馬麗莉 王金勝 李代強(qiáng) 霍小蕾 姬云霞

NOB1在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義

馬麗莉 王金勝1＊李代強(qiáng)＊霍小蕾1姬云霞1

（中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院病理科，長沙410008；1長治醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，山西046000）

目的 研究NOB1基因在食管鱗狀細(xì)胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）中的表達(dá)及臨床意義。方法 利用免疫組織化學(xué)SP法檢測59例ESCC及其相應(yīng)（50例）的遠(yuǎn)端正常食管黏膜組織中NOB1的表達(dá)。結(jié)果 ESCC中NOB1的陽性率為71%，正常食管黏膜鱗狀上皮中的陽性率為26%，兩組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。NOB1的表達(dá)與ESCC的分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，與患者的性別，年齡以及腫瘤浸潤深度無關(guān)。結(jié)論 NOB1在ESCC中表達(dá)升高，可能在ESCC發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。

NOB1；食管鱗狀細(xì)胞癌；免疫組織化學(xué)

NOB1是酵母基因 Nob1p（putative Nin one binding protein 1）的人類同源基因［1］，是一個多功能的蛋白質(zhì)，NOB1在核糖體小亞基［2］和26S蛋白酶體［3］的生物合成過程中發(fā)揮重要作用，而后兩者的變化與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和腫瘤生長抑制有關(guān)。為此，我們采用免疫組織化學(xué)技術(shù)，檢測了59例食管鱗狀細(xì)胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）及其相應(yīng)的遠(yuǎn)端正常食管黏膜組織中NOB1的表達(dá)，探討其在ESCC發(fā)生發(fā)展中的作用。

材料和方法

1.材料

1.1 石蠟標(biāo)本

所有標(biāo)本取自長治醫(yī)學(xué)院附屬和平醫(yī)院病理科2008-2010年食管癌根治術(shù)后蠟塊標(biāo)本。隨機(jī)抽取資料完整的樣本59例，男43例，女16例，平均年齡55.6歲（47-75歲）。病理分級采用 WHO（2000）分類法，根據(jù)分化程度不同分為高，中，低三級。全部標(biāo)本經(jīng)病理檢查確診。所有患者術(shù)前未做任何放療和化療。

1.2 試劑

NOB1多克隆抗體（工作濃度為1∶50），美國Proteintech Group；SP免疫組化染色試劑盒和DAB顯色試劑盒均購自北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司。

2.方法

2.1 免疫組織化學(xué)染色

按照SP免疫組化染色試劑盒說明書進(jìn)行操作。用已知陽性片作為陽性對照，用PBS替代一抗作陰性對照。采用pH6.0的枸櫞酸鹽緩沖液經(jīng)中火檔微波處理進(jìn)行抗原修復(fù)。

2.2 結(jié)果評估

NOB1蛋白陽性表達(dá)為細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒，在4×100倍光鏡下至少觀察5個視野，以著色細(xì)胞占視野細(xì)胞總數(shù)的多少分為陰性和陽性。陽性細(xì)胞小于25%，判定為陰性表達(dá)，陽性細(xì)胞大于25%，判定為陽性表達(dá)。

3.統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計處理，數(shù)據(jù)進(jìn)行χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1.NOB1在正常食管黏膜和ESCC組織中的表達(dá)

NOB1在食管正常鱗狀上皮中的陽性率為26%，在ESCC中的陽性率為71%。在正常食管黏膜上皮中，NOB1主要位于細(xì)胞質(zhì)。在ESCC組織中，NOB1在細(xì)胞質(zhì)彌漫表達(dá)，可見極少數(shù)陽性表達(dá)在細(xì)胞核。此外，同一腫瘤標(biāo)本，部分區(qū)域NOB1蛋白強(qiáng)表達(dá)，而部分區(qū)域表達(dá)卻很弱；即使在同一癌巢的不同區(qū)域，NOB1蛋白的表達(dá)水平也存在差異，呈現(xiàn)明顯的異質(zhì)性（圖1、2、3）。

2.NOB1蛋白表達(dá)與ESCC臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系

通過對59例ESCC標(biāo)本的蛋白表達(dá)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，顯示NOB1的表達(dá)與ESCC分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，與患者的性別，年齡以及腫瘤浸潤深度無關(guān)（表1）。

表1 NOB1蛋白表達(dá)與ESCC臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系Table 1 Correlation of NOB1expression with ESCC clinicopathological parameters

討 論

張悅等［1］用EST同源克隆策略得到了一個新的核蛋白基因，同源序列分析確定該基因是酵母基因 Nob1p（putative Nin one binding protein 1）的人類同源基因，因此將其命名為人NOB1基因。NOB1包含九個外顯子和八個內(nèi)含子，定位于人染色體16q22.1。NOB1的1749bp cDNA編碼412個氨基酸序列的蛋白，該蛋白的N端有一個RNase活性的PIN domain，C端有一個ZNRD1（zinc ribbon domain-containing 1，鋅帶）結(jié)構(gòu)域。RT-PCR分析顯示NOB1主要在肝、肺、脾等組織表達(dá)。NOB1是一個多功能的蛋白質(zhì)。首先，NOB1參與核糖體小亞基的合成，Lamanna等［4］的研究表明NOB1蛋白通過PIN結(jié)構(gòu)域結(jié)合20Spre-rRNA，促使核酸內(nèi)切酶在D位點(diǎn)裂開18SrRNA的3＇-末端，使其成熟。NOB1缺失導(dǎo)致18SrRNA不能合成，20SprerRNA堆集。由于rRNA合成水平是細(xì)胞周期進(jìn)程的必要條件，因此，NOB1如果表達(dá)異常，將導(dǎo)致核糖體不能正確合成，核糖體前體顆?？焖俳到猓炊绊懠?xì)胞生長周期調(diào)控［5-7］。其次，NOB1基因是26S蛋白酶體的一個組分，在26S蛋白酶體的功能中起到重要作用［8］。26S蛋白酶體作為真核細(xì)胞的泛素化途徑蛋白水解復(fù)合物，可高效并高選擇性地降解細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)，尤其是一些短壽命的細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白、癌基因和抑癌基因產(chǎn)物以及變性變構(gòu)蛋白等，從而影響細(xì)胞周期的調(diào)控和腫瘤的發(fā)生［9］。26S蛋白酶體由2個亞復(fù)合體組成：一個具有催化活性的20S核心顆粒和一個有調(diào)控功能的19S亞復(fù)合體。Tone等［10］采用一系列基因和生物化學(xué)實(shí)驗分析NOB1在其中的功能，結(jié)果顯示當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入對數(shù)生長期產(chǎn)生新的蛋白酶體時，NOB1的轉(zhuǎn)錄開始，NOB1蛋白與26S蛋白酶體中的19S調(diào)節(jié)顆粒的Nin1P／Rpn12亞基相互作用，充當(dāng)分子伴侶的角色，促進(jìn)蛋白酶體的成熟。在細(xì)胞進(jìn)入穩(wěn)定期的過程中，被26S蛋白酶體降解。因此，NOB1的表達(dá)發(fā)生改變，會直接影響核糖體和蛋白酶體的生物合成，而核糖體和蛋白酶體發(fā)生改變，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移和腫瘤生長抑制有關(guān)。

由于對NOB1基因的研究仍處于早期階段，目前關(guān)于其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用報道尚不多見。Lin等［11-12］研究顯示 NOB1在卵巢癌細(xì)胞株（SKOV3和HEY）中高表達(dá)，通過RNA干擾技術(shù)將NOB1-siRNA轉(zhuǎn)染至SKOV3和 HEY細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)可有效抑制SKOV3、HEY細(xì)胞的生長活性、增殖能力，并將細(xì)胞周期阻滯在G0／G1期，提示NOB1可能與卵巢癌發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。本研究結(jié)果顯示NOB1在ESCC中的表達(dá)明顯高于其在食管正常鱗狀上皮中的表達(dá)，NOB1的表達(dá)與腫瘤的分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，在高分化的腫瘤組織中NOB1的陽性率和表達(dá)強(qiáng)度均明顯低于低分化的腫瘤組織，提示NOB1可能在ESCC的發(fā)生、發(fā)展中起了一定的促進(jìn)作用。本研究初步探討了NOB1基因在ESCC中的表達(dá)，結(jié)果提示其可能與ESCC的發(fā)生有關(guān)，關(guān)于其具體機(jī)制尚有待進(jìn)一步的深入研究。

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圖 版 說 明

圖1 NOB1蛋白在正常食管黏膜上皮的表達(dá)（SP×200）

圖2 NOB1蛋白在高分化ESCC中的表達(dá)（SP×200）

圖3 NOB1蛋白在低分化ESCC中的表達(dá)（SP×200）mucosal tissue.（SP×200）

Fig.2 The expression of NOB1in ESCC（high grade），the positive signal locates in cytoplasm.（SP×200）

Fig.3 The expression of NOB1in ESCC（low grade），the positive signal locates in cytoplasm.（SP×200）

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1 The expression of NOB1in nonneoplastic esophageal

Expression and clinical significance of NOB1 in esophageal squamous cell carcinoma

Ma Lili，Wang Jinsheng1＊，Li Daiqiang＊，Huo Xiaolei，Ji Yunxia
（Department of Pathology，The Second Xiangya Hospital，Central South University，Changsha410008；＊Department of Pathology，Changzhi Medical College，Shanxi 046000，China）

Objective To research the expression and clinical significance of NOB1in esophageal squamous cell carcinoma（ESCC）.Methods The expression of NOB1was detected by SP immunohistochemical technique in 59cases of ESCC and their corresponding nonneoplastic epithelial tissues（n＝50）.Results The positive rate of NOB1is 71%in Escc and 26%in normal squamous epithelium，with a significant difference between the two groups（P＜0.05）.The expression of NOB1was associated with differentiation grade and lymphatic node metastasis in ESCC，but not with the age，gender and infiltration depth of patients.Conclusion The expression of NOB1is higher in ESCC than in normal squamous epithelium，so NOB1may play an important role in the progression of ESCC.

NOB1；Esophageal squamous cell carcinoma；Immunohistochemistry

R329

A

10.3870／zgzzhx.2011.06.005

2011-05-26

2011-08-26

山西省自然科學(xué)基金資助（2010011047-5）

馬麗莉，女（1982年），漢族，碩士研究生。

＊通訊作者（To whom correspondence should be addressed）