劉秀萍，黃祥衛(wèi)，劉 煒*

（1.晉中學(xué)院 化學(xué)與化工學(xué)院，山西 晉中 030600；2.海南師范大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，海南 ?？?71158）

小葉地不容中總生物堿含量的測(cè)定

劉秀萍1，黃祥衛(wèi)2，劉 煒2*

（1.晉中學(xué)院 化學(xué)與化工學(xué)院，山西 晉中 030600；2.海南師范大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，海南 ?？?71158）

用索氏提取法提取小葉地不容中的總生物堿，以鹽酸小檗堿為對(duì)照品，在pH=5.4的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液中，以溴甲酚綠指示液為顯色劑，利用分光光度法測(cè)定小葉地不容中總生物堿含量.標(biāo)準(zhǔn)方程為A=-0.00758+0.03842C，相關(guān)系數(shù)r=0.999 9.加標(biāo)回收率106.8%（n=5）.小葉地不容中總生物堿含量為2.93%，RSD=0.40%（n=5）.與非水滴定法相比，本法操作簡(jiǎn)便、迅速、測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠.

小葉地不容；總生物堿；分光光度法

小葉地不容（Stephania succiferaH.S.Lo et Y.Tsoong）又稱(chēng)山烏龜、金不換等，屬防己科千金藤屬藤本植物，其塊根味苦、性寒，有清熱解毒，利濕，止痛之功效，用于胃痛，腹痛，急性腸胃炎，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，瘧疾，治癰癤腫毒，濕疹等病癥[1].文獻(xiàn)曾對(duì)該屬植物的化學(xué)成分進(jìn)行了研究[2-5]，但有關(guān)小葉地不容總生物堿含量的測(cè)定未見(jiàn)報(bào)道.為充分開(kāi)發(fā)與利用小葉地不容藥用植物資源，本文采用索氏法提取其中的總生物堿，以鹽酸小檗堿為對(duì)照品，在pH為5.4的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液中，以溴甲酚綠為顯色劑，在416 nm波長(zhǎng)下，利用分光光度法測(cè)定總生物堿含量，并與非水滴定法的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行了比較.本文研究結(jié)果為保護(hù)和合理利用小葉地不容藥用植物資源提供了科學(xué)依據(jù).

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與材料

儀器：UV757CRT型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；PHS-3C型酸度計(jì)（上海大普儀器有限公司）；T6紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用有限公司）；RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；微型試樣粉碎機(jī)（天津斯特儀器有限公司）；FA1604電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；索氏提取器自制.

試劑：鹽酸小檗堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110713-200208，純度：99.99%），鄰苯二甲酸氫甲（天津市化學(xué)試劑一廠），溴甲酚綠（上海試劑三廠），檸檬酸（天津市大茂化學(xué)試劑廠），檸檬酸鈉（天津市大茂化學(xué)試劑廠），三氯甲烷，氫氧化鈉，草酸，高氯酸，冰醋酸，酚酞，甲基橙，結(jié)晶紫等均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?

材料：小葉地不容采集于海南省尖峰嶺地區(qū)，經(jīng)海南師范大學(xué)生命科學(xué)院鐘瓊芯高級(jí)實(shí)驗(yàn)師鑒定為Stephania succiferaH.S.Lo et Y.Tsoong的塊根.粉碎后晾干，備用.

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 總生物堿的提取

準(zhǔn)確稱(chēng)取2.0021 g粉碎好的小葉地不容塊根粉末，用脫脂紗布包裹好，滴加濃氨水潤(rùn)濕，約1h后，放入索氏提取器中，用氯仿提至無(wú)色（取少量溶液加入適量的碘化鉍鉀，檢驗(yàn)至無(wú)生物堿反應(yīng)），提取液經(jīng)適當(dāng)濃縮，冷卻到室溫后轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中，用氯仿定容至刻度，低溫冷藏.

1.2.2 顯色液與緩沖溶液的配制

根據(jù)文獻(xiàn)配制溴甲酚綠指示液[6-7]：精密稱(chēng)取溴甲酚綠125 mg，用0.2 mol/L NaOH溶液12.50 mL溶解后，加入鄰苯二甲酸氫鉀2.55 g，加少量蒸餾水溶解后，轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中，搖勻備用.

檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液的配制：分別配制濃度為0.1 mol/L的檸檬酸和檸檬酸鈉溶液，再分別量取16 mL，0.1 mol/L的檸檬酸和34 mL，0.1 mol/L的檸檬酸鈉于100 mL的容量瓶中，用蒸餾水定容至100 mL，得pH=5.4的緩沖溶液.

1.2.3 吸收波長(zhǎng)的選擇

精密稱(chēng)取在105℃干燥至恒重的鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品10.0 mg，置于50 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，得到200 μg/mL對(duì)照品溶液.取0.1 mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液于250 mL的分液漏斗中，加檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液（pH=5.4）5.0 mL，溴甲酚綠指示液2.0 mL，置分液漏斗中，再加氯仿10 mL，充分振搖，靜置50 min，吸取氯仿層.

將配制好的標(biāo)準(zhǔn)品溶液和空白對(duì)照液在UV757CRT紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)上于350～700 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描.同時(shí)以氯仿作為空白參比液.結(jié)果顯示標(biāo)準(zhǔn)品溶液在416 nm處有吸收峰,而氯仿空白參比液在416 nm幾乎沒(méi)有吸收，故本實(shí)驗(yàn)選擇416 nm為測(cè)定波長(zhǎng)（見(jiàn)圖1）.

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液 0.1，0.2，0.3，0.5，0.7，0.9 mL，加水至1 mL，再加入5 mL檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液（pH=5.4），再加入溴甲酚綠指示液2.0 mL，精密加入氯仿10.0 mL，充分振搖，靜置50 min，吸取氯仿層，室溫放置30 min后，于416 nm下測(cè)定吸光度，同時(shí)以氯仿為空白參比.以標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度C（μg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖2.

結(jié)果表明，鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度在0.0～18.0 μg/mL范圍內(nèi)，濃度與吸光度值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系.得回歸方程A=-0.00758+0.03842C，相關(guān)系數(shù)：r=0.999 9.

1.2.5 小葉地不容總生物堿含量的測(cè)定

準(zhǔn)確吸取樣品溶液5份，每份0.5 mL，加入氯仿9.5 mL，其余操作同1.2.4項(xiàng)，平行測(cè)定5次，以樣品空白作參比，根據(jù)回歸方程，計(jì)算小葉地不容樣品溶液中總生物堿的質(zhì)量.

2 結(jié)果與討論

2.1 小葉地不容總生物堿的含量

依據(jù)1.2.5項(xiàng)測(cè)定結(jié)果，根據(jù)總生物堿含量=（生物堿類(lèi)化合物的質(zhì)量/干樣品的質(zhì)量）×100%進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表1.

表1 小葉地不容總生物堿含量測(cè)定結(jié)果Tab.1 The determination results of total alkaloid content in sample

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 顯色液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取對(duì)照品溶液補(bǔ)水至1 mL，加入5 mL檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液（pH=5.4），再加入溴甲酚綠指示液2.0 mL.精密加入氯仿10.0 mL，充分振搖，靜置50 min后，分出氯仿層，室溫下于416 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，以氯仿作空白參比液.以吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，以時(shí)間（tmin）為橫坐標(biāo)作圖，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖3.

結(jié)果表明，顯色時(shí)間在10-100 min內(nèi)吸光度值是穩(wěn)定的.因此在本實(shí)驗(yàn)選擇的測(cè)定時(shí)間范圍內(nèi)，生物堿類(lèi)化合物與顯色劑生成的絡(luò)合物是穩(wěn)定的.

2.2.2 精密度試驗(yàn)

試驗(yàn)方法同2.1項(xiàng)，平行測(cè)定5次，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1.結(jié)果表明，精密度良好，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.40%（n=5）.

2.2.3 加標(biāo)回收試驗(yàn)

準(zhǔn)確量取小葉地不容樣品溶液5份，每份0.20 mL，準(zhǔn)確量取濃度為200 μg/mL鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)溶液5份，每份0.30 mL，余下按照1.2.4項(xiàng)操作方法于416 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，計(jì)算總生物堿含量和加標(biāo)回收率，結(jié)果見(jiàn)表2.試驗(yàn)結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)方法具有良好的精密度和回收率.

表2 加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Result of recovery test

2.3 討論

本研究建立了小葉地不容中總生物堿的測(cè)定方法，操作簡(jiǎn)便快捷，靈敏度高，重現(xiàn)性好，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠.本法與重量法、滴定法等測(cè)定方法比較，克服了多次重復(fù)萃取所造成的誤差；與液相色譜法比較，具有所用儀器簡(jiǎn)單，操作方便，耗時(shí)少的優(yōu)點(diǎn).我們?cè)褂梅撬芤旱味ǚ▉?lái)測(cè)量小葉地不容中的總生物堿含量，測(cè)定總生物堿含量在5%-6%之間，與紫外-分光光度法比較，所得的結(jié)果誤差較大，其主要原因可能是由于指示劑結(jié)晶紫的顏色變化不靈敏，使得對(duì)滴定終點(diǎn)的判斷產(chǎn)生較大的視覺(jué)誤差，導(dǎo)致所測(cè)總生物堿的含量的重現(xiàn)性不好，精密度也較差.本文研究結(jié)果可為小葉地不容的開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù).

[1]中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志：第三十卷(第一分冊(cè))[M].北京：科學(xué)出版社,1996:65-67.

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Determination of Total Alkaloids in Stephania Succifera H.S.Lo et Y.Tsoong

LIU Xiuping1，HUANG Xiangwei2，LIU Wei2＊
（1.College of Chemistry and Chemical Engineering，Jinzhong College，Jinzhong030600，China；2.College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University，Haikou571158，China）

In order to fully develop and utilize Stephania succifera H.S.Lo et Y.Tsoong,using Soxhlet extractor to ex?tract total alkaloids from the samples and tested at 416 nm by the spectroscopy with the Berberine hydrochloride stan?dard in citric acid and sodium citrate buffer solution at pH=5.4,taking bromocresol green as to color developing reagent.the standard equation wasA=-0.00758+0.03842C,r=0.999 9（n=6）,and the average recovery rate was 106.8%（n=5）.The content of alkaloids in tuberous root of Stephania succifera H.S.Lo et Y.Tsoong was 2.93%,RSD=0.40%（n=5）.Compared with the nonaqueous titration method,this method is simple,fast,accurate and dependable.

Stephania succifera H.S.Lo et Y.Tsoong；Total alkaloids；Spectroscopy

R 284.1

A

1674-4942（2011）02-0174-03

2011-03-03

海南省自然科學(xué)項(xiàng)目(20804)

*通訊作者

畢和平