黎代余，黃麗鳳，陳鴻平，向楚兵，劉友平，*

（1.成都中醫(yī)藥大學藥學院，四川成都611137；2.中藥材標準化教育部重點實驗室，四川成都611137）

不同產(chǎn)地大花紅景天有效成分的含量測定研究

黎代余1，2，黃麗鳳1，2，陳鴻平1，2，向楚兵1，2，劉友平1，2，*

（1.成都中醫(yī)藥大學藥學院，四川成都611137；2.中藥材標準化教育部重點實驗室，四川成都611137）

目的：通過測定西藏、四川、云南三省大花紅景天藥材中紅景天苷、多糖、多酚的含量，為合理開發(fā)利用大花紅景天資源及建立大花紅景天GAP基地提供理論依據(jù)。方法：采用HPLC測定紅景天苷含量，硫酸-苯酚法測定多糖含量，三氯化鐵-鐵氰化鉀法測定多酚含量。結(jié)果：西藏產(chǎn)大花紅景天藥材中紅景天苷、多糖、多酚平均含量分別為：1.39%、4.83%、5.71%；四川產(chǎn)大花紅景天藥材中紅景天苷、多糖、多酚平均含量分別為：1.32%、4.78%、5.56%；云南產(chǎn)大花紅景天藥材中紅景天苷、多糖、多酚平均含量分別為：1.27%、4.76%、5.51%。結(jié)論：西藏產(chǎn)大花紅景天藥材質(zhì)量最優(yōu)，西藏最適宜大花紅景天生長。

大花紅景天，紅景天苷，多糖，多酚，不同產(chǎn)地

大花紅景天［Rhodiolcrenulata（Hook.f.et Thomx.）H.Ohba］來源于景天科（Crassulaceae）景天屬（Rhodiola）植物，其具有悠久的藥用歷史，主要用于滋補元氣，被譽為“高原人參”［1］?，F(xiàn)代藥理學研究表明，紅景天中所含的紅景天苷、多糖、多酚類成分具有抗疲勞、耐缺氧［2］、防放射［3-4］、抗病毒［5］、雙向調(diào)節(jié)［6］、免疫調(diào)節(jié)［7］以及抗氧化等多種藥理作用。我國大花紅景天植物資源豐富，蘊藏量大［8-9］，主要分布于西藏、四川、云南等廣大的西部地區(qū)，具有很強的開發(fā)利用價值。本研究收集了西藏、四川、云南三省的大花紅景天藥材，并分別采用HPLC法、硫酸-苯酚法、三氯化鐵-鐵氰化鉀法對紅景天苷、多糖、多酚進行了含量測定，目的是為了合理開發(fā)利用我國的大花紅景天資源，為我國大花紅景天藥材GAP基地建設及其相關醫(yī)藥工業(yè)生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

大花紅景天藥材 經(jīng)四川大學王署教授鑒定為大花紅景天［Rhodiol crenulata（Hook.f.et Thomx.）H.Ohba］的根和根莖；紅景天苷對照品 批號：110818-200404，中國藥品生物制品檢定所；葡萄糖分析純，成都化學試劑廠；乙腈 色譜純，美國Fisher公司；磷酸 分析純，成都金山化學試劑有限公司；濃鹽酸、濃硫酸、苯酚、三氯化鐵、鐵氰化鉀分析純，成都科龍化工試劑廠；水 為蒸餾水；其他試劑 均為分析純。

高效液相色譜儀（Shimadzu SPD-10aVP紫外檢測儀）、CLASS-VP工作站 日本島津；BP211D電子分析天平（十萬分之一）、BP121S電子分析天平（萬分之一） 德國Sartorius公司；BUG25-12超聲儀上海必能信超聲波有限公司；1100型分光光度計上海天美科學儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 紅景天苷的含量測定

1.2.1.1 色譜條件 色譜柱：HypersiL ODS（4.6mm× 200mm，5μm）；流動相：乙腈∶水（8∶92）；流速：1.0mL/ min；檢測波長：275nm；柱溫：30℃。

1.2.1.2 對照品溶液的配制 精密稱取紅景天苷對照品適量，加甲醇配制成含紅景天苷0.545mg/mL的溶液，即得。

1.2.1.3 供試品溶液的制備 取本品粉末（過三號篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10mL，密塞，搖勻，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

1.2.2 多糖的含量測定

1.2.2.1 5%苯酚試劑的配制 取苯酚100g，加鋁片0.1g和NaHCO30.05g，蒸餾，收集182℃餾分，稱取7.5g，加水150mL溶解，置棕色瓶內(nèi)放冰箱備用。

1.2.2.2 對照品溶液制備 精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖標準品，加水配制成葡萄糖102.32μg/mL的溶液，即得。

1.2.2.3 樣品溶液的制備 取大花紅景天粉末2.5g（過3號篩），精密稱定，置于圓底瓶中，加80%乙醇100mL回流提取1.5h，趁熱過濾，藥渣揮干，加蒸餾水100mL，回流1h，趁熱過濾，用15mL熱水洗滌燒瓶和藥渣3次，待冷卻后移入250mL容量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻，即得樣品溶液。

1.2.2.4 最大吸收波長的選擇 分別精密吸取對照品溶液0.8mL、供試品溶液0.6mL置于具塞試管中，加水至1.0mL，再分別加入5%苯酚溶液1.6mL，搖勻，然后加濃 H2SO47.0mL，充分搖勻，室溫放置25min。另取1.0mL水作同上平行操作，作為空白對照，在400～650nm之間掃描。

1.2.2.5 測定方法 紅景天多糖的精制：取大花紅景天藥材粉末100g，依次用250mL石油醚（60～90℃）、乙醚回流1.5h，取過濾后的殘渣，揮干溶劑；加入250mL 80%的乙醇回流1.5h，取過濾后的殘渣，揮干溶劑；加5倍量蒸餾水回流提取2次，每次1.5h，抽濾，合并濾液，減壓濃縮至一定體積，濃縮液加入等量的Sevag試劑除蛋白，反復進行5次；取上層液加無水乙醇使其含醇量達到80%，置于4℃冰箱中靜置過夜，再離心分離（4000r/min，10min），沉淀依次用無水乙醇、丙酮反復洗滌5次，于50℃減壓干燥至恒重，即得精制紅景天多糖。

換算因素的測定：精密稱取60℃干燥至恒重的大花紅景天多糖21.03mg置于100mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，即可。精密吸取0.6mL，按照“1.2.2.4”項操作，在所選定的最大波長處測定吸光度。按照下面公式計算換算因素f：

式中：W-稱取多糖的重量，μg；C-溶液中多糖液中葡萄糖單糖的重量，μg；D-多糖的稀釋倍數(shù)。計算得f=2.14。

樣品測定：精密吸取樣品溶液 0.6mL，按照“1.2.2.4”中方法在所選定的最大波長處測定吸光度。按照下面公式計算樣品中紅景天多糖的含量：

式中：C-樣品提取液中按標準曲線計算出的葡萄糖的量，μg；D-多糖的稀釋倍數(shù)；f-換算因素；W-樣品重量，g。

1.2.3 多酚的含量測定

1.2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸對照品，加入丙酮∶水（1∶1）配制成沒食子酸50μg/mL的溶液，即得。

1.2.3.2 供試品溶液的制備 取大花紅景天粉末0.5g，精密稱量，加入80mL丙酮∶水（1∶1），置水浴中微沸浸提30min后，趁熱抽濾，冷卻后定容至100mL。

1.2.3.3 最大吸收波長的選擇 分別精密吸取沒食子酸對照品溶液0.5mL、供試品溶液0.6mL置于25mL量瓶中，依次加入0.100mol/L三氯化鐵溶液0.5mL、0.008mol/L鐵氰化鉀溶液0.5mL和0.10mol/L鹽酸溶液0.5mL，定容，同時在25mL量瓶中加入0.100mol/L三氯化鐵溶液0.5mL、0.008mol/L鐵氰化鉀溶液0.5mL和0.10mol/L鹽酸溶液0.5mL，定容后得到空白溶液，在600～900nm之間掃描。

2 結(jié)果與討論

2.1 紅景天苷測定結(jié)果

2.1.1 線性關系的考察 分別精密量取對照品溶液2.5、5、10、12.5、15μL注入液相色譜儀，按前述色譜條件分別測定其峰面積。以對照品含量（C）為橫坐標，峰面積積分值（A）為縱坐標，繪制標準曲線。計算得回歸方程和相關系數(shù)見表1。

表1 紅景天苷、多糖、多酚的回歸方程

2.1.2 精密度實驗 精密吸取紅景天苷對照品溶液10μL，重復進樣測定3次，結(jié)果紅景天苷平均峰面積分別為 1160245、1159862、1200973，RSD分別為0.43%、0.98%、0.64%。

2.1.3 穩(wěn)定性實驗 取紅景天苷標準溶液2mL放置，分別在0、1、2、4、8、16h測定峰面積，進樣量10μL。測得峰面積的平均值為 1156785，RSD為0.67%。

2.1.4 重現(xiàn)性實驗 取大花紅景天樣品5份，每份0.5g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液后測定，進樣量10μL，測得紅景天苷的平均含量為1.34%，RSD為0.60%。

2.1.5 加樣回收實驗 取已知紅景天苷含量的大花紅景天樣品5份，每份0.25g，精密稱定后，精密加入紅景天苷對照品溶液4mg，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液后測定，進樣量10μL，計算得回收率為101.4%，RSD為2.27%。

2.1.6 藥材含量測定 稱取大花紅景天樣品10份，每份0.5g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液。分別精密吸取供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，計算紅景天苷含量。10批大花紅景天藥材紅景天苷含量見表2，圖1。

表2 10批大花紅景天藥材紅景天苷、多糖、多酚含量結(jié)果（%，n=3）

圖1 HPLC色譜圖

2.2 紅景天多糖的測定結(jié)果

2.2.1 最大吸收波長的選擇 結(jié)果表明，對照品溶液和供試品溶液在486nm處有最大吸收峰，故選擇486nm作為測定波長。

2.2.2 標準曲線的制備 精密移取對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL分別置具塞試管中，按“1.2.2.4”項下操作，在486nm處測定吸光度。以吸光度（A）為縱坐標，濃度（C）為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程和相關系數(shù)見表1。

2.2.3 精密度實驗 取葡萄糖對照品溶液0.6mL，按“1.2.2.4”項下操作，在486nm處測定吸光度，重復測定5次。結(jié)果吸光度分別為 0.481、0.479、0.486、0.479、0.483，RSD為0.30%。

2.2.4 穩(wěn)定性實驗 取葡萄糖標準溶液0.6mL，按“1.2.2.4”項下操作，在486nm處測定吸光度。在0、 10、30、60、120、240min測定，其吸光度分別為：0.477、0.481、0.479、0.474、0.485、0.480，RSD為0.37%。

2.2.5 重復性實驗 取大花紅景天同一樣品5份，每份2.5g，分別精密稱定，按照“1.2.2.4”項下操作，在486nm處測定吸光度。結(jié)果所測樣品平均含量為4.83%，RSD為1.44%。

2.2.6 加樣回收實驗 取已知多糖含量的藥材5份，每份約0.25g，精密稱定，分別精密加入紅景天多糖12mg，按照樣品溶液制備方法制備樣品，按照“1.2.2.4”項下方法，在486nm處測定吸光度，并以葡萄糖對照品溶液作對比測定。測得平均回收率為98.6%，RSD為1.15%。

2.2.7 藥材樣品測定 取各大花紅景天藥材樣品粉末各2.5g，精密稱定，加水至1.0mL，再分別加入5%苯酚溶液1.6mL，搖勻，然后加濃H2SO47.0mL，充分搖勻，室溫放置25min，以相應試劑為空白，在486nm處測定吸收度，并計算其含量，測定結(jié)果見表2。

2.3 多酚的含量測定結(jié)果

2.3.1 最大吸收波長的選擇 結(jié)果表明，對照品溶液和供試品溶液在738nm處有最大吸收峰，故選擇738nm作為測定波長。

2.3.2 標準曲線的制備 精密移取對照品溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8mL分別置于25mL容量瓶中，按照“1.2.3.3”項下方法，在738nm處測定吸光度。以吸光度（A）為縱坐標，濃度（C）為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程和相關系數(shù)見表1。

2.3.3 精密度實驗 取同一份沒食子酸對照品溶液，按照“1.2.3.3”項下方法，在738nm處測定吸光度，重復測定6次。吸光度分別為：0.561、0.562、0.561、0.559、0.564、0.562，RSD為0.17%。

2.3.4 穩(wěn)定性實驗 取沒食子酸標準溶液0.5mL，按“1.2.3.3”操作顯色，在 738nm處測定吸光度，每30min測定一次吸光度。吸光度分別為：0.567、0.561、0.565、0.558、0.560、0.566，RSD為0.37%。表明在3h內(nèi)吸光度基本保持恒定，穩(wěn)定性良好。

2.3.5 重復性實驗 取大花紅景天同一樣品5份，每份0.5g，分別精密稱定，按照“1.2.3.3”方法操作測定，在738nm處測定吸光度。所測樣品平均含量為5.55%，RSD為1.44%，表明供試品重復性良好。

2.3.6 加樣回收實驗 取已知多酚含量的藥材5份，每份約0.1g，精密稱定，分別精密加入沒食子酸5.6mg，按照樣品溶液制備方法制備樣品，按照“1.2.3.3”項下方法，在486nm處測定吸光度，并以葡萄糖對照品溶液作對比測定。測得平均回收率為96.1%，RSD為3.81%。

2.3.7 藥材樣品測定 取各大花紅景天藥材樣品粉末各0.5g，精密稱定，按照“1.2.3.3”方法操作，測定，以相應試劑為空白，在738nm處測定吸收度，并計算其含量，測定結(jié)果見表2。

3 討論

大花紅景天植物在我國集中地分布在西南和西北地區(qū)，其中，以西藏地區(qū)產(chǎn)量最大［8］，根據(jù)文獻記載，紅景天易受地形、地貌、土壤、氣候等各種自然條件影響，其分布與海拔高度有密切關系，多數(shù)種紅景天都分布在海拔2500～5000m之間，有些種分布高度達5000m以上，1700m以下幾乎沒有紅景天分布。從實驗結(jié)果看，三省的大花紅景天藥材紅景天苷含量均高于《中國藥典》2005年版一部中規(guī)定的紅景天苷含量（≥0.5%），但是，西藏所產(chǎn)的大花紅景天藥材中紅景天苷、多糖、多酚類成分的含量較四川、云南的高，而且成分穩(wěn)定，這可能與西藏地區(qū)海拔高度密切相關。而四川大花紅景天產(chǎn)地與西藏海拔高度、氣候條件相似，其大花紅景天藥材中的紅景天苷、多糖、多酚類成分的含量與西藏大花紅景天中的含量相近。由此可見，西藏是大花紅景天藥材最適宜的生長區(qū)。

［1］江林波.高原人參紅景天［J］.餐飲世界，2005（9）.

［2］佟力，席軍.紅景天苷的藥理作用研究進展［J］.中外醫(yī)療，2008，27：135-137.

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Determination of the active ingredient content of Rhodiola crenulata in different origins

LI Dai-yu1，2，HUANG Li-feng1，2，CHEN Hong-ping1，2，XIANG Chu-bing1，2，LIU You-ping1，2，*
（1.College of Chinese Materia Medica，Chengdu University of Traditional Chinese Medicine and Chinese Materia Medica，Chengdu 611137，China；2.Chinese Medicinal Standardization Lab，Chengdu 611137，China）

Objective：To provide a basis for development and to establish GAP base of Rhodiola crenulata resources，the contents of salidroside，polysaccharide，polyphenol of Rhodiola crenulata in Tibet，Sichuan and Yunnan provinces were determined.Methods：The content of salidroside，polysaccharide and polyphenol were determined by HPLC，sulfuric acid-phenol method and ferric chloride-potassium ferricyanide method，respectively.Results：The average concentrations of glycosides，polysaccharides and polyphenols of Rhodiola crenulata in Tibet were：1.39%，4.83%，5.71%.The average concentrations of glycosides，polysaccharides and polyphenols of Rhodiola crenulata in Sichuan province were：1.32%，4.78%，5.56%.The average concentrations of glycosides，polysaccharides and polyphenols of Rhodiola crenulata in Yunnan province were：1.27%，4.76%，5.51%.Conclusions：The best quality ingredient was the Rhodiola crenulata in Tibet，and the most suitable place for the growth of Rhodiola crenulata was Tibet.

Rhodiola crenulata；glycosides；polysaccharides；polyphenols；different origins

TS207.3

A

1002-0306（2011）02-0347-04

2009-11-09 *通訊聯(lián)系人

黎代余（1983-），男，在讀研究生，研究方向：中藥化學成分與質(zhì)量標準化研究。

“十一五”國家科技支撐計劃項目（2006BAI06A14-10）；質(zhì)檢公益項目（2007GYB215）。