崔亞飛，劉紅星，黃初升，彭運(yùn)峰

（1．廣西師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，廣西 南寧 530001;2．廣西教育學(xué)院，廣西 南寧 530023）

紅樹林植物抗氧化活性研究進(jìn)展

崔亞飛1，劉紅星1，黃初升1，彭運(yùn)峰2

（1．廣西師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，廣西 南寧 530001;2．廣西教育學(xué)院，廣西 南寧 530023）

近年來，國內(nèi)外學(xué)者在對紅樹林植物抗氧化活性成分方面的研究有了很大進(jìn)展，其中含多酚類化合物的糖苷、單寧是抗氧化活性的主要成分;很多有效成分效果好于標(biāo)準(zhǔn)對照物。本文以清除DPPH自由基、清除羥基自由基、清除亞硝基陰離子、清除超氧陰離子自由基、脂質(zhì)過氧化抑制、清除過氧化氫、FRAP法、還原能力測定、ABTS法對近年來紅樹林抗氧化成分研究進(jìn)行綜述。

紅樹林;抗氧化;進(jìn)展

自由基是生物體新陳代謝過程中產(chǎn)生的一類具有氧化活性的帶負(fù)電的離子，化學(xué)性質(zhì)相當(dāng)活躍。目前研究表明，人體內(nèi)自由基的產(chǎn)生和清除的動(dòng)態(tài)平衡與人體的生理、病理、生長發(fā)育、疾病、衰老密切相關(guān)[1]。人工合成的口服抗氧化劑雖然有一定的療效，但是其副作用大，因此從植物中尋找無害的天然抗氧化成分就成了當(dāng)今的熱點(diǎn)。紅樹林植物是一類生長于海岸潮間帶的特殊植物群，特殊的生長環(huán)境使其含有大量具有良好活性的天然物質(zhì)，其中較多成分具有良好的抗氧化活性。

1 不同方法對紅樹林植物抗氧化能力的評價(jià)

迄今為止，國內(nèi)外用于評價(jià)植物抗氧化能力的方法已有很多，對紅樹林植物抗氧化活性成分的研究，也采用有不同的方法，這些方法都有各自的特點(diǎn)。本文對近10年來報(bào)道的9種不同抗氧化方法對紅樹林植物中抗氧化成分的研究進(jìn)行綜述，共涉及紅樹林植物品種20個(gè)，其中有通過分離得到的單體物質(zhì)，也有直接用提取物進(jìn)行抗氧化能力測定。

1．1 清除DPPH自由基法

DPPH 全 名 2，2-二 苯 基-1-苦 肼 基 ， 由 于DPPH的自由基有單電子，在517nm處有一強(qiáng)吸收，其醇溶液呈紫色，當(dāng)有自由基清除劑存在時(shí)，與其單電子配對而使吸收逐漸消失，褪色程度與其接受的電子數(shù)量成定量關(guān)系，因而可用分光光度計(jì)進(jìn)行快速的定量分析。該法簡單快速，并廣泛用于測定生物試樣和食品的抗氧化能力，在紅樹林抗氧化成分研究中也廣為使用。

紅樹林各部位的提取物清除DPPH自由基效果方面，范潤珍報(bào)道秋茄葉中的色素含量為0．100g·L－1時(shí)，對 DPPH 自由基清除率為 53．4%[2]。Nuntavan Bunyapraphatsara報(bào)道若干種紅樹林不同部位對DPPH清除作用，效果好壞依次為海桑的花萼，海桑的雌蕊，杯萼海桑的花萼，Cynometra ramiflora的種子，Cynometraramiflora果皮和樹枝[3]。Toshiya masuda等人發(fā)現(xiàn)海漆和欖仁樹的提取物有很強(qiáng)的清除DPPH自由基能力，其重要成分是鞣酸[4]。OVINDASAMY AGORAMOORTHY 發(fā)現(xiàn)海漆的提取物抗DPPH自由基對α-生育酚的氧化能力試驗(yàn)中清除能力達(dá)到 30．3μg·mL－1，其次為柱果木欖（42．9μg·mL－1），十雄蕊角果木（51．9μg·mL－1），紅樹（64．9μg·mL－1），桐花樹（74．3μg·mL－1），紅茄苳（79．9μg·mL－1）[5]。 楊維報(bào)道白骨壤葉子的水提物對DPPH自由基有一定的清除效果，IC50為2．27mg·mL－1[6]， SGurudeeban 報(bào)道印度苦郎樹樹葉的甲醇提取物中酚類和黃酮對DPPH自由基有一定的清除效果[7]。韋龍賓報(bào)道廣西的苦郎樹葉乙醇提取物對DPPH自由基有一定清除效果，其濃 度 為52．41mg·mL－1[8]， Jayanta Ku Patra 等用海漆葉水提物清除DPPH自由基，其最高清除率達(dá)到 82．66%[9]。 Deepanjan Banerjee 用酚類含量，清除DPPH自由基能力評價(jià)白骨壤，桐花樹，木欖，角果木，紅茄苳，無瓣海桑紅樹林植物葉、莖皮、根部20%甲醇提取物抗氧化能力，發(fā)現(xiàn)角果木的莖皮提取物總酚量達(dá)到 94．4mg·g－1，清除 DPPH自由基效果比較好，其 IC50為 0．65mg·g－1。 這說明抗氧化成分總量和單體成分總量與抗氧化能力有很大的聯(lián)系[10]。Shu-Dong Wei等發(fā)現(xiàn)秋茄的70%丙酮提取物不同極性的萃取物對DPPH自由基有不同程度的清除效果，其清除效果排序?yàn)?LF[水萃取物過凝膠柱得到（87．20±1．01）μg·mL－1]＞抗壞血酸＞BHA≈70%AE（70%丙酮相）＞EF（乙酸乙酯相）＞W(wǎng)F（水相）＞PF（石油醚相）[11]。LOOAIYIN 報(bào)道從正紅樹中分得許多對DPPH有很好清除效果的焦木酸類物質(zhì)[12]。Liang-Liang Zhang等報(bào)道秋茄、大紅樹的葉子水提物總酚量為 （130．32±4．66）mg·g－1和（182．62±21．43）mg·g－1，單寧總量為（106．35±21．16）mg·g－1和（219．27±63．11）mg·g－1，其對DPPH自由基清除效果很好，總單寧清除濃度IC50為 （89．83±4．91）μg·mL－1（紅樹） 和 （93．51±4．44）μg·mL－1（秋茄），好于抗壞血酸和 BHA，這說明糖苷部分是抗氧化活性的官能團(tuán)[13]。Afidah A．Rahim報(bào)道紅樹表皮乙醇提取物中的總單寧對DPPH 自由基達(dá)到 90%時(shí)， 濃度為 30μg·mL－1，強(qiáng)于 BHT[14]。 Wangensteen，H．報(bào)道銀葉樹莖皮乙醇提取物含有豐富的三聚、五聚、六聚的原花青素型化合物，該物質(zhì)對DPPH自由基的清除濃度EC50為（19．4±1．7）μg·mL－1[15]。 Helle Wangensteen等從Sarcolobusglobosus分得的魚藤酮、異黃酮、多酚類糖苷對DPPH自由基有很好的清除效果[16]。田瑩等從老鼠簕枝中分得粗多糖、酸性多糖、中性多糖，對DPPH均有不同程度的清除效果，其中酸性多糖經(jīng)過純化后其 0．2mg·mL－1清除率為80．6%[17]。Natarajan Suganthy 報(bào)道紅茄苳葉子甲醇提取物對DPPH自由基清除效果高于BHT，其IC50為 43．17μg·mL－1[18]。

在單一化學(xué)成分清除DPPH方面，李冬立報(bào)道 黃 槿 的 內(nèi) 生 真 菌 赤 散 囊 菌 分 得 5，5＇-methylenebisasperflavin （1） （EC50＝44．0μM，），2-O-methyleurotinone （2）（EC50＝74．0μM），Neoechinulin E （3） （EC50＝46．0μM）， Cryptoechinuline D （4）（EC50＝23．6μM） 對 DPPH 自由基的清除率高于作為對照的 BHT（EC50＝82．6μM）;紅海欖的乙醇粗提物效果與BHT相當(dāng)，而從中分得的單體cinchonain Ib（5）（EC50＝17．3μM） 、Proanthocyanidin B2（6） （EC50＝7．4M m） 清除效果比 BHT 好[19～20]。

Kensaku Takakra等報(bào)道從紅海欖分得黃酮苷 glabraoside A（EC50＝4．6μM），比 EGCG（表沒食子兒茶素沒食子酸酯）還好，glabraoside B（EC50＝8．6μM）對 DPPH 自由基清除比 VC要好[21]。

1．2 清除羥基自由基

活性氧自由基能夠引發(fā)癌癥、自身免疫性疾病、炎癥等已被生物醫(yī)學(xué)界所證實(shí)，羥基自由基在活性氧自由基中反應(yīng)活性最強(qiáng)，毒性最大，發(fā)掘活性氧自由基清除劑尤其天然活性氧自由基清除劑是多年來醫(yī)學(xué)界的研究熱點(diǎn)。目前經(jīng)常使用清除羥基自由基的方法有Fe2＋-鄰二氮菲法，F(xiàn)e2＋-水楊酸法，F(xiàn)e2＋-EDTA 法等， 這些方法原理均為Fenton試劑，即過氧化氫與Fe2＋產(chǎn)生羥基自由基，F(xiàn)e2＋與一些化合物形成有色配合物因?yàn)樽兂蒄e3＋顏色改變，其改變通過分光光度計(jì)定量測得。

范潤珍報(bào)道秋茄葉中色素對羥基自由基有一定的清除作用，其清除能力相當(dāng)于對照物BHT的66．4%，弱于同期比較的清除DPPH自由基。楊維等報(bào)道湛江特呈島的白骨壤葉子水提物對羥基自由基有一定的清除作用，與其濃度呈正相關(guān)， 其 IC50為 1．42mg·mL－1， SGurudeeban 報(bào)道印度苦郎樹樹葉的甲醇提取物在二價(jià)鐵-EDTA體系中當(dāng)濃度為 2．5mg·mL－1時(shí)，對羥基自由基清除率為 71．4%。

Natarajan Suganthy報(bào)道紅茄苳葉子的甲醇提取物對羥基自由基的清除能力為 IC50＝46．76μg·mL－1，好于抗壞血酸[15]。Talat Roome 報(bào)道在大鼠體內(nèi)試驗(yàn)中，桐花樹莖乙酸乙酯提取物和甲醇提取物對羥基自由基很顯著的清除能力，具有良好的的抗炎活性和保肝功能[22]，Sunil Kumar報(bào)道黃槿花的水提取物在二價(jià)鐵-EDTA體系中對羥基自由基有一定的清除能力，當(dāng)濃度為2．5mg·mL－1時(shí)，其清除率為 70．2±1．7%[23]。

1．3 清除亞硝基陰離子

亞硝基是自由基里對人體傷害最大的一種自由基，現(xiàn)有的試驗(yàn)方法使用亞硝酸鹽在酸性緩沖劑的條件下產(chǎn)生亞硝基陰離子（NOO－），利用亞硝基與對氨基苯磺酸生成偶氮化物，偶氮化物和鹽酸萘乙二胺生成紅色物質(zhì)，加入抗氧化劑后，紅色會變淺，可以在分光光度計(jì)上定量測得。

Natarajan Suganthy報(bào)道紅茄苳葉子的甲醇提取物對亞硝基陰離子的清除能力為IC50＝60．06μg·mL－1，好于 BHT，抗壞血酸和 α-育兒酚。Sunil Kumar報(bào)道黃槿花的水提取物在濃度為2．5mg·mL－1時(shí)，對亞硝基陰離子清除率為 76．47%±3．5%。

1．4 清除超氧陰離子自由基

超氧自由基屬于單線氧自由基，聯(lián)苯三酚在堿性條件下可以發(fā)生自氧化產(chǎn)生超氧陰離子，體系顏色由無色變成淺黃、黃色、最后變成綠色，加入抗氧化劑可以抑制聯(lián)苯三酚自氧化，使得體系顏色加深變緩，這可以在紫外分光光度計(jì)下通過時(shí)間測定其變化，間接表征其抗氧化效果。

田瑩等從老鼠簕枝中分得粗多糖、酸性多糖、中性多糖，對超氧陰離子自由基均有不同程度的清除效果，其中酸性多糖經(jīng)過純化后其0．2mg·mL－1清除率為 66．1%。 Talat Roome 報(bào)道在大鼠體內(nèi)試驗(yàn)中，桐花樹莖乙酸乙酯提取物和甲醇提取物對超氧陰離子自由基有一定的清除能力，具有良好的抗炎活性和保肝功能。Sunil Kumar報(bào)道黃槿花的水提取物在濃度為 2．5mg·mL－1時(shí)，對超氧陰離子自由基的清除率為72．45%±4．2%。

1．5 脂質(zhì)過氧化抑制

脂質(zhì)過氧化反應(yīng)失調(diào)會引起一系列的新陳代謝失常和免疫功能降低，形成氧自由基連鎖反應(yīng)，損害生物膜及其功能，以致形成細(xì)胞透明性病變、纖維化，大面積細(xì)胞損傷，造成神經(jīng)、組織、器官等損傷，因此很多學(xué)者利用體外化學(xué)試劑脂質(zhì)過氧化抑制法和大鼠肝部脂質(zhì)過氧化抑制法來評價(jià)天然產(chǎn)物的脂質(zhì)過氧化。

NuntavanBunyapraphatsara報(bào)道柱果木欖和紅茄苳的可食用幼果提取物提取物能抑制脂質(zhì)過氧化其 IC50分別為 0．375μg·mL－1和 0．2918μg·mL－1，Talat Roome等發(fā)現(xiàn)桐花樹成分有能夠抑制大鼠肝脂質(zhì)過氧化的功能。K．Vijayavel報(bào)道紅樹皮的水提物中多糖能夠增強(qiáng)大鼠肝線粒體中細(xì)胞色素氧化酶、還原輔酶等活性，抑制大鼠肝脂質(zhì)過氧化，達(dá)到保肝的作用[24]。

1．6 清除過氧化氫

過氧化氫與多種疾病如自身免疫疾病、腫瘤、炎癥以及細(xì)胞凋亡關(guān)系密切。過氧化氫在堿性環(huán)境中，與發(fā)光劑魯米諾相互作用可產(chǎn)生強(qiáng)烈的化學(xué)發(fā)光。在魯米諾過量的情況下，化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度值與過氧化氫的含量成正比，此原理可用來測定抗氧化劑對反應(yīng)體系中過氧化氫的清除能力大小。

Natarajan Suganthy報(bào)道紅茄苳葉子甲醇提取物對過氧化氫清除效果高于對照標(biāo)準(zhǔn)物，其IC50為 110μg·m L-1。Sunil Kumar報(bào)道黃槿花的水提取物在濃度為2．5mg·m L-1時(shí)，對過氧化氫的清除率為 65．75%±3．4%。

1．7 FRAP三價(jià)鐵降低抗氧化劑能力

三價(jià)鐵降低抗氧化劑能力可以評價(jià)混合型抗氧化劑的總抗氧化能力，F(xiàn)RAP法測定總抗氧化能力的原理是酸性條件下抗氧化物可以還原Ferric-tripyridyltriazine（Fe3＋-TPTZ）產(chǎn)生藍(lán)色的 Fe2＋-TPTZ，隨后在593nm測定藍(lán)色的Fe2＋-TPTZ即可獲得樣品的總抗氧化能力。

Shu-Dong Wei報(bào)道秋茄70%丙酮提取物不同極性的萃取物具有不同程度的FRAR能力，其中 LF（水萃取物過凝膠柱純化（5．91 ± 0．23）mmol AAE·g-1）具有比參比物[BHA（5．28 ± 0．11）mmol AAE·g-1]更強(qiáng)的總抗氧化能力。Liang-Liang Zhang報(bào)道大紅樹水提物通過FRAP檢測發(fā)現(xiàn)其總抗氧化能力[（12．98 ± 1．20 mmol AAE·g-1）]強(qiáng)于秋茄[（10．77 ± 0．37）mmol AAE·g-1] 和 BHA[（4．19 ±0．11）mmol AAE·g-1]。

1．8 還原能力

利用亞鐵氰化鉀在弱堿性條件下可以檢測化合物的還原能力，A．Y．Loo等報(bào)道紅樹二氯甲烷的提取物分兩部分:焦木酸和焦木酸濃縮物，這兩個(gè)部分的總酚量很高，其中焦木酸濃縮物部分經(jīng)過亞鐵氰化鉀法得知其還原能力分別為抗壞血酸、BHT、BHA、維生素 E 的 3．7、5．1、6．1、21．3倍。

Sunil Kumar報(bào)道黃槿花的水提取物的還原能力在低于1．5mg·m L-1時(shí)弱于對照物BHA，當(dāng)濃度大于 1．5mg·m L-1，強(qiáng)于 BHA，但是其能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過維生素E。

1．9 ABTS 法

ABTS法測定總抗氧化能力的原理是:ABTS在適當(dāng)?shù)难趸瘎┳饔孟卵趸删G色的ABTS＋，在抗氧化物存在時(shí)ABTS＋的產(chǎn)生會被抑制，在734nm或405nm測定ABTS＋的吸光度即可測定并計(jì)算出樣品的總抗氧化能力。

Afidah A．Rahima報(bào)道紅樹表皮中具有黃烷酮和間苯三酚結(jié)構(gòu)的單寧，對ABTS自由基有比較好的清除效果，其抑制濃度為 50μg·m L-1，有比較好的總抗氧化能力。

2 小結(jié)

總結(jié)近10年來紅樹林植物抗氧化活性的研究報(bào)道，可以發(fā)現(xiàn)，分離出單一組分的抗氧化活性要強(qiáng)于次級提取物，但目前的研究絕大多數(shù)為次級提取物的活性篩選，單一組分的抗氧化活性報(bào)道較少，這可能是因次級提取物成分復(fù)雜，分離純化較困難，且做活性初級篩選研究時(shí)又較為常用的原因。從研究方法上，紅樹林植物抗氧化活性研究大多采用清除DPPH自由基法，對人體內(nèi)還可能產(chǎn)生的含氮自由基、烷氧自由基等，以及清除羥基自由基、超氧陰離子自由基，亞硝基自由基，過氧化氫等方面的研究報(bào)道還較少。從研究手段上多數(shù)抗氧化活性檢測僅限于體外模擬實(shí)驗(yàn)，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)較少，這也和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)周期長、成本大且實(shí)驗(yàn)繁瑣等原因有關(guān)。雖然目前已經(jīng)建立了多種篩選抗氧化物質(zhì)的方法，但大量樣品的抗氧化活性篩選或者是粗篩仍依賴于體外實(shí)驗(yàn)法。從研究的植物種類上，對廣泛藥用于民間的紅樹林植物研究較多，而數(shù)量稀少的珍貴物種研究較少。

總之，以上評價(jià)紅樹林植物抗氧化能力的方法均為化學(xué)評價(jià)法，用以測定相應(yīng)的抗氧化劑的活性，操作上相對簡便，但能反應(yīng)出它對某種自由基的清除能力強(qiáng)弱。由于各種檢測技術(shù)因?qū)ο蟛煌饔袃?yōu)缺點(diǎn)，因此，要針對不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康募皸l件來選擇不同檢測方法。這也為人們今后開展從植物中尋找無害的天然抗氧化成分的研究提供幫助。在開發(fā)利用紅樹林植物資源的研究中，應(yīng)進(jìn)一步拓展紅樹林這一極具潛力的寶貴資源的利用領(lǐng)域，提高其經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

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Research Progressof Antioxidative Activity of Mangrove Plant

CUIYa-fei1， LIUHong-xing1， HUANGChu-sheng1， PENGYun-feng2
（1．Academy of Chemistry and Life Science， Guangxi Teachers’ Education University， Nanning530001， China;2．Guangxi Collegeof Education，Nanning530023， China）

The research progress about the antioxidative composition of mangrove plant was always developing，glucosides and tannins which had polyphenols structure were main composition of antioxidant activity，antioxidant effect of amajority of themwas better than normative contrasts．The research of the antioxidative composition of mangrove plant in recent years was reviewed by classification of eliminating DPPH， hydroxyl radicals，nitro free radicals， superoxide anion radical，hydrogen peroxide，lipid peroxidation inhibition，F(xiàn)RAP，reducing capacity，ABTS．

mangroveplant;antioxidant;progress

O 629．5

A

1671-9905（2011）11-0040-05

廣西教育廳科研資助項(xiàng)目[桂教科研（2010）14]

崔亞飛（1986-），男，在讀研究生，河南新鄉(xiāng)人，研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物分離，電話:15240664712，E-mail:cui2635167＠126．com

2011-07-22