李 瑞 夏秋瑜 趙松林 陳衛(wèi)軍 唐敏敏

(中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院椰子研究所1，文昌 571339)

(海南省椰子深加工工程技術(shù)研究中心2，文昌 571339)

脫脂油棕果肉醇提物體外抗氧化活性研究

李 瑞1，2夏秋瑜1，2趙松林1，2陳衛(wèi)軍1，2唐敏敏1，2

(中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院椰子研究所1，文昌 571339)

(海南省椰子深加工工程技術(shù)研究中心2，文昌 571339)

本研究主要分析了脫脂嫩油棕果醇提物(YNE)及脫脂成熟油棕果醇提物(MNE)的體外抗氧化活性。結(jié)果表明，YNE清除DPPH·的能力顯著高于MNE，但二者的清除能力均顯著低于對(duì)照物Trolox、沒(méi)食子酸和BHT。YNE與Fe2+的絡(luò)合能力顯著高于MNE及3種對(duì)照物，MNE與Fe2+的絡(luò)合能力顯著高于Trolox，但與沒(méi)食子酸及BHT無(wú)顯著差異。在多酚含量為0.6 mg/mL以下，YNE清除ABTS+·的能力高于MNE，但當(dāng)多酚含量在0.6 mg/mL以上時(shí)二者無(wú)顯著差異。MNE及YNE清除OH·的能力相當(dāng)，均顯著高于3種對(duì)照物。MNE對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制能力顯著高于YNE，但都顯著低于3種對(duì)照物。

脫脂油棕果肉 醇提物 體外抗氧化活性

油棕(Elaeis guineensis Jacq.)屬棕櫚科(Arecaceae)單子葉植物，是熱帶地區(qū)重要的木本油料作物之一［1］，也是世界上生產(chǎn)效率最高的產(chǎn)油植物，其畝產(chǎn)油量是花生的7～8倍、大豆的9～10倍，所以被人們譽(yù)為“世界油王”。油棕用途廣泛，經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，其主要產(chǎn)品是從果肉壓榨出的棕櫚油和從果仁壓榨出的棕櫚仁油，目前的研究熱點(diǎn)也主要集中在棕櫚油和棕櫚仁油［2－4］，而對(duì)脫脂后的油棕果肉研究較少。在油棕主產(chǎn)國(guó)，脫脂油棕果肉主要作為燃料利用，造成極大的浪費(fèi)。

本文對(duì)脫脂成熟油棕果肉醇提物(MNE)及脫脂嫩油棕果肉醇提物(YNE)中多酚、黃酮含量進(jìn)行了分析和比較，并初步探討了油棕果肉醇提物體外抗氧化活性，以期對(duì)油棕果肉的開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

油棕:中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院椰子研究所椰子大觀園。

1.2 主要試劑與儀器

DPPH、Ferrozine鐵試劑、Trolox、沒(méi)食子酸、BHT、2－脫氧核糖、抗壞血酸、卵磷脂、福林酚試劑、蘆丁:美國(guó)Sigma公司;其他試劑均為分析純。

US－32R冷凍高速離心機(jī):德國(guó)Hettich Zentrifugen公司;Uvline 9400型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì):德國(guó)Schott儀器公司。

1.3 方法

1.3.1 脫脂油棕果肉提取液的制備

將油棕果肉削下，40℃干燥，磨碎，過(guò)40目篩，稱重。將成熟油棕果肉及嫩油棕果肉按照料液比1∶5(m/V)用正己烷提取數(shù)次，將棕櫚油充分提取，收集上層液體。將脫脂后的30 g嫩的及30 g成熟的油棕果肉分別用無(wú)水乙醇提取3次，每次料液比為1∶5(m/V)，分別合并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，二者均用無(wú)水乙醇定容至250 mL，備用。

1.3.2 多酚含量測(cè)定

采用福林酚試劑法測(cè)定多酚含量。100 μL樣品加入2.0%Na2CO32.0mL，在室溫下放置2min，加入100 μL福林酚試劑，反應(yīng)繼續(xù)保持30 min，在720 nm測(cè)定吸光度［5］。多酚含量標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。

圖1 多酚含量標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.3.3 黃酮含量測(cè)定

分別取醇提物各1 mL，用無(wú)水乙醇定容至5 mL，加入0.3 mL Na2NO2(5%)溶液，混合均勻后靜置5 min，加0.3 mL AlCl3(10%)溶液，混勻后靜置6 min，加4 mL 1 mol/L NaOH 溶液，再加入0.4 mL 30%乙醇溶液使總體積為10 mL，混勻后靜置10 min，在510 nm處測(cè)定吸光值。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2所示。

圖2 蘆丁含量標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.3.4 對(duì)DPPH·清除率的測(cè)定

200 μL 樣品中添加2.8 mL 0.1 mol/L 的 DPPH溶液，在暗處放置30 min，在517 nm測(cè)定吸光值［5］。

DPPH·清除率=(1－A樣品/A模型)×100%

1.3.5 與Fe2+絡(luò)合能力的測(cè)定

取50 μL樣品與試管中，加入1 mol/L FeSO4溶液 25 μL，5 mmol/L 的鐵試劑溶液 50 μL，室溫下反應(yīng)10 min后用甲醇溶液定容至3 mL，在562 nm處測(cè)定吸光度［6］。

與Fe2+絡(luò)合率 =(1－A樣品/A模型)×100%

1.3.6 對(duì)ABTS+·清除能力的測(cè)定

用蒸餾水配置7 mmol/L的ABTS溶液和140 mmol/L的K2S2O8溶液，分別取50 mL ABTS溶液和880 μL K2S2O8溶液混合(K2S2O8的最終濃度約為2.45 mmol/L)，混合液使用前在常溫下暗處放置12 h以上，使用前用甲醇或無(wú)水乙醇稀釋，使吸光度在734 nm處為0.70 ±0.02，得到 ABTS+·工作液。

取新制備的ABTS+·溶液3 mL，添加0.5 mL樣品溶液，在室溫下放置30 min，使其反應(yīng)，然后測(cè)定734 nm處的吸光值，以不加樣品的試管為空白管，按以下公式計(jì)算樣品對(duì)ABTS+·的清除率［5］:

ABTS+·清除率 =(1－A樣品/A空白)×100%

1.3.7 對(duì)OH·清除能力的測(cè)定

采用2－脫氧核糖法。在1.34 mL磷酸鹽緩沖溶液中(0.01 mol，pH 7.4)加入28 mmol的2 －脫氧核糖溶液0.3 mL，28 mmol的雙氧水0.3 mL，2.5 mmol的三氯化鐵溶液 30 μL，1 mmol 的 EDTANa20.3 mL，0.1 mL的樣品溶液。添加10 mmol抗壞血酸30 μL引發(fā)反應(yīng)，37℃水浴1 h，加入1%的硫代巴比妥酸溶液0.3 mL，28%的三氯乙酸30 μL。100 ℃水浴 20 min，冷卻后在532 nm處測(cè)吸光率。模型管用乙醇代替樣品，用BHT，Trolox，沒(méi)食子酸做對(duì)照，每組3 個(gè)重復(fù)［7］。

對(duì)OH·的清除率=(1－A樣品/A模型)×100%

1.3.8 對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化抑制作用的測(cè)定

脂質(zhì)體的制備:稱取80 mg卵磷脂溶入20 mL 0.05 mol/L(pH=7.4)的磷酸緩沖液中，在超聲發(fā)生器中處理30 min(常溫，40 Hz)，所得液體為單層小體積脂質(zhì)體，置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化抑制作用的測(cè)定:在試管中加入200 μL脂質(zhì)體溶液，100 μL不同濃度的樣品溶液，混勻，加入50 μL 50 mmol/L的FeSO4溶液，用磷酸緩沖液補(bǔ)足3 mL，模型管不加樣品溶液，空白管不加FeSO4溶液，然后將空白管、模型管和樣品管一同置于37℃水浴溫浴40 min，每5 min振搖一次。溫浴完成后，各管加入10%TCA 1.0 mL，0.8%TBA 1 mL，混勻，置于100℃水浴中加熱15 min，冷卻后在5 000 r/min離心10 min，取上清液在532 nm測(cè)定吸光度［8］。

脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制率=(1－A樣品/A模型)×100%

1.3.9 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用Excel和SPSS13.0軟件包處理，組間比較采用單因素方差分析，數(shù)據(jù)間的差異性在P＜0.05水平進(jìn)行比較，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(珋x±s)的形式表示。

2 結(jié)果與討論

2.1 MNE及YNE的全波長(zhǎng)掃描圖譜

由圖3可見(jiàn)，MNE在230 nm和270 nm處均有最大吸收峰，YNE在410 nm和665 nm處也有吸收峰。這說(shuō)明在MNE和YNE中均含有不同的組分。

圖3 MNE及YNE全波長(zhǎng)掃描圖譜

2.2 多酚及黃酮含量

由表1可知，MNE中的多酚含量高于YNE，但是黃酮含量低于YNE。這是因?yàn)橛妥毓诎l(fā)育過(guò)程中各成分都在不斷的變化。

表1 MNE及YNE的多酚及黃酮含量

2.3 清除DPPH·的能力

由圖4可見(jiàn)，YNE清除DPPH·的能力顯著高于MNE，這可能是因?yàn)閅NE中的黃酮含量較高，而黃酮具有較強(qiáng)的抗氧化能力;但二者的清除能力均顯著低于對(duì)照物Trolox、沒(méi)食子酸和BHT。

圖4 MNE及YNE清除DPPH·的能力(0.4 mg/mL)

2.4 與Fe2+的絡(luò)合能力

由圖5可見(jiàn)，YNE與Fe2+的絡(luò)合能力顯著高于MNE及3種對(duì)照物，這可能與YNE中黃酮含量較高有關(guān)。MNE與Fe2+的絡(luò)合能力顯著高于Trolox，但與沒(méi)食子酸、BHT無(wú)顯著差異。

圖5 MNE及YNE與Fe2+的絡(luò)合能力(0.4 mg/mL)

2.5 清除ABTS+·的能力

對(duì)ABTS+·清除率的Trolox當(dāng)量標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.992 0x+1.051 2，R2=0.998 4，將 樣 品 對(duì)ABTS+·清除率換成Trolox當(dāng)量濃度(TEAC值)，結(jié)果見(jiàn)圖6。由圖6可見(jiàn)，在多酚含量為0.6 mg/mL以下時(shí)，YNE的TEAC值顯著高于MNE，但當(dāng)多酚含量在0.6 mg/mL以上時(shí)無(wú)顯著差異。

圖6 MNE及YNE清除ABTS+·的能力

圖7 MNE及YNE清除清除OH·的能力(0.4 mg/mL)

2.6 清除OH·的能力

由圖7可見(jiàn)，MNE及YNE清除OH·的能力相當(dāng)，且均顯著高于對(duì)照物。而OH·是體內(nèi)最活潑的活性氧，可導(dǎo)致許多病例變化［9］，因此，作為一種植物提取物，MNE及YNE都具有良好的抗氧化性，在清除OH·能力方面優(yōu)于人工合成的抗氧化劑BHT。

2.7 對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制能力

由圖8可見(jiàn)，MNE對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制能力顯著高于YNE，但都顯著低于對(duì)照物。

圖8 MNE及YNE對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制能力(0.2 mg/mL)

3 結(jié)論

3.1 MNE在230 nm和270 nm處均有最大吸收峰，YNE在410 nm和665 nm處也有吸收峰。

3.2 MNE中的多酚含量高于YNE，但是黃酮含量低于YNE。3.3 YNE清除DPPH·的能力、與Fe 的絡(luò)合能力顯著高于MNE。在多酚含量為0.6 mg/mL以下時(shí)，YNE清除ABTS+·的能力高于MNE，但當(dāng)多酚含量在0.6 mg/mL以上時(shí)無(wú)顯著差異。MNE及YNE清除OH·的能力相當(dāng)。MNE對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制能力顯著高于YNE。

［1］Ftefan Jouannic，Xavier Argout，F(xiàn)rédéric Lechauve，et al.A-nalysis of expressed sequence tags from oil palm(Elaeis guineensis)［J］.FEBS Letters，2005，579(12):2709 －2714

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［9］龐戰(zhàn)軍，周玫，陳瑗.自由基醫(yī)學(xué)研究方法［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2000:2－3.

Study on In－vitro Antioxidant Property of Defatted Oil Palm Meat

Li Rui1，2Xia Qiuyu1，2Zhao Songlin1，2Chen Weijun1，2Tang Minmin1，2
(Coconut Research Institute of Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences1，Wenchang 571339)
(Engineering and Technology Research Center for Coconut Deep Process in Hainan Province2，Wenchang 571339)

The in－vitro antioxidant activity of young oil palm meat ethanol extract(YNE)and mature oil palm meat ethanol extract(MNE)were investigated.The results showed that the scavenging ability to DPPH radical of YNE was remarkably higher than MNE's，but both YNE's and MNE's DPPH radical scavenging ability were lower than Trolox，gallic acid and BHT.The complexation ability to ferrous iron of YNE was obviously higher than MNE and the contrasts，of which MNE was remarkably higher than Trolox，but lower than gallic acid and BHT.The scavenging rate to ABTS radical of YNE was higher than MNE when the polyphenol concentration was lower than 0.6 mg/mL and there was no obvious difference when the polyphenol concentration was above 0.6 mg/mL.The scavenging rate to OH radical of YNE and MNE was comparable，both of which were lower than 3 contrasts'.The lipid peroxidation inhibition ability of MNE was much higher than YNE，but obviously lower than 3 contrasts'.

defatted oil palm meat，ethanol extract，in vitro antioxidant property

TS229

A

1003－0174(2011)07－0095－04

海南省自然科學(xué)基金(309058)，中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)(16300120 11004－7)

2010－08－19

李瑞，女，1981年出生，助理研究員，碩士，熱帶油料及油脂化工

趙松林，男，1965年出生，研究員，農(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏