徐 軍 胡 勇 王 健 章太平 余宏宇

乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中CAS蛋白表達的臨床病理意義

徐 軍1胡 勇1王 健1章太平1余宏宇2

（1中國人民解放軍第一零五醫(yī)院病理科，合肥230031；2第二軍醫(yī)大學(xué)長征醫(yī)院病理科，上海200003）

目的 研究乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中細(xì)胞凋亡易感蛋白（CAS）表達的臨床病理意義。方法 選取乳腺浸潤性導(dǎo)管癌53例、普通導(dǎo)管增生20例、異型導(dǎo)管增生20例、導(dǎo)管原位癌10例、正常乳腺組織14例，應(yīng)用免疫組化方法觀察CAS蛋白的表達，并探討CAS與乳腺癌臨床病理因素的關(guān)系，分析CAS和HER2、ER、PR以及ki-67指數(shù)的關(guān)系。結(jié)果 CAS在正常乳腺、普通導(dǎo)管增生、異型導(dǎo)管增生、導(dǎo)管原位癌、浸潤性導(dǎo)管癌中的陽性率逐漸升高，分別為14.3%、25.0%、40.0%、60%、75.5%（P＝0.000），CAS、HER2均與乳腺癌組織學(xué)分級、核分裂像、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；CAS評分與ki-67指數(shù)（r＝0.439，P＝0.003）和 HER2評分（r＝0.598，P＝0.000）正相關(guān)。結(jié)論 CAS與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、增殖、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，可能作為反映乳腺癌生物學(xué)行為的腫瘤標(biāo)記物，CAS蛋白的表達和HER2有一定的相關(guān)性。

乳腺腫瘤；細(xì)胞凋亡易感蛋白；免疫組織化學(xué)

細(xì)胞凋亡易感基因 （cellular apoptosis susceptibility gene，CAS）位于染色體的20q13區(qū)域，與酵母染色體分離基因 （CSE1）同源，CAS蛋白是一種核轉(zhuǎn)運因子，與細(xì)胞增生和凋亡有關(guān)［1］，在很多腫瘤中表達，如惡性黑色素瘤、淋巴瘤、肝癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌等［2-5］。但CAS在乳腺癌組織中的表達研究較少，本實驗觀察CAS蛋白在乳腺良惡性病變及乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達，探討其臨床病理意義，分析CAS和HER2、ER、PR以及乳腺癌ki-67指數(shù)的關(guān)系。

材料和方法

1.臨床資料 選取2007年1月-2010年1月在本院確診為女性乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的根治切除手術(shù)標(biāo)本的存檔蠟塊53例，患者年齡為33-76歲，平均52.5歲，術(shù)前均未做化療和放療，普通導(dǎo)管增生（UDH）20例、異型導(dǎo)管增生（ADH）20例、導(dǎo)管原位癌（DCIS）10例，正常乳腺組織14例做對照觀察。全部標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片。

2.免疫組織化學(xué) 兔抗人CAS單克隆抗體購自美國BIOTECH公司，即用型鼠抗人HER2、ER、PR、ki-67單克隆抗體和Elivisionplus試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。所有抗體預(yù)先采用檸檬酸高溫高壓抗原修復(fù)，CAS抗體工作濃度1：400。分別按試劑說明設(shè)立陽性對照、陰性對照和空白對照。

3.結(jié)果判定 CAS以胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，陽性細(xì)胞數(shù)0%為0分，＜10%為1分，10%-50%為2分，51%-80%為3分，＞80%為4分；陽性強度分為弱（1分）、中等（2分）、強（3分），兩者相乘得出總分值（0-12），分值0-1為-，2-6為＋，8-12為＋＋。HER2評分參考《乳腺癌HER2檢測指南（2009版）》：完全沒有著色或＜10%的腫瘤細(xì)胞有細(xì)胞膜著色（0分）；＜10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)微弱、不完整的細(xì)胞膜著色（1分）；＞10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)弱至中度完整的細(xì)胞膜著色和＜30%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)強的、完整的細(xì)胞膜著色（2分），＞30%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)強的、完整的細(xì)胞膜著色（3分），分值0-1為-，2為＋，3為＋＋。ER、PR、ki-67以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，隨機計數(shù)10個高倍鏡視野（×400），每個視野計數(shù)100個細(xì)胞，共計數(shù)1000個腫瘤細(xì)胞染色陽性細(xì)胞所占百分比分別作為ER、PR、ki-67指數(shù)。

4.統(tǒng)計方法 所有數(shù)據(jù)均用SPSS13.0軟件處理，CAS蛋白、HER2與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系選擇χ2檢驗，CAS、HER2表達評分和ER、PR以及ki-67指數(shù)之間的關(guān)系采用Spearman等級資料相關(guān)分析，P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1.CAS蛋白在乳腺良惡性疾病中的表達

CAS在胞漿中呈彌漫、均質(zhì)陽性（圖1），CAS在正常乳腺、普通導(dǎo)管增生、異型導(dǎo)管增生、導(dǎo)管原位癌、浸潤性導(dǎo)管癌中的陽性率逐漸升高，分別為14.3%（2例＋）、25.0%（4例＋，1例＋＋）、40%（4例＋，4例 ＋ ＋）、60%（2例 ＋，4 例 ＋ ＋）、75.5%（19例＋，21例＋＋）（χ2＝29.382，P＝0.000）；HER2陽 性 率 分 別 為 0%、10%、20%、60%、35.8%，其中正常乳腺、UDH 、ADH 和DCIS比較P＜0.01；正常乳腺、UDH 、ADH 和IDC比較P＜0.05。2.CAS、HER2蛋白與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系

圖1 乳腺癌組織CAS呈強陽表達×200圖2 癌細(xì)胞ki-67陽性，核棕黃色×200圖3 乳腺癌中HER2胞膜陽性；×200圖4、5 乳腺癌中ER、PR胞核陽性Elivision法×200Fig.1 IDC showing strong positive cytoplasma staining of CAS（×200）；Fig.2 Strong positive nuclear staining of ki-67in IDC（×200）；Fig.3 Strong positive me mbrane staining of HER2in IDC（×200）；Fig.4 and Fig.5Strong positive nuclear staining of ER，PR in IDC（×200）.

表1所示，CAS、HER2均與乳腺癌組織學(xué)分級、核分裂像、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；組織學(xué)分級以及核分裂指數(shù)越高，CAS評分越高；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組CAS評分高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。CAS的表達與乳腺癌患者的年齡、腫瘤大小、腫瘤分期無明顯關(guān)系，Spearman等級相關(guān)分析結(jié)果表明，CAS評分與ki-67指數(shù)（r＝0.439，P＝0.003）和 HER2評分（r＝0.598，P＝0.000）正相關(guān)，HER2與ER呈負(fù)相關(guān)（r＝-0.412，P＝0.002）。

表1 CAS、HER2蛋白與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系Table 1 The relationship among the expression of CAS，HER2protein and clinical paramieters in IDC

討 論

CAS是與微管、有絲分裂紡錘絲有關(guān)的蛋白質(zhì)，參與轉(zhuǎn)運因子α從胞核到胞漿的再循環(huán)過程，它作用于細(xì)胞周期的G1檢測點，保證同源染色體精確分離，在正常細(xì)胞中CAS的功能像個閘門，決定細(xì)胞是增生還是凋亡。CAS在睪丸、胚胎肝臟以及包含有分裂活躍細(xì)胞的組織 （如淋巴組織 ）中表達明顯增強，正常狀態(tài)下發(fā)生凋亡的組織（如前列腺和乳腺）也有CAS弱表達。CAS過度表達或缺失都可誘發(fā)腫瘤的形成，其功能在多種器官惡性腫瘤形成過程中是紊亂的，在腫瘤發(fā)病機制中發(fā)揮重要的作用［6，10，11］。我們觀察到 CAS同核分裂像數(shù)、ki-67指數(shù)正相關(guān)，并且隨著組織學(xué)分級的升高而升高，證實了CAS在細(xì)胞增生中起著重要的作用。CAS在正常乳腺、普通導(dǎo)管增生、異型導(dǎo)管增生、導(dǎo)管原位癌、浸潤性導(dǎo)管癌中的陽性率呈逐漸升高趨勢，并且隨著乳腺癌組織學(xué)分級的升高、CAS的表達逐漸增強，說明CAS在乳腺導(dǎo)管上皮病變發(fā)生、發(fā)展、增殖過程中起著重要作用。在惡性黑色素瘤中CAS蛋白與腫瘤分期有關(guān)，主要在晚期有轉(zhuǎn)移的腫瘤組織中高表達，與以往研究結(jié)果不同，CAS蛋白與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的臨床分期無關(guān)，可能原因是我們研究的Ⅲ到Ⅴ期的病例數(shù)目過少。CAS蛋白的表達可能是由于CAS基因的擴增，CAS基因定位于染色體的20q13，該區(qū)域在乳腺癌等惡性腫瘤中常見擴增，與腫瘤基因不穩(wěn)定性高度相關(guān)［6，7］。有學(xué)者認(rèn)為CAS蛋白高表達可作為檢測卵巢癌中基因不穩(wěn)定性的標(biāo)記物［5］，在乳腺癌中，引起CAS蛋白過表達的確切原因還需深入研究。

乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況是影響乳腺癌患者預(yù)后的主要因素，本實驗觀察了CAS的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，結(jié)果表明CAS與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。Liao CF等發(fā)現(xiàn)CAS可通過增加癌細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP2）的分泌從而增強腫瘤的侵襲性，與腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移有關(guān)，將CAS視為預(yù)測腫瘤轉(zhuǎn)移的標(biāo)記物［2］。Tsao TY證實CAS的過表達可以促進結(jié)直腸癌細(xì)胞分泌CEA和cathepsin D，從而促進腫瘤轉(zhuǎn)移，免疫組化證實結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移灶中癌細(xì)胞CAS強表達［8］。Tung MC觀察到癌轉(zhuǎn)移灶中CAS定位于纖維間質(zhì)和腺腔內(nèi)，并且有轉(zhuǎn)移的患者血清CAS水平高于無轉(zhuǎn)移者［9］；有學(xué)者提出結(jié)直腸癌患者血清CAS蛋白水平可以作為預(yù)測腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)記［13］，我們的研究結(jié)果與之一致，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌CAS表達水平顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，說明CAS不僅與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、增殖有關(guān)，還可能成為預(yù)測乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后的分子標(biāo)記，因而可能作為反映乳腺癌生物學(xué)行為的腫瘤標(biāo)記物。但探討CAS對乳腺癌預(yù)后的意義還需積累更多的臨床隨訪資料。

HER2擴增是乳腺癌中較為常見的基因改變，對于乳腺癌的預(yù)后評價及指導(dǎo)治療有極其重要的價值，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌HER2陽性者預(yù)后較差，已作為探討乳腺癌預(yù)后分子指標(biāo)的主要代表［12］。結(jié)果表明，正常乳腺、普通導(dǎo)管增生、異型導(dǎo)管增生、浸潤性導(dǎo)管癌CAS和HER2陽性表達均逐漸增加，CAS和HER2表達量均和乳腺癌組織學(xué)分級、增殖指數(shù)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；相關(guān)分析表明，CAS蛋白與HER2顯著正相關(guān)，提示CAS和HER2在乳腺導(dǎo)管上皮病變發(fā)生、發(fā)展、增殖過程中可能有一定的協(xié)同作用。但二者相互作用的機制還需進一步研究。

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Expression of CAS protein and its clinical significance in the invasive ductal carcinoma of the breast

Xu Jun1，Hu Yong1，Wang Jian1，Zhang Taiping1，Yu Hongyu2（1Department of Pathology，105 Hospital of PLA，Hefei 230031；2Department of Pathology，Changzheng Hospital，Shanghai 200003，China）

Objective To investigate the expression of cellular apoptosis susceptibility（CAS）and its clinical significance in the invasive ductal carcinoma （IDC）of the breast.Methods Immunohistochemical method was used to observe the expression of CAS in 53cases of IDC，20usual ductal hyperplasia（UDH），20atypical ductal hyperplasia（ADH），10ductal carcinoma in situ （DCIS），and 14normal breast tissues.The correlations of CAS expression with HER2，ER，PR，and ki-67index were analyzed.Results The positive rates of the CAS protein in normal breast tissues，UDH，ADH，DCIS and IDC were 14.3%，25.0%，40%，60%，and 75.5%，respectively（P＜0.001）.The expressions of CAS and HER2were positively correlated with histologic grade，mitotic activity，and lymph node metastasis.The positive expression of CAS was correlated with ki-67index （r＝0.439，P＜0.01）and HER2 （r＝0.598，P＜0.001）.Conclusion High expression of CAS is closely correlated with the pathogenesis，progression and lymph node metastasis of breast carcinoma.CAS could be considered a marker of the biological behavior of breast carcinoma.Furthermore，CAS may be associated with HER2expression.

Breast tumor；Cellular apoptosis susceptibility；Immunohistochemistry

R737.9

A

10.3870／zgzzhx.2011.06.010

2011-04-15

2011-09-15

徐軍，男（1975年），漢族，主治醫(yī)師。