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)12%硫酸鋅溶液，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7～8，超聲提取10 min，再以超純水定容至刻度；將提取液過濾后取適量濾液轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，加入10 mL正己烷，振搖1 min，靜置分層，棄去正己烷層，再加入10 mL正己烷重復(fù)進(jìn)行萃取；取下層水相離心（4 000 r/min，10 min）；取上清液過孔徑 0.22 μm濾膜，收集濾過液于樣品瓶中保存，供高效液相色譜測定。

2 結(jié)果與分析

圖1 苯甲酸HPLC測定標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別在苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸的高效液相色譜測定條件下測定，以峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)液濃度為橫坐標(biāo)，線性擬和得到苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸3種防腐劑高效液相法測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1、圖2和圖3所示。結(jié)果表明，苯甲酸在 10 μg/mL～200 μg/mL、山梨酸在 20 μg/mL～200 μg/mL、脫氫乙酸在 1 μg/mL～200 μg/mL濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)平方值（R2）分別為0.999 9、0.997 4和0.994 0，可以應(yīng)用于樣品中3種防腐劑的檢測。

圖2 山梨酸HPLC測定標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖3 脫氫乙酸HPLC測定標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 樣品測定

在標(biāo)準(zhǔn)色譜條件下，我們對(duì)市場購買的5種月餅樣品進(jìn)行了苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸3種防腐劑的含量測定，結(jié)果如表1所示。在5種月餅樣品中均檢出山梨酸，含量在111.9 mg/kg～180.2 mg/kg之間，符合GB2760-2011的要求（≤1.0 g/kg）；三種月餅樣品中檢出脫氫乙酸，含量在16.8 mg/kg～137.8 mg/kg之間，2種月餅樣品中未檢出，也符合新標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定（≤0.5 g/kg）；5種月餅中均未檢出苯甲酸。

表1 市售月餅樣品中苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸的含量測定

3 結(jié) 論

高效液相色譜法可以很好地檢測月餅樣品的苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸3種食品防腐劑。在5種月餅樣品中，均檢出山梨酸，含量符合新的國家標(biāo)準(zhǔn)；部分樣品中檢出脫氫乙酸，其含量也符合新的國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定；5種樣品中均未檢出苯甲酸。市售5種月餅中主要依靠山梨酸來防腐，部分月餅同時(shí)使用山梨酸和脫氫乙酸來防腐。

［1］中華人民共和國衛(wèi)生部.GB 2760-2011食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)——食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2011.

［2］程盛華，丁麗，林玲，等.高效液相色譜法同時(shí)測定月餅中的苯甲酸、山梨酸和糖精鈉［J］.食品科學(xué)，2008，29（6）：376-378.

［3］義志忠，彭寨玉.高效液相色譜法測定月餅中山梨酸［J］.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2004，14（2）：214.

［4］張輝珍，馬愛國，梁惠.高效液相色譜法測定食品中脫氫乙酸的方法研究［J］.衛(wèi)生研究，2007，36（6）：748-750.

［5］中華人民共和國衛(wèi)生部.GB/T 5009.29-2003.食品中山梨酸、苯甲酸的測定［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

［6］黃欣，周玉，吳小平，等.高效液相色譜法測定月餅中5種食品添加劑［J］，中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2009，19（2）：335-336.

Determination of three antimicrobial reagents in mooncakes by high performance liquid chromatography

JIN Lu**ZHNAG Yu YU Xuan-keGUO Ying-jian LU Xue-jiao GUAN Yun-shiHUANG Guang-rong***
（College of life sciences，China jiliang university，Hangzhou 310018，China）

Three common kinds of antimicrobial reagents in mooncakes,benzoic acid,sorbic acid and dehydroacetic acid,were determined with high performance liquid chromatography (HPLC).After extracting,removal of proteins and membrane filtration,samples were tested with HPLC.The experimental results showed that the determination of linear correlation of these three antimicrobial reagents were above 0.99 with the linear detection range at 10 μg/mL ～200 μg/mL.After testing the contents of benzoic acid,sorbic acid and dehydroacetic acid in five kinds of mooncakes by this method,the results demonstrated that all of these samples contained sorbic acid,three of samples contained dehydroacetic acid,and no samples contained benzoic acid.

high performance liquid chromatography；mooncake；antimicrobial reagent

TS207.3

A

1673-6004（2012）01-0049-03

* 資助項(xiàng)目：省實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心（浙高教[2010]151）和校教改實(shí)驗(yàn)專項(xiàng)（HEXSY2011083）資助

** 金露，男，1991年出生，中國計(jì)量學(xué)院食品質(zhì)量與安全專業(yè)本科在讀

*** 黃光榮，通訊作者，Email：grhuang@126.com

2011-12-07