王海燕，龍子江，袁 藝，徐 燕

（1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，安徽合肥230036；2.合肥工業(yè)大學(xué)，安徽合肥230009；3.安徽中醫(yī)學(xué)院藥理教研室，安徽合肥230038；4.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶與食品科技學(xué)院，安徽合肥230036）

皋茶急性毒性安全性評(píng)價(jià)研究

王海燕1，2，龍子江3，袁 藝1，徐 燕4

（1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，安徽合肥230036；2.合肥工業(yè)大學(xué)，安徽合肥230009；3.安徽中醫(yī)學(xué)院藥理教研室，安徽合肥230038；4.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶與食品科技學(xué)院，安徽合肥230036）

目的：通過(guò)1次大劑量給藥，觀察小鼠出現(xiàn)的毒性反應(yīng)及死亡情況，考察皋茶應(yīng)用的安全性。方法：依據(jù)GB15193-2003《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法》進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)，皋茶水提物小鼠灌胃給藥0.4mL/10g體重，灌胃給藥1次，藥后正常飼養(yǎng)，連續(xù)觀察14d。結(jié)果：皋茶水提物小鼠灌胃最大給藥量為22.8g浸膏/kg，相當(dāng)于臨床60kg成人擬定日用量275倍。結(jié)論：皋茶水提物口服毒性低，應(yīng)用較安全。

皋茶，急性毒性，安全性

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

皋茶 安徽舒城提供；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠，體重18～22g，雌雄各半，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SCXK（豫）2005-0001。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法［4-6］

1.2.1 皋茶水提物（浸膏）制備 取皋茶樣品250g，沸水三次浸提（各次茶水比為1∶20、1∶10、1∶10）；三次浸提時(shí)間分別為30、20、10min，用100目尼龍濾布擠出茶汁，脫脂棉過(guò)濾，合并三次浸提茶湯，減壓濃縮至膏狀。浸膏含量：2.75g生藥/g；擬定人用量：5g浸膏/d（相當(dāng)于13.75g生藥/d）。保存：4℃冰箱冷藏備用。

表1 皋茶水提物灌胃對(duì)雌性小鼠體重的影響（n=10，s）

表1 皋茶水提物灌胃對(duì)雌性小鼠體重的影響（n=10，s）

10 / 20.25±1.27 22.80±1.18 25.25±1.14皋茶水提物組14d空白對(duì)照組組別 動(dòng)物數(shù)（n） 劑量（g/kg） 體重（g）用藥前 用藥后7d 用藥后10 62.8 20.10±1.15 22.95±1.21 25.75±1.11

表2 皋茶水提物灌胃對(duì)雄性小鼠體重的影響（n=10，s）

表2 皋茶水提物灌胃對(duì)雄性小鼠體重的影響（n=10，s）

組別 動(dòng)物數(shù)（n） 劑量（g/kg） 體重（g）用藥前 用藥后7d 用藥后14d

表3 皋茶水提物灌胃對(duì)雌性小鼠食量的影響（n=2籠，s）

表3 皋茶水提物灌胃對(duì)雌性小鼠食量的影響（n=2籠，s）

注：每籠有5只小鼠，表4同。

組別 籠數(shù)（n） 劑量（g/kg） 食量（g/籠）用藥前 用藥后7d 用藥后14d

表4 皋茶水提物灌胃對(duì)雄性小鼠食量的影響（n=2籠s）

表4 皋茶水提物灌胃對(duì)雄性小鼠食量的影響（n=2籠s）

?

1.2.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)預(yù)實(shí)驗(yàn) 取體重18～22g小鼠20只，雌雄各半，禁食（不禁水）8h后，將皋茶浸膏用蒸餾水配制成五種濃度分別為57%（最大濃度）、50%、45%、40%、35%的藥液，每種濃度取4只小鼠進(jìn)行灌胃給藥1次，0.4mL/10g體重（最大給藥容積），藥后各組小鼠正常飼養(yǎng)，觀察藥后動(dòng)物全身反應(yīng)及死亡情況。

1.2.3 正式實(shí)驗(yàn)

1.2.3.1 動(dòng)物分組 因預(yù)實(shí)驗(yàn)沒(méi)有測(cè)出皋茶水提物小鼠灌胃給藥的最小死亡量，無(wú)法測(cè)得LD50值，故改測(cè)其最大耐受量。取體重18～22g小鼠40只，雌雄各半，適應(yīng)性飼養(yǎng)5d后，按照性別和體重均分為兩組：空白對(duì)照組和藥物組（皋茶水提物組），每組20只，雌雄各半。

1.2.3.2 藥液的配制 臨用前，用蒸餾水將皋茶水提物浸膏配制成濃度為57%的藥液（相當(dāng)于1.57g生藥/mL）備用。

1.2.3.3 給藥方法 將小鼠禁食（不禁水）8h后，藥物組各鼠分別灌胃上述濃度為57%的藥液（最大濃度）0.4mL/10g體重（最大容積），空白對(duì)照組灌胃等容量的蒸餾水，給藥1次，藥后正常飼養(yǎng)，連續(xù)觀察14d。

1.2.3.4 觀察指標(biāo) 體重和耗食量：用藥前及藥后7、14d稱(chēng)各鼠體重及日食量一次；毒性癥狀觀察：觀察小鼠的外觀（a.毛發(fā)色澤，是否平順或聳毛；b.皮膚顏色，是否有紅腫、瘀紫、皮疹；c.眼、鼻、口腔是否有異樣分泌物或嘔吐物；d.呼吸道反應(yīng)，是否有咳嗽、噴嚏或哮喘）、行為活動(dòng)（a.鎮(zhèn)靜或興奮；b.四肢活動(dòng)；c.是否有抽搐、強(qiáng)直或扭體反應(yīng)）、糞便性狀（a.顏色；b.成形、半成形或稀便）等全身反應(yīng)狀況及死亡情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)1.2.2預(yù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：小鼠連續(xù)觀察7d，無(wú)任何異常反應(yīng)和死亡現(xiàn)象。

2.2 正式實(shí)驗(yàn)結(jié)果

藥后及停藥觀察期間，各組小鼠進(jìn)食、飲水均正常，體重呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯差異（P＞0.05），詳見(jiàn)表1～表4。各組小鼠外觀特征基本正常，毛發(fā)色澤正常，有少數(shù)動(dòng)物出現(xiàn)聳毛現(xiàn)象，皮膚顏色粉紅正常，耳、眼、口、鼻未見(jiàn)異樣分泌物，呼吸道反應(yīng)正常，未見(jiàn)咳嗽、哮喘及噴嚏現(xiàn)象，四肢活動(dòng)、步態(tài)正常，灌胃后24h內(nèi)，藥物組多數(shù)動(dòng)物排出棕黑色軟糞便，24h以后糞便逐漸恢復(fù)正常，呈灰褐色，顆粒狀成形糞便，無(wú)一動(dòng)物死亡，詳見(jiàn)表5和表6。

3 結(jié)論

皋茶水提物小鼠灌胃最大給藥量為22.8g浸膏/kg，相當(dāng)于62.8g生藥/kg（按照公斤體重折算，相當(dāng)于臨床60kg成人擬定日用量（5g浸膏/d，相當(dāng)于13.75g生藥/d）的275倍；按照體表面積折算，相當(dāng)于臨床成人日用量的35倍）；實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：皋茶水提物口服給藥毒性較低，應(yīng)用較安全。

［1］方文培.中國(guó)植物志［M］.第46卷.北京：科學(xué)出版社，1981.

［2］方文培.中國(guó)槭樹(shù)科的修訂［J］.植物分類(lèi)學(xué)報(bào)，1966，11（2）：139.

［3］徐延志.槭樹(shù)科的地理分布［J］.云南植物研究，1996，18（1）：43-50.

［4］李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.第二版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006：1001-1007.

［5］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：1131.

［6］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部GB111593-94.食品安全毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法［S］.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，1995.

Acute toxicity evaluation of Gaocha

WANG Hai-yan1，2，LONG Zi-jiang3，YUAN Yi1，XU Yan4
（1.College of Life Science，Anhui Agricultural University，Hefei 230036，China；2.Hefei University of Technology，Hefei 230009，China；3.Anhui University of Traditional Chinese Medicine，Hefei 230038，China；4.College of Tea&Food Science and Technology，Anhui Agricultural University，Hefei 230036，China）

Objective：Through once large dose feeding Gaocha and observing the rapid toxicity effect on the mice， the safety of Gaocha was studied.Methods：The test of acute toxicity according to GB15193-2003（Appraisal process and Methods of Toxicity of Food Safety）was carried out to research the toxicology of food of the Gaocha. The mice were feed Gaocha with 0.4mL/10g each time，after that were feed normal.Then observed and recorded in the next 14d.Results：There was no evident poisoning symptom or any death for animals after test on the young mice of different sex which had eaten the Gaocha with 22.8g/kg.Be equivalent to that 275 times of adult drink amounts a day.Conclusion：It is concluded that the Gaocha is highly safe for drinking.

Gaocha；acute toxicity；safety

TS201.4

A

1002-0306（2011）02-0316-03

皋茶是苦茶槭嫩芽葉經(jīng)一系列加工后，制成的一種代茶飲料?？嗖栝剩鄺l槭）（Acer.Ginnala. Maxim），屬植物界被子植物亞門(mén)（Angiosperms），雙子葉植物綱（Dicotyledoneae），槭樹(shù)科（Aceraceae），槭屬（AcerL），落葉小喬木或灌木，是我國(guó)廣大林區(qū)一種有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的野生藥用植物資源。它既是良好的庭園和街道觀賞樹(shù)木、優(yōu)質(zhì)纖維樹(shù)種、栲膠原料、黑色染料，又是具有治病健身之藥效的新型保健茶飲料皋茶的原料［1-3］。近年來(lái)，皋茶以其獨(dú)特的品質(zhì)和保健功能作為一種非茶屬天然植物飲料逐漸在國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上走俏，在現(xiàn)代商品市場(chǎng)上嶄露頭角。皋茶資源極為豐富，因基礎(chǔ)研究不足，限制了其開(kāi)發(fā)力度，目前對(duì)皋茶的藥理功能研究甚少，且迄今未見(jiàn)其毒理學(xué)研究報(bào)告，本文對(duì)皋茶急性毒性進(jìn)行了研究，為進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)新型保健飲料提供了基礎(chǔ)研究依據(jù)，同時(shí)為皋茶的資源開(kāi)發(fā)利用（食品和醫(yī)藥領(lǐng)域）奠定初步基礎(chǔ)研究，潛在經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益明顯。

2010-08-13

王海燕（1977-），女，講師，研究方向：植物學(xué)教學(xué)科研及天然產(chǎn)物開(kāi)發(fā)與研究。

高校省級(jí)優(yōu)秀青年人才基金重點(diǎn)項(xiàng)目（2010SQRL061ZD）。

表6 皋茶水提物灌胃對(duì)小鼠死亡情況的影響