譚玉龍 韓 苗

（1、哈爾濱親情制藥有限公司，黑龍江 哈爾濱 150029 2、哈爾濱仁皇藥業(yè)有限公司，黑龍江 哈爾濱 150300）

通之舒膠囊是以丹參、山楂、降香、柞蠶蛹為原料，經(jīng)特殊制劑工藝制成。本產(chǎn)品活血通脈。適用于冠心病、心絞痛屬心血瘀阻證的輔助治療，可改善胸悶、胸痛等癥狀。丹參是通之舒膠囊中的君藥，而丹參酮ⅡA是丹參的重要有效成分之一，因此，本試驗(yàn)用高效液相色譜法對(duì)該制劑中的丹參酮ⅡA進(jìn)行了含量測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)建立了一種HPLC法測(cè)定其中丹參酮ⅡA含量，重現(xiàn)性好?？捎糜谠u(píng)價(jià)丹參酮ⅡA及制劑中該成分的指標(biāo)。

1 儀器與試劑

美國(guó)Agilent 1100色譜儀；丹參酮ⅡA對(duì)照品 (中國(guó)生物制品檢定所，供含量測(cè)定用）；甲醇為色譜純；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取丹參酮ⅡA對(duì)照品適量，加甲醇溶解，在 200～400nm波長(zhǎng)掃描，結(jié)果本品在270.0nm處有最大吸收，故選擇270nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18（4.6mm×250 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇―水（73:27）；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm；進(jìn)樣量：5μl。理論板數(shù)按丹參酮ⅡA峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取丹參酮ⅡA對(duì)照品10.01mg，置50ml棕色量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密量取對(duì)照品貯備液5ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（每1ml中含丹參酮ⅡA 40.04μg）。

2.4 供試品溶液的制備

取本品10粒，傾出內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，取 1g，精密稱定，精密加入甲醇 25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1線性關(guān)系考察

分別精密量取丹參酮ⅡA對(duì)照品貯備液1ml、3ml、5ml、7ml、9ml置 25ml棕色量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，照高效液相色譜法,分別量取5μl注入液相色譜儀,測(cè)定。以濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,方程為 Y=75.506X+7.15，r=0.9995。結(jié)果表明,丹參酮ⅡA在8.008～72.072μg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.5.2精密度試驗(yàn)

取同一樣品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得丹參酮ⅡA的峰面積RSD=1.1%。

2.5.3重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批通之舒膠囊，按2.4項(xiàng)下的方法操作，平行制備6份樣品溶液，依樣品測(cè)定法測(cè)定，計(jì)算丹參酮ⅡA的含量，結(jié)果RSD=1.5%。

2.5.4穩(wěn)定性試驗(yàn)

將同一樣品溶液室溫條件下放置，分別于 0、2、4、6、8、12h 按上述色譜條件測(cè)定樣品液峰面積，并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果RSD=1.6%。表明樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.5回收率試驗(yàn)

采用加樣回收法，取已知含量的通之舒膠囊10粒，添加一定量的丹參酮ⅡA對(duì)照品溶液，按2.4項(xiàng)下的方法操作，制備成加樣回收供試溶液，依樣品測(cè)定法測(cè)定。結(jié)果，丹參酮ⅡA的加樣回收率為99.28%，RSD=1.1%（n=6）。

2.6 樣品測(cè)定

取三批樣品，按2.4項(xiàng)下的方法操作，制成供試品溶液，在上述色譜條件下，分別精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5μl注入液相色譜儀，依法測(cè)定。結(jié)果三批樣品含量均符合規(guī)定。

3 討論

3.1通過(guò)比較甲醇、10%甲醇、15%甲醇、50%甲醇為提取溶劑，結(jié)果采用甲醇作為提取溶劑效果最好。同時(shí)考察了不同超聲處理時(shí) 間 20min、30min、40min， 結(jié) 果 表 明 超 聲30min后丹參酮ⅡA基本提取完全，故選擇提取方法為超聲30min。

3.2在測(cè)定丹參酮ⅡA含量時(shí)，曾分別考察了不同比例的甲醇―水（70：30）、甲醇―水（73：27）、甲醇―水（80：20）、甲醇―水―冰醋酸（70：29：1），結(jié)果以甲醇―水（73：27）為流動(dòng)相時(shí)溶液分離效果最佳。

通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)測(cè)定通之舒膠囊中丹參酮ⅡA的含量，結(jié)果表明此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、穩(wěn)定性與重復(fù)性好，可有效控制產(chǎn)品質(zhì)量。

[1]胡少娟，HPLC測(cè)定心可寧膠囊中丹參酮ⅡA 的含量，海峽藥學(xué)，2009，10（21）:69-70。

[2]黃烽，HPLC法測(cè)定丹舒膠囊中丹參酮ⅡA的含量，藥物鑒定，2009,18（3）:9。